高效液相色谱法应用于消炎镇痛膏中颠茄流浸膏的质量控制

蔡靖波，任琦，袁铭铭，许妍

（江西省药品检验检测研究院，国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室，江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心，江西南昌，330029）

0 引言

消炎镇痛膏收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第八册，由颠茄流浸膏、薄荷脑等七味药组成，具有活血化瘀、祛风除湿、抗炎消肿、快速止痛的功效。消炎镇痛膏临床应用于神经痛、风湿痛、肩痛、扭伤、关节痛、肌肉疼痛等［1，2］。方中颠茄流浸膏解痉止痛；麝香草脑芳香开窍，有解毒散结作用［3］。由于具有良好的临床疗效和广泛的临床应用，故而颠茄流浸膏需求量日益增加。但是，颠茄流浸膏和颠茄浸膏现行法定标准质控项目少，且颠茄浸膏无文号管理，大部分由非药品生产企业生产，其原料来源、工艺参数等均存在不可控性［4］。而消炎镇痛膏现行标准未对其特征性成分加以控制，难以有效控制产品质量［5］，且目前未见有关消炎镇痛膏中颠茄流浸膏质量控制方面的报道。为了有效地控制产品质量，保证其安全性和有效性，本实验采用高效液相色谱法建立了消炎镇痛膏中的颠茄流浸膏中特征性成分东莨菪内酯的鉴别［6-12］，为科学评价及有效控制消炎镇痛膏中颠茄流浸膏的真实投料提供可靠方法。

1 仪器与试样

1.1 仪器

Agilent 1260系列（全自动）高效液相色谱仪，Chemstation化学工作站，DAD检测器（美国安捷伦公司）；Sartorius BSA 124S-CW电子天平（德国赛多利斯公司）；Sartorius BT 25S电子天平（德国赛多利斯公司）。

1.2 试药与样品

试药：东莨菪内酯对照品（以92.4%计）中国食品药品检定研究院提供，批号：111869-201001；甲醇为色谱纯、水为Milli-Q制备的纯化水；冰醋酸为分析纯；其他试剂均为分析纯。

样品：消炎镇痛膏，具体样品信息见表1。

表1 样品信息

2 方法与结果

2.1 色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Intersil ODSSP色谱柱，柱长为25cm，内径为4.6mm，粒径为5μm）；以乙腈为流动相A，以0.4%磷酸溶液为流动相B，按表2的规定进行梯度洗脱；检测波长为344nm；柱温为25℃；流速为每分钟1.0ml。理论板数按东莨菪内酯峰计算应不低于3000。

表2 流动相梯度洗脱表

2.2 溶液配制

对照品溶液的制备：取适量东莨菪内酯对照品，精密称定，加甲醇制成每1ml含6μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取本品280cm2，除去盖衬，剪成小块，置500ml圆底烧瓶中，加50%甲醇150ml，加热回流1小时，取50%甲醇液，蒸干，加甲醇使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取续滤液，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 检测波长的选择

因东莨菪内酯在344nm处有最大吸收，故试验采用344nm作为检测波长。

2.3.2 流动相的选择

以乙腈为流动相A，以0.4%磷酸溶液为流动相B，按表2的规定进行梯度洗脱为佳。

2.3.3 专属性实验

取缺颠茄流浸膏的阴性对照样品，按2.2项下方法制成供试品溶液，结果表明阴性对照样品对本法无干扰，结果见图1～4。

图1 东莨菪内酯对照品HPLC色谱图

图2 消炎镇痛膏供试品HPLC色谱图（检出东莨菪内酯）

图3 供试品色谱图（未检出东莨菪内酯）

图4 缺颠茄流浸膏的阴性对照样品HPLC色谱图

2.3.4 不同品牌的色谱柱耐用性考察

取同一供试品溶液按2.2项方法制成供试品溶液，比较不同品牌的色谱柱，考察本方法的耐用性。

按2.1项所述色谱流动相，取供试品溶液采用Agilent 1260 Infinity Ⅱ高效液相色谱仪分别使用Intersil ODS-SP色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）、CAPCELL PAK C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）、Waters Sunfire C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）进行分析，记录色谱图。结果显示三个品牌的色谱柱分离效果均较好，因此本课题组选用了Intersil ODS-SP（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱进行消炎镇痛膏指纹图谱研究。

2.3.5 空白溶剂试验

取甲醇，采用2.1项下色谱条件，进样10μl，记录色谱图。结果显示空白溶剂在色谱图中未出现与供试品溶液相应的色谱峰。

2.3.6 检出限

精密称取东莨菪内酯对照品16.06mg，置于25ml量瓶中，加甲醇使之溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。精密量取上述对照品储备液1ml，置于100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取上述对照品溶液1ml，置于100ml量瓶中，加阴性对照溶液稀释至刻度，即得东莨菪内酯检出限溶液。按2.1项下色谱条件进样10μl，记录色谱图，采用信噪比法计算出能被可靠地检出的被测物质最低的浓度。

检出限为对照品浓度×对照品进样量×稀释倍数/供试品进样量/取样量×1000×100=0.02μg/100cm2。

2.4 样品测定及结果

取本品5个生产厂家共10批消炎镇痛膏进行测定，结果C企业2批次均未检出东莨菪内酯。

3 讨论

本文通过高效液相色谱法鉴别消炎镇痛膏中的颠茄流浸膏的特征性成分东莨菪内酯。采用高效液相色谱法测定C企业2批次样品未检出东莨菪内酯，推测该企业在生产过程中可能未投颠茄流浸膏，用阿托品替代投料，存在严重药品质量风险。生产企业应严格执行国家药品标准和相应的GMP管理规定，加强药品生产与质量管理，保证药品质量安全有效。同时监管部门应加强对中成药制剂的监管力度。