乳没活络散微生物限度检查方法适用性分析

金荪青

广东省轻工业技师学院，广东 广州 510000

乳没活络散具有促进血液流通、消肿止痛的功效，民间多用此药对骨折疾病或扭伤疾病等进行干预，能取得理想化成效[1]。由于乳没活络散本质上是由药材原粉制得的一种药物制剂，使用过程中能够与机体创面直接接触，因此提升其微生物限度的检查质量是关键，该药物应用的安全性一定程度上受微生物污染程度影响[2]。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器与样品的选取

超净工作台（苏州苏洁净化设备企业），高压蒸汽灭菌器（上海博迅实业企业），乳没活络散（思南天使民族医院）。

1.1.2 培养基和稀释剂

稀释剂是pH 为7.0 的氯化钠-蛋白胨缓冲液；培养基中含有沙氏葡萄糖琼脂、溴化十六烷基三甲胺琼脂、甘露醇氯化钠琼脂等，来源于北京三药科技企业[3]。

1.1.3 菌株

金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉、铜绿假单胞等，来源于北京三药科技企业，本质上是第4代菌种。

1.2 方法

基于《中国药典》对微生物限度检查方式的应用要求进行检查，参照非无菌产品的微生物计数法统计微生物计数情况，系统性地检查控制菌。

第一，准备菌液。将无菌氯化钠缓冲液置于西林瓶中，静置0.5 min，然后将其涡旋振荡10 s。将9 mL 无菌氯化钠缓冲液与已经溶解的1 mL 菌液混合[4]，再从稀释菌液内取出1 mL 菌液，与9 mL 无菌氯化钠缓冲液混合，最终完成菌液的配制。

第二，准备供试液。将10 g 样品与100 mL 无菌氯化钠缓冲液混合，按照1∶10 的比例配制相应溶液。分析灭菌之前的供试品灭菌情况，将10 g 样品与100 mL 无菌氯化钠缓冲液混合摇匀，即得到按照1∶10 比例处理的供试液。再取出1∶10 的供试液10 mL，将其与100 mL 无菌氯化钠缓冲液混合，制得供试液（1∶100）。取10 g 经过辐照灭菌加工的供试品放入100 mL 无菌氯化钠缓冲液中，制得供试液（1∶10），备用[5]。

第三，实施计数试验。测定胰酪大豆胨琼脂培养基中铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌的氧菌总数，然后测定沙氏葡萄糖琼脂培养基中酵母菌、霉菌的数量，包括黑曲霉、白色念珠菌等。对于任何实验菌的培养，都需要采用2 个平皿进行平行制备，并评估其平均指数。将无菌氯化钠缓冲液作为稀释液，研究组将100 μL 试验菌液添加到9.9 mL 供试液（1∶10、1∶100）中，每毫升供试液的含菌量应控制在一定范围，即100 CFU 之内。得到1 mL 试验菌液，利用细菌培养皿进行培养，轻轻晃荡平皿使其充分混匀。供试品基础组按照1∶10、1∶100 的比例制备供试液，借助稀释液对菌液进行取替，操作过程与研究组相同。菌液基础组要准备9.9 mL 稀释液，与研究组均实施微生物回收检验的相同操作[4]。

第四,控制菌实用性检验。对金黄色葡萄糖菌进行检查，即阳性基础组准备10 mL 供试液（1∶10），将100 μL 菌液在胰酪大豆胨液体培养基中进行培养，在32 ℃条件下培养20 h。并将无菌氯化钠缓冲液倒入胰酪大豆胨液体培养基的容器中，前者剂量是10.1 mL、后者剂量是100 mL，在32 ℃条件下培养20 h，将其纳入阴性基础组。

2 结果

2.1 乳没活络散相关微生物计数

辐照结束后，开始对供试品（1∶10）进行微生物计数分析。由于未经辐照的供试品没有达到标准要求，所以要开展1∶100 稀释剂研究，结果表明，辐照之前基础组菌落对应的回收率可以达到70%，供试品从1∶100 的比例入手开展后阶段微生物计数，具体情况如表1、表2 所示。

表1 辐照不同批次菌落回收情况

表2 尚未辐照不同批次供试品回收情况单位：%

2.2 适用性检验

基础检测可以用于金黄色葡萄球菌适用性检验、铜绿假单胞菌适用性检验，如表3 所示。

表3 检验情况

3 讨论

辐照之前，供试品浓度较高，不适合用于计数，所以要将供试品按照1∶100 的比例进行稀释。限度实验表明，乳没活络散对多个菌种无抑制作用，表明平皿法适用于乳没活络散的检查。运用基础方式对基础组的菌种进行检验，发现辐照之前与辐照之后的结果之间存在显著差异，即辐照之前样品的菌群与检验过程都没有达到标准要求，而辐照结束后限度检查均符合标准要求，即辐照工艺具有科学性、规范性。

基于此，乳没活络散的工艺加工要通过辐照的形式进行，辐照介入的微生物限度检查过程能够使用平皿法针对性地进行霉菌计数、酵母菌计数、氧菌计数，基于基础检验模式取得理想的效果。