TRIM26在结肠癌中的表达及其临床意义

莫明子 韩晓群 郑 智 饶 军

结直肠癌是恶性程度非常高的肿瘤之一,其发病率和死亡率有明显增高的趋势。全球每年约有120万的新发病例,约有50万人死于结直肠癌,已成为第三大类癌症死因[1]。目前,结肠镜检查及腹部 CT 等方法被广泛应用于结肠癌的诊断,然而,大多数患者由于确诊时已处于肿瘤晚期而错过了最佳的治疗机会,如果能够找到一些特定的关键分子以及有效的治疗靶点,那么这将有助于对结肠癌的早期诊断、预后判断、新药开发和临床治疗[2]。

三结构域(tripartitemotif,TRIM)家族蛋白可调控肿瘤细胞的增殖、转移、凋亡和自噬等多种生物学行为,介导多个分子调控机制,如p53信号通路、NF-κB信号通路、泛素化以及染色体异位和转录等[3]。TRIM26基因定位于6号染色体上的一个主要区域,此区域称为主要组织相容性复合体(MHC),该基因表达出的蛋白质主要存在于细胞质中[4]。有关研究表明,具有E3泛素化连接酶活性的TRIM26结构为包含RING结构域、Box1、Box2和螺旋卷曲结构的RBCC结构[5]。本研究对结肠癌组织中 TRIM26蛋白的表达进行检测,观察结肠癌组织中TRIM26蛋白的表达情况及其与患者临床病理特征之间的相关性,以期为结肠癌的早期诊断、治疗和预后评估提供一个新的理论和实验依据。

1 材料与方法

1.1 样本来源

从上海芯超生物科技有限公司的组织样本库中选取了99例结肠癌患者样本,其中女性患者43例,男性患者55例,1例缺失;年龄<70岁的患者43例,年龄≥70岁的患者50例,6例缺失;病理分级Ⅱ级的患者69例,病理分级Ⅲ级的患者30例;T分期中Ⅰ～Ⅲ期的患者82例,Ⅳ期的患者13例,4例缺失;N分期中无区域淋巴结转移(N0期)患者61例,N1～N2期患者37例,1例缺失;TNM 分期中Ⅰ～Ⅱ期患者61例,Ⅲ～Ⅳ期患者37例,1例缺失。所有病例均经病理确诊为结肠癌且未接受任何的术前治疗。手术时间为2006年7月至2007年5月,最终随访时间均为2015年7月。99例患者均包含癌组织,其中有73例还包含与癌组织相匹配的距离癌1.5 cm的癌旁组织。

1.2 制作组织芯片

组织芯片的制作由上海芯超生物科技有限公司来进行。常规的病理切片后,所有供体组织蜡块进行HE染色,由病理学专家对其进行第二次诊断后标记HE切片上的典型病理区。使用组织芯片制作仪(BeecherInstruments.Inc)在受体蜡块(空白蜡块)上进行有序的打孔(孔的直径为1.5 mm),在供体组织蜡块上的相应位置-HE切片上的标记部位获取目标组织芯,放入受体蜡块阵列孔中,重复上述步骤,完成1个结肠癌组织和癌旁组织相匹配的180点阵列块(HCol-Ade180Sur-06)的制作。使用切片机(Leica,德国)连续切割成4～5 μm厚的切片,用防脱片处理进口载玻片,然后将切片放置在进口载玻片上,完成组织芯片的制作。

1.3 免疫组织化学实验

免疫组织化学实验采用EnVision二步法。在光学显微镜下随机观察3个高倍镜视野,计≥3×102个细胞中的阳性细胞数,然后计算阳性细胞数占全部细胞数的染色阳性率。染色阳性率评分分为四个等级:0分(阴性),1分(1～25%),2分(26%～50%),3分(51%～75%),4分(76%～100%)。染色强度评分分为四个等级:无阳性着色(阴性)计0分,弱阳性(+)计1分,阳性(++)计2分,强阳性(+++)计3分。总评分为“染色强度评分”与“染色阳性率评分”之积,并据此来进行分组,总评分<12分的是TRIM26低表达组,总评分≥12分的是TRIM26高表达组。

1.4 统计分析

采用χ2检验分析TRIM26在结肠癌与癌旁组织中的表达情况、TRIM26表达与结肠癌患者临床指标之间的相关性,P值<0.05表示差异具有统计学意义。TRIM26的表达与结肠癌预后的相关性分析:生存期单因素分析采用Kaplan-Meier生存分析法和log-rank统计检验;在单因素分析中得到有统计学意义的变量,将这些变量纳入COX多因素生存回归分析,P值<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 结肠癌和癌旁组织中TRIM26的表达分析

免疫组织化学的实验结果表明:TRIM26在结肠癌和癌旁组织的细胞质中表达,其表达定位与抗体说明书一致。卡方检验分析显示:TRIM26在结肠癌中的表达显著高于癌旁组织(P<0.001)。分析结果见表1和图1。

***为两者差异有统计学意义(P<0.001)。

表1 TRIM26在结肠癌及癌旁组织中的表达比较/例

2.2 TRIM26的表达与结肠癌患者临床指标相关性

卡方检验分析显示:TRIM26的表达与病理分级、N分期、TNM分期、PDL1密切相关(P<0.05)。TRIM26的表达与年龄、性别、T分期、MLH1、MSH6、MSH2、PMS2无明显统计学关系(P>0.05),见表2。

表2 TRIM26表达与结肠癌患者临床指标相关性/例

2.3 TRIM26的表达与结肠癌预后的相关性

结肠癌患者的随访情况如下:死于结肠癌的有59例患者,中位随访时间为28个月(1～87个月);仍存活的有40例患者,其中位随访时间为101.5个月(98～108个月)。生存期单因素分析显示:癌组织TRIM26表达低的结肠癌患者相对于癌组织TRIM26表达高的结肠癌患者拥有更长的总生存期(P=0.0141),其5年生存率明显高于TRIM26表达高的结肠癌患者[59.5%(25/42)vs 40.4%(23/57)]。具体分析结果见图2。

图2 TRIM26的表达与结肠癌患者预后的相关性

2.4 结肠癌预后的独立相关因素分析

将单因素分析中有统计学意义的变量纳入COX多因素生存回归分析,分析结果显示:TRIM26的表达不是结肠癌预后的独立预测因素,而患者年龄、病理分级、T分期、N分期、PDL1可作为结肠癌预后的独立预测因素(P<0.05),见表3。

表3 影响结肠癌患者预后的因素分析

3 讨论

TRIM26作为TRIM超家族成员之一,可以作为抑癌基因或者癌基因影响肿瘤细胞的增殖、分化、凋亡、侵袭迁移等多个生物学过程[6-8]。如TRIM26在肝细胞癌(HCC)组织中的表达与正常组织相比明显下调,TRIM26沉默可促进肝癌细胞的增值、迁移和侵袭能力[9]。TRIM26限制了肺癌的生长,过表达TRIM26可通过下调BCL-2抑制细胞生长并诱导细胞凋亡[10]。沉默TRIM26表达可阻碍乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭与迁移能力,并诱导细胞凋亡[11]。与正常组织相比,TRIM26在胶质瘤组织中的表达显著增高,TRIM26的表达与胶质瘤细胞U87及U251的增殖呈正相关[12]。尽管如此,TRIM26与结直肠癌的相关性研究则未有报道。

本研究选取了99个带有随访信息的结肠癌病例,基于免疫组织化学技术和统计学分析,以探讨TRIM26的表达与结直肠癌的发生、发展、转移和预后之间相关性。实验结果表明:TRIM26的表达定位于细胞质基质中,与癌旁组织相比,其在结肠癌组织中的表达显著提高(P<0.001)。临床指标相关性分析显示,结肠癌组织TRIM26的表达与病理分级、N分期、TNM分期、PDL1密切相关(P<0.05)。这个结果提示TRIM26可参与结肠癌发生及发展过程,并发挥重要调控作用。另外,TRIM26的表达与结肠癌预后的相关性分析表明,癌组织 TRIM26表达低的结肠癌患者比癌组织 TRIM26表达高的结肠癌患者拥有更长的总生存期(59.5% vs 40.4%,P=0.0141),证明癌组织 TRIM26 的高表达可能加强了肿瘤的恶性以及促进了其不良预后。

综上所述,TRIM26 与结肠癌的发生、发展有着十分紧密的关系,这为结肠癌的诊断以及预后评价提供了一定的理论和实验参考。