中药元宝草抗抑郁作用研究

杨代晓,梁宇恒,何炽明,谭丽容,梁旭霞,张磊

(广东省生物制品与药物研究所,广东 广州 510440)

元宝草,又名大叶对口莲、对月草等,是藤黄科金丝桃属的多年生草本植物,民间以全草入药,在我国的陕西、湖南、湖北、江西、江苏、四川等地分布广泛,具有丰富的资源。石金城等[1]研究发现了元宝草正丁醇和水层部位有较好的抗抑郁活性,但较少有关于元宝草其他提取工艺进行药效学的研究,且未有使用大鼠进行慢性不可预知性应激模型进行元宝草抗抑郁作用的研究。故本研究通过选择慢性不可预知性应激模型对元宝草的药物效果进行评价,为抗抑郁中药元宝草的作用研究提供参考。

1 实验材料

1.1 实验药材本实验中,实验所用药材元宝草产地为河北保定,购自河北安国药材公司,此药材经鉴定为藤黄科元宝草(HyperipumsampsoniiHance)的全草(由军事医学科学院李彬副研究员鉴定)。参考有关文献选择本研究的提取方法如下[2]：70% 的乙醇,60 ℃的提取温度,料液比为20倍的乙醇用量,提取3次,1.5 h每次,把滤液合后制备成干粉,于4 ℃冰箱保存待用,得率为12.11%。

1.2 实验动物实验动物为25只雄性SD (sprague dawley)大鼠,清洁级(200±20)g,由军事医学科学院实验动物中心提供,许可证号：SCXK(军) 2012-0004。所有动物均单笼进行饲养,自由饮食、饮水,喂养1周,光照/黑暗=12 h/12 h,温度范围为(20±2)℃,湿度范围为30%±10%。大鼠适应1周后进行实验。

1.3 实验试剂和仪器0.9%生理盐水(石家庄四药有限公司);恒佳DT1001A电子天平(常熟佳衡天平仪器有限公司);LGJ-25C冷冻干燥机(北京四环科学仪器厂);TGL-16B型高速离心机(上海安亭科学仪器厂)。

2 实验方法

2.1 动物分组及处理大鼠进行适应一周后随机分组,平均分5组,每组5只,分别为空白对照组、元宝草高、中、低剂量组(720、360、180 mg·kg-1提取物)和模型组,除空白对照组以外,其余各组均通过慢性不可预见性刺激实验进行造模,持续造模4周。造模同时给药,元宝草药物干粉用生理盐水配制成相应剂量的溶液,并分别对元宝草高、中、低剂量组进行灌胃,1 mL/只,模型组和空白对照组灌胃相同体积的生理盐水,连续4周。 实验同时,每周进行大鼠行为学绝望实验(包括强迫游泳实验和悬尾实验),持续28 d。

有研究表明[3],为了保证动物的身体状况保持在较理想的条件,应在上午对动物的体重进行称量并进行行为学测试。

2.2 慢性不可预见性刺激实验每日随机选取以下刺激中的任一种至两种,每种刺激方式不连续出现：①潮湿垫料和倾斜45°;②昼夜颠倒(24 h);③夹尾(5 min);④禁食(24 h);⑤禁水(24 h);⑥束缚应激(6 h);⑦热刺激(45 ℃,5 min);⑧陌生异常物品(如碎布片、塑料杯、木勺等)[4]。

2.3 行为学测试悬尾测试(tail suspension test,TST)：离大鼠尾尖大约3 cm处用悬尾钩进行固定,使大鼠竖直倒挂在自制的悬尾装置上并与桌面保持约5 cm的距离,悬尾装置仅一面可观察,其余均使用黑板遮蔽,且在大鼠可触碰范围内无可支撑物,实验环境保持安静,悬挂6 min并累计后 5 min内大鼠的不动时间为失望时间[5]。

强迫游泳测试(forced swimming test,FST)：取高60 cm、直径25 cm的圆柱形玻璃缸,装入温度为(25±2.0)℃的水,保持水位45cm高,使得大鼠置于水缸中后可以保持自然伸展的状态,尾巴不会触碰缸底。实验过程中,用黑布包绕玻璃缸仅留观察面,实验环境保持安静,测试6 min取后5 min 对大鼠的漂浮不动时间进行计算[6]。

2.4 数据统计分析将体重以及行为学测试等的数据在SPSS 17.0 数据统计软件中进行处理,组间进行方差的分析。若方差齐,多组间比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVA);若方差不齐,用Wilcoxon秩和检验,以P<0.05表示组间有显著统计学差异,P<0.01表示组间有极显著统计学差异,最终的结果均按照Mean±SD来表示。

3 实验结果

3.1 大鼠体重变化情况实验开始时,对各组大鼠的体重进行比较后发现无显著差异(P>0.05);实验开始后,各组大鼠与空白对照组比较,体重均有不同程度的下降,模型组的体重下降的更明显。元宝草高、中、低剂量组与模型组比较体重均上升,且元宝草高、中剂量组在第4周比模型组体重明显增加,差异比较显著,具有统计学意义(P<0.05),结果见表1和图1。

图1 各组大鼠体重变化情况

表1 各组大鼠体重变化情况(Mean±SD)

3.2 大鼠悬尾测试变化情况悬尾测试过程中,大鼠进行挣扎来克服不正常的体位,但是挣扎活动到一定程度后会有间断性的不动时间,表明了大鼠的失望状态,模拟了人类抑郁的状态。由实验结果知,模型组大鼠在TST中,较空白对照组有极显著的延长不动时间的表现(P<0.01)。给予元宝草高、中剂量组的大鼠与模型组比较能显著的缩短不动时间,差异有比较显著的变化(P<0.05),表明元宝草有抗抑郁的作用,而元宝草低剂量组在缩短不动时间时的效果不明显(P>0.05),实验结果见表2和图2。

图2 各组大鼠悬尾测试中不动时间结果

表2 TST实验中不动时间变化情况 (Mean±SD,n=5)

3.3 大鼠强迫游泳测试变化情况强迫游泳测试中大鼠的不动状态可以表明动物的失望行为,模拟人类的抑郁状态。在强迫游泳模型中,元宝草高、中剂量组可以显著缩短大鼠的不动时间,差异比较具有统计学意义(P<0.05),表明元宝草可以有抗抑郁的作用,实验结果见表3和图3。

图3 各组大鼠强迫游泳测试中不动时间结果

表3 FST实验中不动时间变化情况(Mean±SD)

4 讨论

动物模型是疾病病理及药理机制等研究的基础,可较好的模拟人类的疾病状态,指导人们对药物的研究。模型的选择要与临床患者的病因相似,抑郁症患者最理想的是应激抑郁模型,应激抑郁模型主要有慢性轻度不可预知应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)抑郁模型以及慢性束缚应激(chronic restraint stress,CRS)抑郁模型[7-8]。慢性束缚应激模型对机体的刺激没有损伤性,而且和身心性的疾病有一致的致病原因;慢性不可预知性轻度应激模型可持续时间长,并有较高的有效性,可解决其他模型不能解决的问题,所以是现在国内外专家较为认可的模型[9]。故本研究用慢性不可预知性应激模型来模拟动物的抑郁状态。

元宝草作为一种传统中药材,收录于《全国中草药汇编》,据《本草从新》《本草纲目拾遗》《百草镜》中的记载具有凉血止血、活血调经、清热解毒、祛风通络的作用。元宝草味微苦、性寒,用于治疗吐血、小孩儿高热、风湿痹痛、痢疾、咔血、外伤出血、乳腺炎、蛇咬伤、烧伤、月经不调等[10]。元宝草是一味历史悠久的中药,在民间得到广泛使用,含有多环多异戊烯基间苯三酚衍生物、萘骈双蒽酮类、类黄酮类、挥发油、二苯甲酮类、蒽醌等化学成分,具有抗癌、抗抑郁、抗肿瘤、抗炎、抗病毒及抗菌等作用,不同产地的元宝草化学成分也有一定的差异,各类化合物结构多样,且生物活性也是多样化,具有广泛的开发前景[11]。

FST和TST被广泛用于评估基于动物绝望行为的药物的抗抑郁作用,缺乏挣扎行为代表一种绝望状态[12]。在测试前对动物进行服用抗抑郁药干预,会有更长时间的坚持逃避导向的行为,抗抑郁效果的主要测量指标是不动时间的显著减少。本研究结果发现,模型组大鼠与空白组相比,FST和TST测试中的不动时间均显著增加,表明造模有效而且元宝草高、中、低剂量组存在剂量依赖的关系。其中元宝草高剂量(720 mg·kg-1)调节作用最显著,抗抑郁效果最好,不足之处是因为本次实验样本量偏少,还需要更多的实验验证其作用,更深层次的结果尚需进一步的研究。