黑顺片-大黄对药顺势给药和逆势给药对健康大鼠生理指标的影响▲

甘永金 李羡筠 梁丹玉 黄艳妮 凌健安 蓝保强 盘叶花 潘 东 农云开 蒋盛军

(1 广西壮族自治区职业病防治研究院职业卫生与毒性评价所,广西南宁市 530021; 2 广西壮族自治区中医药研究院制剂中心,广西南宁市 530022)

阴阳是自然界的一般规律,人体也随着自然界的阴阳之气存在阴阳变化,早上和中午人体气血升发属阳盛,晚上气血降沉为阴盛。中医认为,在治疗疾病时,用药应顺人体之气[1-2]。阴阳五行理论是中医理论的根基之一[3],而中药亦有阴阳之分[4-5]。依此理论,蒋盛军博士提出了中药应按阴阳分药并分时服用的理论,根据该理论施药见效快,用药量少,毒副作用更轻[6-7]。黑顺片(附子)辛温,属阳药,易在人体一天中阳气较盛的上午服用;大黄苦寒,属阴药,易在阴盛的下午服用[8-9]。本研究为进一步验证中药阴阳分药并分时服用的理论,观察黑顺片和大黄顺势给药和逆势给药对大鼠的影响。

1 材料与方法

1.1 药物、试剂和仪器 黑顺片中药配方颗粒(每袋0.5 g,相当于饮片5.5 g)和大黄中药配方颗粒(每袋0.4 g,相当于饮片2.8 g)购自四川新绿色药业科技发展有限公司。血细胞分析仪(型号:BC-5000)、全自动生化分析仪(型号:BS-600)。所用检测试剂盒购自北京迈瑞医疗器械有限公司。

1.2 药物配制 黑顺片中药配方颗粒溶液的配制:1 g黑顺片中药配方颗粒相当于11 g黑顺片饮片剂量。将4.295 g黑顺片中药配方颗粒溶解于450 mL超纯水中,配制成0.105 g/mL黑顺片中药配方颗粒溶液。大黄中药配方颗粒溶液的配制:1 g大黄中药配方颗粒相当于7 g大黄饮片剂量。将13.5 g大黄中药配方颗粒溶解于450 mL超纯水中,配制成0.21 g/mL大黄中药配方颗粒溶液。黑顺片中药配方颗粒和大黄中药配方颗粒混合溶液的配制:将4.295 g黑顺片中药配方颗粒和13.5 g大黄中药配方颗粒溶解于450 mL超纯水中,配制成(0.105 g黑顺片中药配方颗粒+0.21 g大黄中药配方颗粒)/mL混合溶液。上述药物溶液均置于4 ℃冰箱保存。

1.3 实验动物及分组 48只无特定病原体级SD大鼠购自长沙市天勤生物技术有限公司,实验动物生产许可证号为SCXK(湘)2019-0014,检疫观察5 d。雌雄各半,鼠龄6～8周,体重170～190 g。大鼠适应性喂养3 d后,按体重(空腹)排序,采用计算机随机法分为顺势饲喂组、逆势饲喂组、混合饲喂组、对照组,各12只,每组雌雄各半,按组分笼饲养。

1.4 干预方法 由于大鼠生活习惯为白天睡觉夜间活动,因此其阴阳规律与人类相反[10],即大鼠的顺势给药是早上服用阴性药物(大黄),晚上服用阳性药物(黑顺片),逆势给药则相反。大鼠以灌胃方式给药,每周给药5 d(周一至周五),连续给药6周。(1)逆势饲喂组:早上 9:00～9:30给予黑顺片中药配方颗粒溶液灌胃,下午16:30～17:00给予大黄中药配方颗粒溶液灌胃,每次灌胃量为0.75 mL/100 g体重。(2)顺势饲喂组:早上 9:00～9:30给予大黄中药配方颗粒溶液灌胃,下午16:30～17:00给予黑顺片中药配方颗粒溶液灌胃,每次灌胃量为0.75 mL/100 g体重。(3)混合饲喂组:给予黑顺片中药配方颗粒和大黄中药配方颗粒混合溶液灌胃,每次灌胃量为0.75 mL/100 g 体重,分两次给药,时间为早上 9:00～9:30和下午16:30～17:00。(4)对照组: 早上 9:00～9:30和下午16:30～17:00均给予灌胃超纯水,每次灌胃量为0.75 mL/100 g体重。

1.5 观察指标

1.5.1 行为状态观察:分别于饲喂第1天、第10天、第20天、第30天、第45天(给药6周后再观察3 d)时观察各组大鼠的皮肤毛发、行为状态、兴奋程度、激怒反应、睡眠状态、大便状态。

1.5.2 采食量测定:分别于开始饲喂后第2周、第4周、第6周的周一、周三、周五测定一次采食量。早上 9:00～9:30在每个笼内放置称量过的饲料,次日早上9:00～9:30称量剩余饲料。计算每只大鼠日均采食量,即每组大鼠每日的采食总量/该组大鼠例数。

1.5.3 体重测定:分别于饲喂后第2周、第4周、第6周的周一、周三、周五定时称量大鼠体重一次。

1.5.4 血常规分析和检测:饲喂后第45天采集各组大鼠腹主动脉血7 mL, 其中2 mL血标本用于血常规检测,剩余的5 mL血标本以2 000 r/min离心10 min,获取血清用于生化指标的检测,包括碱性磷酸酶、三酰甘油、 总胆固醇、 尿素、 空腹血糖、白蛋白、AST。

1.5.5 脏器外观及脏器指数:饲喂后第45天用20 mL/L异氟烷麻醉大鼠后,取各组大鼠的心、肝、脾、肺、肾、胃组织,观察其是否有充血、水肿及其他器质性病变等,计算脏器系数,脏器系数(%)=脏器重量/动物体重×100%。脏器系数增大,表示脏器充血、水肿或增生肥大,脏器系数减小,表示脏器萎缩及其他退行性改变。

1.6 统计学分析 采用SPSS 22.0软件进行统计学分析。正态分布的计量资料以(x±s)表示,多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 4组大鼠行为状态的情况 实验期间,各组大鼠的皮肤毛发、行为状态、兴奋程度、激怒反应、睡眠状态、大便状态均未见明显改变。

2.2 不同时间点4组大鼠日均采食量的比较 4组大鼠在各个时间段的日均采食量差异无统计学意义(P>0.05),见表1。

表1 不同时间点4组大鼠日均采食量的比较(x±s,g)

2.3 不同时间点4组大鼠体重的比较 饲喂第2周、第4周,4组大鼠体重差异无统计学意义(P>0.05)。饲喂第6周,4组大鼠体重差异具有统计学意义,其中,顺势饲喂组、混合饲喂组雌性大鼠体重低于逆势饲喂组,逆势饲喂组、顺势饲喂组和混合饲喂组雄性大鼠的体重高于对照组(P<0.05),见表2。

表2 不同时间点4组大鼠体重的比较(x±s,g)

2.4 4组大鼠脏器系数的比较 饲喂后第45天,4组雌性、雄性大鼠心、肝、肺、肾、胃脏器系数差异无统计学意义(P>0.05);4组雌性大鼠脾脏脏器系数差异具有统计学意义,其中逆势饲喂组雌性大鼠脾脏脏器系数高于对照组(P<0.05),见表3。

表3 4组大鼠脏器系数的比较(x±s,%)

2.5 4组大鼠血常规指标的比较 饲喂后第45天,4组大鼠的白细胞计数、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、红细胞计数、血红蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05);饲喂后第45天,4组雌性大鼠的单核细胞计数,雌性、雄性大鼠的嗜酸性粒细胞计数差异具有统计学意义,其中,顺势饲喂组和混合饲喂组雌性大鼠的单核细胞计数和嗜酸性粒细胞计数高于对照组,逆势饲喂组雌性大鼠嗜酸性粒细胞计数高于对照组,顺势饲喂组和混合饲喂组雄性大鼠的嗜酸性粒细胞计数低于对照组(P<0.05),见表4。

表4 4组大鼠血常规指标的比较(x±s)

2.6 4组大鼠血生化指标的比较 饲喂后第45天,4组大鼠血清碱性磷酸酶、三酰甘油、尿素、空腹血糖、白蛋白、AST水平差异无统计学意义(P>0.05);但4组雄性大鼠血清总胆固醇水平差异具有统计学意义,混合饲喂组雄性大鼠的血清总胆固醇水平高于对照组(P<0.05),见表5。

表5 4组大鼠血生化指标的比较(x±s)

3 讨 论

阴阳五行是中医理论的核心之一,体现中医的辨证论治思想。中医认为,男为阳,女为阴;气为阳,血为阴;疾病亦分阴阳,如发热和恶寒同时并存属阳,不发热,只是恶寒属阴[3]。中药的药性和用药时辰也有阴阳之分,《素问·疏五过论》[1]:“圣人之治病也,必知天地阴阳四时经纪。”即治病需依照阴阳四时。目前,阴阳五行理论在现代医学领域研究中逐步得到了印证[11-15]。本文采用中医理论中经典的寒热配伍药对黑顺片和大黄[16],以大鼠为研究对象,分阳时(上午)和阴时(下午)给药,探究顺势给药和逆势给药对大鼠的影响。

本研究结果显示,给药第6周,逆势饲喂组雌性大鼠体重高于顺势饲喂组,而逆势饲喂组和顺势饲喂组雄性大鼠体重均高于对照组(P<0.05)。中医认为,肥胖多由痰湿引起,逆势给药可能导致大鼠的阴阳失衡,气血运行不畅,痰湿阻络,血行不畅,进而引起体重增加。而顺势饲喂组中,虽然分药分时饲喂黑顺片中药配方颗粒溶液和大黄中药配方颗粒溶液,黑顺片的温热药效可以抵消大黄部分寒冷药效,但无法抵消大黄导致的脾胃虚寒,气滞血瘀而引起的体重升高,因此顺势饲喂组体重高于对照组。本研究结果还显示,逆势饲喂组雌性大鼠脾脏脏器系数高于对照组(P<0.05),表明逆势给药可造成大鼠的脾脏瘀血,脾虚湿困的病机。而本研究中不同性别大鼠结果的差异可能与不同性别大鼠对药物的敏感性不同有关,因中药起效缓慢,我们认为,在延长用药时间后,不同性别大鼠对药物的反应可能表现出更为相似的变化。以上结果可以初步推测出黑顺片中药配方颗粒和大黄中药配方颗粒的分药分时给药可影响大鼠的气血运行,逆势给药可造成一定的气滞血瘀而增加体重,该结果可以初步验证中医阴阳理论中,分药分时给药的理论。

本研究结果显示,顺势饲喂组和混合饲喂组雌性大鼠的单核细胞计数和嗜酸性粒细胞计数高于对照组,顺势饲喂组和混合饲喂组雄性大鼠的嗜酸性粒细胞计数低于对照组(P<0.05),提示顺势给予黑顺片中药配方颗粒和大黄中药配方颗粒可以提高大鼠的免疫力,这也与相关文献[17]报告结果相符。本研究还发现,混合饲喂组雄性大鼠的血清总胆固醇水平高于对照组(P<0.05),提示混合给药可能导致一定的气滞血瘀,从而导致体内胆固醇的累积,但逆势给药对胆固醇影响不明显的原因有待进一步研究。而不同性别大鼠研究结果的差异可能与研究过程中大鼠的性成熟,性激素水平变化,以及所选动物种类的习性有关。未来可选择月龄较小的大鼠或延长用药时间来进一步验证该结果。

综上所述,逆势给药可引起大鼠脾脏淤血,混合给药可引起大鼠血清总胆固醇水平升高,两者均可影响大鼠的体重,存在一定弊端,而顺势给药可以增加大鼠免疫系统的活力。本研究结果可为阴阳严重分离的慢性疾病如慢性肺炎、慢性肾炎、慢性肝炎、慢性心衰及慢性胃肠炎等患者提供用药指导。但本研究采用的是健康大鼠,而临床上的患者多为阴阳失衡,其对药物的分时给药反应可能会有差异,相关结果与结论还需进一步研究。将来可选择有一定中医证型的大鼠作为研究对象,观察基于阴阳理论进行分药分时给药对疾病的治疗效果。