小白菊内酯抗肿瘤的作用机制研究

刘昕峰

(滨州医学院药学院,山东 滨州 256600)

小白菊内酯是一种化合物,主要用作于化工生物制药等领域。小白菊内酯的英语学名叫做Parthenolide,在CAS(国际化学文摘杂志)里编号是20554-84-1,小白菊内酯常见分子式(化学式)是C15H20O3,分子量为248.32,熔点通常为mp 115-116°C,它是由C 72.55%, H 8.12%, O 19.33%组成的化合物。本文研究了小白菊内酯抗肿瘤的作用机制,现将结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 细胞系及培养

购买人肝癌BEL-7402细胞株,在37℃ 5%CO2孵箱中用含15%胎牛血清的RPMI 1640培养液常规培养,在实验中应用对数生长期的细胞。

1.2 药品与主要试剂及仪器

购买小白菊内酯,用三蒸水将10 μg/μL储存液配制出来;购买中国科学院血液病研究所提供的胎牛血清,环磷酰胺,GIBCO公司生产的RPMI 1640培养基,胰蛋白酶。Nikon ECLIPSE TE 300倒置式生物显微镜,Thermo Forma MODEL 3111 S/N 301099—4785 5%CO2培养箱,LS—N50L立式压力蒸汽灭菌器,LDZ5-2低速自动平衡离心机,DG202—3电热干燥箱。

1.3 实验方法

运用MTT比色法对细胞增殖抑制率进行测定,倒置显微镜下对EBL-7402细胞形态受到0.0 μg/mL、5.0 μg/mL、7.5 μg/mL、10.0 μg/mL、15.0 μg/mL、20.0 μg/mL、30.0 μg/mL、40.0 μg/mL、80.0 μg/mL、100.0 μg/mL小白菊内酯的影响进行观察,Giemsa染色,运用DNA琼脂糖凝胶电泳方法对细胞凋亡进行检测,运用免疫组织化学方法对P53蛋白表达进行检测,并检测增殖细胞核抗原(PCNA),运用免疫细胞化学法对NF-kB活性进行检测。

1.4 免疫组化检测结果

P53或PCNA蛋白表达阳性均为细胞核呈棕红染色,伴或不伴胞浆染色。分细胞阳性染色程度为4级,即阴性(-)、弱阳性(+)、中阳性(++)、强阳性(++),依据阳性细胞比例分为4级,阳性细胞数在0～5%、5%～20%、21%～60%、61%～100%分别为-、+、++、+++,通常情况下阳性细胞分别为单个、分散存在、呈小巢状或局灶性、块状及片状分布[1-3]。

1.5 统计学分析

2 结果

2.1 小白菊内酯对细胞生长的影响

5.0 μg/mL、7.5 μg/mL、10.0 μg/mL、15.0 μg/mL、20.0 μg/mL、30.0 μg/mL、40.0 μg/mL、80.0 μg/mL、100.0 μg/mL小白菊内酯对BEL-7402细胞的OD值均低于0.0 μg/mL(P<0.05),5.0 μg/mL、7.5 μg/mL、10.0 μg/mL、15.0 μg/mL小白菊内酯对BEL-7402细胞的OD值逐渐降低(P<0.05),生长抑制率逐渐升高(P<0.05),20.0 μg/mL、30.0 μg/mL、40.0 μg/mL小白菊内酯对BEL-7402细胞的OD值均高于15.0 μg/mL、80.0 μg/mL、100.0 μg/mL(P<0.05),生长抑制率均低于15.0 μg/mL、80.0 μg/mL、100.0 μg/mL(P<0.05),80.0 μg/mL、100.0 μg/mL小白菊内酯对BEL-7402细胞的OD值均高于15.0 μg/mL(P<0.05),生长抑制率均低于15.0 μg/mL(P<0.05)。见表1。

表1 不同浓度小白菊内酯对BEL-7402细胞的生长抑制作用

2.2 P53蛋白表达结果

空白对照、阳性对照、7.5 μg/mL、15.0 μg/mL小白菊内酯对BEL-7402细胞P53阳性表达逐渐增强(P<0.05)。见表2。

表2 免疫组化检测BEL-7402细胞P53表达强度[n(%)]

2.3 增殖细胞核蛋白PCNA表达结果

空白对照、阳性对照、7.5 μg/mL、15.0 μg/mL小白菊内酯对BEL-7402细胞PCNA阳性表达逐渐减弱(P<0.05)。见表3。

表3 免疫组化检测BEL-7402细胞PCNA表达强度[n(%)]

2.4 核因子-kB表达结果

空白对照、阳性对照、7.5 μg/mL、15.0 μg/mL小白菊内酯对BEL-7402细胞BF-kB阳性表达逐渐减弱(P<0.05)。见表4。

表4 免疫组化检测BEL-7402细胞BF-kB表达强度[n(%)]

3 讨论

本研究结果表明,5.0 μg/mL、7.5 μg/mL、10.0 μg/mL、15.0 μg/mL、20.0 μg/mL、30.0 μg/mL、40.0 μg/mL、80.0 μg/mL、100.0 μg/mL小白菊内酯对BEL-7402细胞的OD值均低于0.0 μg/mL,5.0 μg/mL、7.5 μg/mL、10.0 μg/mL、15.0 μg/mL小白菊内酯对BEL-7402细胞的OD值逐渐降低,生长抑制率逐渐升高,20.0 μg/mL、30.0 μg/mL、40.0 μg/mL小白菊内酯对BEL-7402细胞的OD值均高于15.0 μg/mL、80.0 μg/mL、100.0 μg/mL,生长抑制率均低于15.0 μg/mL、80.0 μg/mL、100.0 μg/mL。空白对照、阳性对照、7.5 μg/mL、15.0 μg/mL小白菊内酯对BEL-7402细胞P53阳性表达逐渐增强。空白对照、阳性对照、7.5 μg/mL、15.0 μg/mL小白菊内酯对BEL-7402细胞PCNA阳性表达逐渐减弱。空白对照、阳性对照、7.5 μg/mL、15.0 μg/mL小白菊内酯对BEL-7402细胞BF-kB阳性表达逐渐减弱,说明小白菊内酯抗肿瘤的作用机制可能为对人肝癌BEL-7402细胞增殖进行抑制,并通过将P53蛋白表达增强并对PCNA蛋白表达进行抑制对其凋亡进行诱导,NF-kB参与其信号转导,从而对人肝癌细胞生长进行抑制,和相关医学研究结果一致[4-6]。