夹竹桃和龙须藤合剂对正常大鼠的痛觉调节作用

王紫怡,李佳林,王雪纯,付立波

(长春师范大学生命科学学院,吉林 长春 130032)

夹竹桃(Neriumindicum)是一种广泛分布于热带和亚热带地区的观赏植物,在我国各地区均有栽植[1]。夹竹桃的叶、皮、根、花中含有多种生物活性成分,具有强心、利尿、 抗癌、镇静、镇痛、抗菌、消炎等功效[2]。有报道研究了同属植物欧洲夹竹桃中两种果胶类酸性多糖的化学结构和药理活性,通过实验证实了夹竹桃叶提取物对小鼠的镇痛作用[3-4]。

龙须藤(Bauhiniachampionii)为豆科羊蹄甲属植物,又称羊蹄藤、乌郎藤、过岗圆龙、九龙藤、梅花入骨丹等, 分布于华东、华中、华南、西南等地。其味苦、涩,性平,具有祛风除湿、活血止痛、健脾理气等功效,临床用于治疗风湿痹痛、胃脘胀痛、跌打损伤、痢疾等症[5]。目前从龙须藤中已分离鉴定出数十种化合物,主要含有黄酮类、糖类、挥发油等成分[6]。

目前治疗疼痛的方法有很多,常用的是口服镇痛药物。临床上常用的镇痛药物有如布洛芬、吲哚美辛、阿司匹林等,虽然这些药物具有明显疗效,但常常伴随着一些副作用。因此具有疗效温和、稳定、安全的中药治疗方法越来越受到人们的重视[7]。为探究中草药材夹竹桃与龙须藤合剂是否具有镇痛作用,本次试验采用灌胃和行为学测痛方法来探究夹竹桃与龙须藤合剂是否参与正常大鼠的痛觉调节作用,以便为后续中草药材的镇痛作用的研究提供参考。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物

6只雄性Wistar大鼠,体重在180～200 g,由白求恩医学动物实验中心提供。每只单独饲养,3天换一次垫料,室温稳定在25 ℃,提供充足水源,一天3次喂食。

在实验前期,对大鼠进行热板和压板的适应性训练。大约每天上午9点进行测试,每只大鼠测3轮,连续测5天。以便大鼠适应实验环境,得到更为准确的实验数据。

1.1.2 实验用品及仪器

夹竹桃和龙须藤干叶片原样、氯化钠注射液(辽宁民康制药有限公司)、灌胃针 (深圳瑞沃德公司)、YLS-6B智能热板仪(上海曼普生物公司)、YLS-3E电子压痛仪(意大利UGO)、电磁炉。

1.2 实验方法

1.2.1 不同质量浓度的夹竹桃与龙须藤的合剂的配制

取夹竹桃,龙须藤干叶片原样各20 g,分别加水进行煎煮,使其溶液浓缩至500 mL,得到40 mg/mL的母液。取母液配制浓度分别为5、20、40 mg/mL的合剂备用。灌胃用量每次2 mL。

1.2.2 行为学测痛

1.2.2.1 热板测试

将电子热板仪温度设定为(52±0.2)℃,将大鼠双爪分别与热板仪接触,踩下计时器,此时开始计时,由于大鼠会感知到足底的灼热感,出现后足回缩,离开与热板仪的接触面,此时再次踩下计时器,计时结束。热板仪上显示的测量时间,即为大鼠的热痛阈值(hindpaw withdrawal latency,HWL)。以第6天注射生理盐水后测得大鼠的HWL作为对照,从第7天开始用不同浓度的夹竹桃和龙须藤合剂进行灌胃。在每次灌胃之前需要先测3次大鼠的HWL,作为基础值。灌胃之后在第5、10、15、20、30、45、60 min进行热板测痛,测大鼠的HWL。

1.2.2.2 压板测试

将压板示数的指针调至0,将大鼠双足分别与压板的圆形台面接触,此时开始踩压力板,持续踩踏,示数会逐渐加大,这也意味着压力逐渐增大。直至大鼠后足发生撤回,脱离圆形台面,停止踩踏,此时指针的示数即视为大鼠的压痛阈值HWL。以第6天注射生理盐水后测得大鼠的HWL作为对照,从第7天开始用不同浓度的夹竹桃和龙须藤合剂进行灌胃。在每次灌胃之前先测3次大鼠的HWL作为基础值。灌胃之后在第5、10、15、20、30、45、60 min进行压板测痛,测大鼠的HWL。

1.2.3 数据处理方法

用实验前测得的3次HWL值的平均值作为基础值,实验中测得的结果与其比较。应用SPSS 27.0进行数据分析,非正态分布数据应用非参数检验方法,正态分布数据应用t检验方法,P<0.05为差异具有统计学意义。

2 实验结果

2.1 灌胃5 mg/mL夹竹桃与龙须藤合剂后正常大鼠的HWL的变化

由表1可知,与灌入生理盐水组相比,灌胃5 mg/mL的合剂对正常大鼠右爪的热刺激HWL有极显著差异(P<0.01);左爪的机械刺激HWL有显著差异(P<0.05);对左爪热刺激HWL和对右爪的机械刺激HWL无显著差异(P>0.05)。

表1 灌胃5 mg/mL夹竹桃与龙须藤合剂后对大鼠热刺激与机械刺激HWL的影响

2.2 灌胃20 mg/mL夹竹桃与龙须藤合剂后正常大鼠的HWL的变化

由表2可知,与对照组相比,灌胃20 mg/mL的合剂对正常大鼠的左爪的热刺激和机械刺激HWL均有显著差异(P<0.05);右爪的热刺激HWL和机械刺激HWL均无显著差异(P>0.05)。

表2 灌胃20 mg/mL夹竹桃与龙须藤合剂后对大鼠热刺激与机械刺激HWL的影响

2.3 灌胃40 mg/mL夹竹桃与龙须藤合剂后正常大鼠的HWL的变化

由表3可知,与灌入生理盐水组相比,灌胃40 mg/mL的合剂对正常大鼠左右爪的机械刺激HWL均有显著差异(P<0.05);对右爪的热刺激有极显著差异(P<0.01);对左爪热刺激HWL无显著差异(P>0.05)。

表3 灌胃40 mg/mL夹竹桃与龙须藤合剂后对大鼠热刺激与机械刺激HWL的影响

3 讨论

本次实验结果表明,三个浓度(5、20、40 mg/mL)下的夹竹桃与龙须藤合剂对正常大鼠灌胃,大鼠的HWL与生理盐水组相比有了明显的增大,均在15 min大鼠的HWL达到最佳,表明合剂起到了明显的镇痛作用。随着时间的增加,正常大鼠对热刺激和机械刺激的痛觉敏感程度逐渐降低。

通过高效液相色谱法和液-质联用法(LC-MS)等提取夹竹桃中的化学成分,可知强心苷类化合物在夹竹桃中含量最多,是最主要的活性成分[8-9]。且强心苷具有显著的强心、抗癌、抑菌、镇痛、祛瘀等作用[10]。运用硅胶、聚酰胺等柱色谱手段进行分离纯化,其成分大多是醇提取物,且这些成分的镇痛抗炎作用较强[11]。有临床报道,采用龙须藤煎煮液能缓解类风湿性关节炎患者的症状,降低关节疼痛,增加双手握力,并能在较短时间内使患者腰腿疼痛缓解[12]。中药可通过增加5-羟色胺含量及其受体的表达、激活阿片受体、抑制环氧合酶活性、调节细胞因子分泌等来发挥镇痛作用[13]。对于夹竹桃与龙须藤合剂中的主要镇痛成分是如何参与大鼠痛觉调节机制,目前尚不清楚,有待于进一步实验研究。