血清miR-21、YKL-40在2型糖尿病肾病患者中的表达及其意义

吴 倩 南华大学附属第二医院全科医学科,湖南省衡阳市 421000

糖尿病(Diabetes mellitus,DM)是严重威胁人类生命健康的常见慢性疾病,研究发现,患者以血糖代谢紊乱为主要临床表现,是遗传因素与环境因素相互作用的结果[1]。糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)是糖尿病最为常见的并发症之一,同时也是糖尿病患者死亡的主要原因之一,相关调查研究显示,2型糖尿病患者中糖尿病肾病发生率约为34.7%[2]。由于糖尿病肾病病情呈渐进式缓慢发展,起病隐匿,不易被早期诊断。因此,寻求新的生物学标记物,早期诊断糖尿病肾病,对患者的治疗及预后具有积极的意义[3]。本研究探讨分析血清miR-21、YKL-40在2型糖尿病肾病患者中的表达及其意义,现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2020年3月—2022年12月我院收治的2型糖尿病患者151例,根据患者是否合并DN将患者分为两组,其中单纯2型糖尿病患者65例作为DM组,合并DN患者86例作为DN组。此外,选择同期在我院健康体检的健康受试者50例作为对照组。

1.2 选择标准 (1)纳入标准:①2型糖尿病患者均符合世界卫生组织(WHO)拟定的2型糖尿病相关诊断标准;②DN诊断标准参照美国糖尿病协会DN相关诊断标准;③2型糖尿病患者病程均≥5年。(2)排除标准:①合并高血压患者;②合并急、慢性感染患者;③存在肾病综合征病史患者;④存在肝病病史患者;⑤由透析或肾移植病史;⑥2周内使用过抗凝药物或激素药物患者。

1.3 观察指标 记录患者一般临床资料及生化指标,包括患者性别、年龄、体质量指数(BMI)、2型糖尿病病程、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)。采用全自动生化分析仪检测患者空腹血糖(FPG)、尿肌酐(Cr)、尿微量白蛋白(mALb),并计算ACr,ACr=尿mALb/尿Cr。采用高效液相色谱法检测患者血红蛋白(HbA1c)以及血红蛋白(Hb)。留取三组受试者24h尿液,测定尿蛋白排泄率(UAER)。并计算肾小球滤过率(eGFR),eGFR=141×(sCr/k)α×0.993年龄×1.018(女性)×1.159(非裔美国人),男性k=0.9,α=-0.411,女性k=0.7,α=-0.329。

1.4 血清miR-21检测 抽取三组受试者清晨空腹静脉血5ml,常规离心后分离血清,采用总RNA提取试剂盒提取血清中总RNA。然后使用逆转录试剂盒将其逆转录为cDNA,以cDNA为模版采用miRcure miRNA荧光定量检测试剂盒进行qPCR扩增,总反应体系为20μl。引物由上海生工生物工程有限公司合成,引物序列:miR-21:上游引物5’-CCTTCACTTTCAGGGTCGAG-3’,下游引物:5’-CAGTTTGGGACCCCTTTACA-3’;β-actin上游引物5’-CCCATCTATGAGGGTTACGC-3’,下游引物5’-TTTAATFTCACGCACGATTTC-3’。以β-actin作为内参基因,反应条件:95℃ 10min,95℃ 15s、60℃ 60s,进行45个循环。采用2-ΔΔCt法计算miR-21相对表达量。

1.5 血清YKL-40水平检测 抽取三组受试者清晨空腹静脉血5ml,常规离心后分离血清,采用ELISA法测定各组受试者血清YKL-40水平,试剂盒购于美国Quidel公司,操作严格参照试剂盒使用说明书进行。

1.6 统计学方法 采用统计学软件SPSS25.0分析数据,三组间计量资料比较采用方差分析,组间两两比较采用t检验,三组间计数资料比较采用秩和检验,组间两两比较采用 检验;相关性分析采用Pearson相关性分析;采用ROC曲线分析血清miR-21、YKL-40对DN诊断价值,以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 三组临床资料比较 三组受试者性别、年龄、BMI、SBP、DBP比较差异无统计学意义(P>0.05),而三组受试者FBG、ALB、Hb比较差异具有统计学意义(P<0.05),DM组与DN组患者病程、HbA1c、eGFR以及UAER比较差异具有统计学意义(P<0.05),见表1。

表1 三组受试者临床资料比较

2.2 三组受试者血清miR-21、YKL-40水平比较 三组受试者血清miR-21、YKL-40水平比较差异具有统计学意义(P<0.05),其中DM组、DN组患者血清miR-21、YKL-40水显著高于对照组(P<0.05),而DN组患者血清miR-21、YKL-40水平显著高于DM组(P<0.05),见表2。

表2 三组受试者血清miR-21、YKL-40水平比较

2.3 血清miR-21、YKL-40与DN患者临床指标相关性 相关性分析结果显示,DN患者血清miR-21、YKL-40与患者病程无关(P>0.05),而与患者FBG、HbA1c、UAER呈显著正相关关系(P<0.05),与患者ALB、Hb、eGFR呈显著负相关关系(P<0.05),见表3。

表3 血清miR-21、YKL-40与DN患者临床指标相关性

2.4 ROC曲线分析血清miR-21、YKL-40对DN的诊断价值 分析血清miR-21、YKL-40对DN的诊断价值,结果显示,ROC曲线下面积分别为0.918、0.851,见表4、图1。

图1 血清miR-21、YKL-40对DN的诊断价值的ROC曲线

表4 ROC曲线相关参数

3 讨论

糖尿病肾病作为2型糖尿病患者常见的并发症之一,具有发病隐匿、发病缓慢、机体代谢紊乱等特点。对于早期糖尿病肾病患者,若未采取及时有效的治疗措施,患者极容易发展成终末期肾病,导致临床治疗难度的增加。目前,关于糖尿病肾病的发病机制尚未明确,临床治疗仅通过控制患者血糖、血压以及血脂水平,从而达到减缓患者病情进展的目的,但是仍无法从根本上遏制病情的发展[4-5]。因此,糖尿病肾病患者的早期诊断和治疗对于改善临床预后具有的重要意义。

miRNA是生物体内长度为18～24个核苷酸的单链非编码RNA,其广泛参与了机体内的多种病理生理学过程[6]。目前越来越多的研究已经证实,多种疾病发生、发展过程中,均有miRNA的参与及调控,因此miRNA已经成为多种疾病诊断和治疗的潜在标志物[7]。miR-21是较早发现的一类在人体组织和细胞中广泛存在的miRNA,其位于17q23.2染色体区域上,相关报道显示,miR-21与多种肾脏疾病有关[8]。YKL-40属于哺乳动物甲壳酶样蛋白家族成员之一,但是YKL-40本身不具备酶活性[9]。机体内多种细胞均可分泌YKL-40,其主要参与激活先天免疫系统以及组织重塑过程,被认为与机体血管内皮功能异常有关[10]。为了进一步提高糖尿病肾病患者的早期诊断,本研究探讨分析了血清miR-21、YKL-40在2型糖尿病肾病患者中的表达及其意义。

本文结果显示,DM组、DN组患者血清miR-21、YKL-40水显著高于对照组,而DN组患者血清miR-21、YKL-40水平显著高于DM组;DN患者血清miR-21、YKL-40水平与FBG、HbA1c、UAER呈显著正相关关系,与ALB、Hb、eGFR呈显著负相关关系。与研究报道结果相似[11],提示在糖尿病肾病患者血清miR-21以及YKL-40水平显著升高,且糖尿病血清miR-21以及YKL-40水平表达与糖尿病肾病患者疾病进展密切相关,血清miR-21以及YKL-40可能参与到了糖尿病肾病疾病发生发展过程。此外,分析血清miR-21、YKL-40对DN的诊断价值,结果显示,ROC曲线下面积分别为0.918、0.851。表明血清miR-21、YKL-40对糖尿病患者是否并发糖尿病肾病具有良好的诊断价值。

综上所述,糖尿病肾病患者血清miR-21、YKL-40表达异常升高,且血清miR-21、YKL-40表达与患者糖尿病肾病疾病进展密切相关,对糖尿病肾病具有良好的临床诊断价值,可能成为糖尿病肾病临床诊断和治疗的潜在生物学标志物,值得临床进一步深入研究分析。