无防腐剂保存法对尿液标本生化参数测定结果的影响

张立敏，胡金川，陈松楠，李 岩，刘 畅，董洪方，王庆凯

(1.中国人民解放军联勤保障部队北戴河康复疗养中心健康管理部，河北 秦皇岛 066100；2.北京大学第三医院秦皇岛医院检验科，河北 秦皇岛 066000)

尿液是多种代谢产物排泄的载体，具有标本无创采集、患者依从性好、检测方便快速等优点，且不受内环境稳态调节机制影响，广泛用于肾脏疾病、痛风、胰腺炎、糖尿病、酸碱平衡与电解质紊乱等疾病的诊断和治疗[1-7]。尿液生化分析常用标本类型是随机尿和24 h尿。随机尿生化参数受饮食、运动、时段等影响，日内差异较大，不能真实反映机体代谢状况，而采集患者24 h内全部尿液进行检测可以消减上述干扰因素影响，是理想的尿液生化参数检测标本[8-9]。但由于24 h尿液标本采集时间长，尿液易变质，如何妥善保存是分析前质量控制的关键环节，也是影响结果真实性的关键因素。我们探讨不同温度条件下尿液无防腐剂保存24 h对16项生化参数测定结果的影响，以期摸索出一种适宜临床应用的安全、简便、准确的24 h尿液定量生化参数检测的标本收集保存方法。

1 材料与方法

1.1 样本制备与保存

收集联勤保障部队北戴河康复疗养中心100例患者的尿液标本，每5例患者的尿液混装到一起，制备20份混合尿。每份混合尿分装到4个尿管，每管10 mL，1管作为新鲜尿(即刻组)，另3管加盖分别保存于4 ℃冰箱(低温组)、25 ℃室内(常温组)和37 ℃恒温箱(高温组)，放置24 h。

1.2 主要仪器与试剂

H-800全自动尿液分析仪以及配套质控品、试剂(长春迪瑞公司)；AU5800全自动生化分析仪(美国贝克曼公司)，钾、钠、氯配套检测试剂及校准液(美国贝克曼公司)，微量总蛋白、微量白蛋白、免疫球蛋白G检测试剂盒及定标品、质控品(德国Diasys公司产品)，NAG酶、尿素氮、尿酸、葡萄糖、淀粉酶、磷检测试剂盒(北京利德曼公司产品)，β2-微球蛋白、钙、镁检测试剂盒(北京世纪沃德公司产品)，肌酐检测试剂盒、生化多项定标品、质控品(英国Landox公司)。测试前，采用常规方法对仪器进行校准、质控，合格后进行样本检测。

1.3 样本检测

即刻样本和保存24 h后样本分别检测尿常规(记录pH值)和微量总蛋白、微量白蛋白、β2-微球蛋白、免疫球蛋白G、NAG酶、尿素氮、肌酐、尿酸、葡萄糖、淀粉酶、钾、钠、氯、钙、磷、镁等16项生化参数。其中，3种温度条件下保存24 h后样本各取5份，分别采取不离心和离心后取上清2种方法取样测定各参数，经统计学分析确定离心对测定结果无影响后，其余样本均离心后取上清测定生化参数。

1.4 统计学方法

2 结 果

2.1 保存后尿液样本离心处理前、后测定结果的比较

低温组、常温组和高温组尿液保存24 h后，标本离心处理前、后16项生化参数测定结果比较，差异均无统计学意义(P>0.05)(表1)。

表1 保存24 h后样本离心处理前、后测定结果比较

2.2 新鲜尿不同温度条件保存前、后16项生化参数测定结果比较

与新鲜尿(即刻组)比较：常温组尿葡萄糖及高温组尿肌酐、葡萄糖、钙、镁测定结果差异有统计学意义(P<0.05)，各组其他参数测定结果差异均无统计学意义(P>0.05)。高温组尿pH值较保存前明显升高，差异有显著统计学意义(P<0.01)(表2)。

表2 新鲜尿不同温度条件保存前、后16项生化参数测定结果比较

3 讨 论

尿液生化检测作为一项无创检查，因留样方便、无痛苦且检测快速、灵敏、准确而广泛应用于临床。由于尿中物质排泄常不恒定，随机尿不能真实反映物质排泄情况，而采集24 h尿液可以平衡一日内各时间点物质排泄浓度差异，客观反映物质排泄情况，对肾功能、糖代谢、胰腺炎、尿路结石、钙磷代谢、甲状旁腺功能、酸碱平衡与电解质紊乱等疾病的诊断、治疗和预后具有非常重要的意义[10-12]。

目前临床上主要根据《全国临床检验操作规程》第四版推荐的方式收集保存24 h尿液，冷藏保存法在技术上为首选方法，无冷藏条件则采用化学防腐剂保存法[13]。虽然2种方法均能取得较好效果，但患者依从性均较差。在无专用冷藏箱条件下，使用家用冰箱保存尿液令人难以接受。而采用防腐剂法更是具有众多缺点：①不同检测项目添加防腐剂种类不同，患者既难以掌握，又需多次留尿；②二甲苯或甲苯等防腐剂不溶于水，在尿液上层形成油滴样薄膜，容易与尿液一起被取样，导致检测结果偏低；③患者难以准确把握防腐剂添加量，添加量不足起不到防腐作用，过量则容易干扰检测；④防腐剂常有毒性、腐蚀性，存在安全隐患。因此，寻找一种适宜临床应用的尿液收集保存方法，对提高24 h尿液生化项目的临床效用、保障医患安全具有重要意义。

既往有研究对24 h尿液收集保存方法进行了探索[14-20]，研究方法包括常温法、冷藏法、加防腐剂法、小标本法等，研究项目主要集中于总蛋白，个别研究涉及钾、钠、氯、钙、磷、尿素、尿酸及肌酐，研究方法和项目存在局限性，不能大范围推广应用。本研究探讨了不同温度条件下不加防腐剂尿液保存方法对16项尿液生化参数定量测定的影响。研究结果表明，尿液保存24 h后，低温组、常温组和高温组尿液离心处理前、后16项生化参数测定结果差异均无统计学意义(P>0.05)，表明尿液中的细菌等不溶物对检测结果无明显影响。但为避免尿液中不溶物堵塞试剂针，离心取上清检测仍为最佳选择。与新鲜尿(即刻组)比较，常温组尿葡萄糖及高温组尿肌酐、葡萄糖、钙、镁测定结果差异有显著统计学意义(P<0.01)。由于常温或高温长时间保存尿液中会有大量细菌繁殖，细菌消耗葡萄糖，致尿葡萄糖含量降低。高温组尿液pH显著升高，推测可能是导致尿肌酐、钙、镁测定结果显著降低的原因。试验人员取一组尿液样本，采用NaOH溶液调整配制成一组高pH尿液，两组尿液测定结果比较，高pH组尿液肌酐、钙、镁测定结果显著低于低pH值组尿液，验证了这一推论。

综上，在24 h尿液生化定量参数测定时，尿葡萄糖测定采用低温法、其他15项生化参数测定采用常温法是尿标本收集保存的最适宜方法，既可保证各项参数检测结果的真实性，又大大提高了尿液保存的便利性，减少了环境污染，值得临床大力推广，替代传统方法。