血清非编码RNA C9orf147和BSN-AS2联合检测对嗜铬细胞瘤的诊断价值

王 志 赵 琪 刘正道 朱海冬 刘晓飞 王 建 何长海 李保安 张 磊 和术臣

嗜铬细胞瘤是一类神经内分泌方面的肿瘤,起源于肾上腺的嗜铬细胞或者是髓质等相关的组织,其病因尚不清楚,但可能与遗传有关[1]。嗜铬细胞瘤通常表现出一系列症状,例如高血压,心肌梗塞,急性呼吸窘迫综合征,急性肾衰竭和脑血管事件[2]。由于这些严重的并发症,临床上必须及时有效地诊治嗜铬细胞瘤。但是,由于脂质原因,临床上MRI平扫难以区别嗜铬细胞瘤和肾上腺腺瘤[3]。因此,迫切需要一些生物标志物来鉴别两者。非编码RNA为基因表达转录后的调节因子,在多种肿瘤中表达失调,包括嗜铬细胞瘤[4]。Ying-Chun等[5]发现嗜铬细胞瘤中非编码RNA C9orf147和BSN-AS2表达异常。基于此,本研究旨在探讨血清中非编码RNA C9orf147和BSN-AS2联合对嗜铬细胞瘤的诊断价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

挑选2018年4月至2022年4月我院治疗的嗜铬细胞瘤患者共70例为嗜铬组,其中男女比为37∶33,平均年龄(46.23±21.06)岁。肾上腺腺瘤患者70例为肾上组,其中男女比为32∶38,平均年龄(47.42±23.51)。嗜铬细胞瘤患者和肾上腺腺瘤患者均经MRI检查和病理活检证实。排除标准:①血液抽取前实施任何方面治疗的患者;②伴有其他部位的肿瘤;③伴有全身性的自体免疫性疾病;④伴有肝、心、肾等功能严重障碍;⑤予以免疫抑制剂或者是皮质类固醇激素治疗的患者。挑选同一个时间段在我院体检的健康人70例为对照组,其中男女比为35∶35,平均年龄(44.65±24.93)岁。各组受试者的一般资料可比(P>0.05)。受试者均知情同意且获得我院伦理委员会批准。

1.2 抽取RNA以及实时荧光定量PCR

采集肾上腺腺瘤、嗜铬细胞瘤患者以及健康体检者的外周血各10 ml。使用北京润泽康生物生产的RNA小量提取试剂盒(货号:R6814-01)对于血清总RNA进行抽提。用特定的逆转录(RT)引物和聚合酶链反应(PCR)对非编码RNA C9orf147和BSN-AS2进行扩增。RT反应在42 ℃条件下进行60 min,70 ℃条件下进行10 min;PCR反应在95 ℃条件下进行20 s,然后在7900HT实时PCR系统(Applied Biosystems,Foster City,CA,USA)上进行40个循环,95 ℃条件下进行10 s,60 ℃条件下进行20 s,然后70 ℃条件下进行10 s。通过SYBR Green Dye(SYBR®Premix Ex TaqTM II,TaKaRa)释放的荧光水平计算PCR产物的相对量。采用溶解曲线分析方法评价PCR产物的特异性。2-ΔΔCt方法应用于确定miRNA的表达水平。

1.3 统计学分析

RISM 7.0软件进行统计分析。采用Mann-Whit-ney U检验评估嗜铬组、肾上组、对照组血清中非编码RNA C9orf147和BSN-AS2的表达水平差异。应用受试者的工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)分析血清中非编码RNA C9orf147和BSN-AS2水平对嗜铬细胞瘤的临床诊断价值。阳性临界值是ROC曲线中约登指数最大值所对应的数值。P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3组受试人员血清中非编码RNA C9orf147和BSN-AS2的相对表达量

血清中非编码RNA C9orf147和BSN-AS2的相对表达量在嗜铬组、肾上组和对照组中的差异有统计学意义(P<0.05),见表1。

表1 3组受试人员血清中非编码RNA C9orf147和BSN-AS2的相对表达量

2.2 非编码RNA C9orf147和BSN-AS2水平对嗜铬细胞瘤和肾上腺腺瘤的诊断效能

为了判定血清里面非编码RNAC9orf147和BSN-AS2水平对嗜铬细胞瘤和肾上腺腺瘤的诊断效能,绘制ROC曲线(图1)。C9orf147的AUC是0.91±0.03(95%CI 0.8508～0.9664),以1.551作为C9orf147的阳性临界值,其诊断方面的灵敏度以及特异度分别是92.86%(65/70)、91.43%(64/70);BSN-AS2的受试者具体的AUC是0.93±0.02(95%CI 0.8929～0.9847),以1.276作为BSN-AS2的阳性临界值,其诊断方面的灵敏度以及特异度分别是92.86%(65/70)、92.86%(65/70)。见表2、3和图1。

图1 嗜铬组和肾上组血清中非编码RNA C9orf147和BSN-AS2的ROC曲线

表2 血清中非编码RNA C9orf147和BSN-AS2检测与病理结果对比/例

表3 嗜铬组和肾上组血清中非编码RNA C9orf147和BSN-AS2的AUC、特异度、灵敏度和截断值

2.3 嗜铬组和对照组血清中非编码RNA C9orf147和BSN-AS2的ROC曲线、AUC、灵敏度、特异度和截断值

为了评估血清中非编码RNAC9orf147和BSN-AS2在嗜铬组和对照组中的诊断价值,绘制70例嗜铬组患者和70例对照组人员的ROC曲线(图1)。C9orf147的AUC是0.94±0.02(95%CI 0.8899～0.9839),以1.967作为C9orf147的阳性临界值,其诊断方面的灵敏度以及特异度分别是94.29%(66/70)、92.86%(65/70);BSN-AS2的AUC为0.95±0.02(95%CI 0.9125～0.9850),以1.719作为BSN-AS2的阳性临界值,其诊断方面的灵敏度以及特异度分别是94.29%(66/70)、94.29%(66/70)。见图2和表4、5。

图2 嗜铬组和对照组血清中非编码RNA C9orf147和BSN-AS2的ROC曲线

表4 血清中非编码RNA C9orf147和BSN-AS2检测与病理诊断结果的对比/例

表5 嗜铬组和对照组血清中非编码RNA C9orf147和BSN-AS2的AUC、特异度、灵敏度和截断值

2.4 非编码RNA C9orf147和BSN-AS2对嗜铬细胞瘤的联合诊断

存在嗜铬细胞瘤的认定是真阳性,不存在嗜铬细胞瘤则认定为真阴性,以C9orf147的阳性临界值为1.551和BSN-AS2的阳性临界值为1.276作为此次诊断的界限,两者全部满足则认定为联合诊断阳性,反之则认定为阴性。血清非编码RNA C9orf147和BSN-AS2联合检测对嗜铬细胞瘤的诊断的灵敏度为92.86%(65/70),特异度为93.57%(131/140),准确度为93.33%(196/210)。见表6。

表6 非编码RNA C9orf147和BSN-AS2对嗜铬细胞瘤的联合诊断/例

3 讨论

嗜铬细胞瘤是一种罕见的肾上腺肿瘤,发病率为每百万人中有3～4人[6]。嗜铬细胞瘤临床表现多种多样,但最容易出现的有出汗、头痛、心悸和高血压,这些心血管严重并发症与其分泌的儿茶酚胺有关。但是,影像学诊断难以区分嗜铬细胞瘤和肾上腺腺瘤。因此,迫切需要非影像学手段对嗜铬细胞瘤和肾上腺腺瘤进行诊断。本研究发现血清中非编码RNA C9orf147和BSN-AS2联合对嗜铬细胞瘤的诊断的灵敏度为92.86%,特异度为93.57%,准确度为93.33%。

最近的研究表明[7],尽管这些基因中只有1%～2%编码蛋白质,但人类基因组中有超过90%可以被转录。长链非编码RNA(lncRNA)是一类非编码RNA,包含多种复杂的生物物种[8]。最近的研究表明[9],lncRNAs参与了基因组印迹,转录激活,X灭活,转录干扰,染色质修饰和核转运。本研究发现血清中非编码RNA C9orf147和BSN-AS2的相对表达量在嗜铬组、肾上组和对照组中有显著差异(P<0.05)。最近的研究表明[10],基因在转录调控中具有多种作用方式。一些lncRNA具有与miRNA的结合位点,并充当miRNA海绵,从而从靶基因释放miRNA,并提高了靶基因的表达水平。因此,C9orf147和BSN-AS2可能通过与miRNA结合,调控某些基因的mRNA水平并影响这些基因的翻译。尽管还没有研究探讨C9orf147和BSN-AS2的功能。但是通过Ying-Chun等[5]建立的lncRNAs调控网络可以看出,BSN-AS2可能通过miR-195调节PTPRJ mRNA的表达,而PTPRJ的表达与总体生存率呈负相关。相反,BSN-AS2也可能与miR-193b、miR-195和/或miR-497竞争介导TGFBR3 mRNA的表达有关,而这与生存率呈正相关。因此,目前BSN-AS2与总体生存率的相关性还需要进一步的探讨。此外,非编码RNA C9orf147和BSN-AS2是否是在多种肿瘤中表达异常仍需探讨。

在本研究中,血清中非编码RNA C9orf147和BSN-AS2单项诊断嗜铬组与肾上组的灵敏度为92.86%、92.86%,特异度分别为91.43%、92.86%。血清中非编码RNA C9orf147和BSN-AS2单项诊断嗜铬组与对照组的灵敏度为94.29%、94.29%,特异度分别为92.86%、94.29%。相比于传统的病理活检[11],检测血清中非编码RNA C9orf147和BSN-AS2的表达水平具有无创、简单、快速的优势。相比于方娴静等[12]的影像学平扫CT值诊断嗜铬细胞瘤,本研究非编码RNA C9orf147和BSN-AS2的检测具有较高的特异度。

综上所述,血清中非编码RNA C9orf147和BSN-AS2的表达水平可作为嗜铬细胞瘤的诊断指标。