血清LncRNA MYLK-AS1水平对早期肝癌的诊断效果

黄颖　季仙依　王钦君　季沈杰

【摘要】  目的  探讨血清长链非编码肌球蛋白轻链激酶反义RNA1（LncRNA MYLK-AS1）水平对早期肝癌诊断价值。方法  选取2018年4月- 2021年4月医院收治的72例早期肝癌患者为病例组，并选取同期70例肝炎以及肝硬化患者为对照组。比较两组患者血清LncRNA MYLK-AS1水平，评价血清LncRNA MYLK-AS1水平对早期肝癌的诊断价值。结果  病例组患者血清LncRNA MYLK-AS1水平高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。病例组患者不同年龄、性别、是否存在包膜、TNM分期之间血清LncRNA MYLK-AS1相对表达量比较，差异均无统计学意义（P>0.05）；而高分化和存在微血管侵犯的病例组患者血清LncRNA MYLK-AS1相对表达量升高，差异有统计学意义（P<0.05）。血清LncRNA MYLK-AS1对于早期肝癌诊断的AUC曲线下面积为0.827（95%CI：0.756～0.898），以血清LncRNA MYLK-AS相对表达量≥102为早期肝癌诊断标准，诊断的灵敏度=97.22%，特异度=91.43%，Kappa=0.893，其在早期肝癌诊断价值较高。结论  早期肝癌患者血清LncRNA MYLK-AS1水平明显升高，且与分化程度和微血管侵犯存在一定关系，其水平对于早期肝癌诊断的真实性及一致性均较高，具有较高的临床应用价值。

【关键词】  LncRNA MYLK-AS1；肝癌；诊断价值

中图分类号  R446    文献标识码  A    文章编号  1671-0223（2023）21--04

肝癌是临床上较为多见的恶性肿瘤，具有发病快和恶性程度高的特点[1]。由于肝癌早期症状和体征并不明显，多数患者出现症状就医时已经进展至中晚期，错失了最佳治疗时期，因此早期诊断极为重要[2]。CT和磁共振成像是临床上的常见诊断方式，但两种方法的灵敏度和特异度并不高，容易出现漏诊和误诊的情况[3]。目前血清学检测已逐步运用在恶性肿瘤的早期筛查中。长链非编码RNA（long noncoding RNA，lncRNA）是一种长度大于200的非编码RNA，可通过蛋白质、信号通路以及MicroRNA（miRNA）等在肝癌的发展中起到关键作用[4]。相关的研究发现[5-6]lncRNAs参与蛋白质编码基因的染色质修饰、转录和翻译调节，或通过特异性结合调节蛋白质功能和活性。LncRNAs的表达失调与包括癌症在内的多种疾病发生发展密切相关[7-9]，例如lncRNA与胰腺癌进展有关，lncRNAs表达异常可作为胰腺癌诊断和预后的良好生物标志物[10]。肌球蛋白轻链激酶反义RNA1（myosin light chain kinase antisense，MYLK-AS1）是信息转导中的重要蛋白质，在肿瘤细胞和血管生成中起到关键的作用[11]。但尚未出现关于MYLK-AS1对于肝癌的早期诊断研究，因此本研究旨在探究血清长链非编码肌球蛋白轻链激酶反义RNA1（LncRNA MYLK-AS1）水平对早期肝癌诊斷价值。

1  对象与方法

1.1  研究对象

选取2018年4月- 2021年4月医院收治的72例早期肝癌患者为病例组，并选取同期70例肝炎以及肝硬化患者为对照组。纳入标准：①观察组患者符合《现代肝癌诊断治疗学》[12]中肝癌诊断标准，且以病理活体组织检查为金标准；②观察组患者均为BCLCA期肝癌；③患者神经意志正常。排除标准：①患者合并其他部位恶性肿瘤；②患者入院前已接受其他药物治疗；③患者合并血液系统严重病变。观察组男性50例，女性22例；年龄35～70岁，平均52.77±4.38岁。对照组男性49例，女性23例；年龄34～71岁，平均52.13±4.46岁，两组患者性别、年龄比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2  资料收集

内容包括患者年龄、性别、是否存在包膜、TNM分期、分化程度和微血管侵犯情况等。

1.3  实验室检测方法

入院后次日取空腹静脉血5ml，高速离心分层取血清送实验室检查。采用RNA提取试剂盒（北京索莱宝科技公司）以及cDNA合成试剂盒（上海联迈生物工程有限公司）进行逆转录合成第一链cDNA。通过荧光定量PCR仪（南京贝登医疗股份有限公司）完成扩增反应。采用引物（上海英骏生物技术有限公司），正向引物：5′-TTGCAGTGTTCAGCACTGGCACA-3′;反向引物：5′-ATTCGACGACCAGTGTTTCAGT-3′。反应条件：在95℃下反应3min，在95℃下反应30s，在60℃下反应30s，在72℃下反应40s，以上步骤连续完成38个循环。随后通过２-ΔΔCt计算MYLK-AS1的相对表达量。

1.4  数据处理方法

采用SPSS 20.0统计学软件进行数据分析处理，计量资料用“±s”表示，组间均数比较用t检验；计数资料计算百分率，组间率的比较用χ2检验。采用ROC曲线评价血清LncRNA MYLK-AS1诊断早期肝癌的效能。P<0.05为差异有统计学意义。。

2  结果

2.1  两组患者血清LncRNA MYLK-AS1水平比较

病例组患者血清LncRNA MYLK-AS1的相对表达量高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2  病例组患者不同临床特征血清LncRNA MYLK-AS1水平比较

病例组患者不同年龄、性别、是否存在包膜、TNM分期之间血清LncRNA MYLK-AS1相对表达量比较，差异均无统计学意义（P>0.05）；而高分化和存在微血管侵犯的病例组患者血清LncRNA MYLK-AS1相对表达量升高，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2.3  血清LncRNA MYLK-AS1对于早期肝癌的诊断效能

ROC结果显示（见图1），血清LncRNA MYLK-AS1对于早期肝癌诊断的AUC曲线下面积为0.827（95%CI：0.756～0.898），表明血清LncRNA MYLK-AS1对于早期肝癌具有一定的诊断效能（P<0.05）。根据约登指数结合临床需要，以血清LncRNA MYLK-AS相对表达量=102为诊断的界值。

2.4  血清LncRNA MYLK-AS1对于早期肝癌的诊断效果

以血清LncRNA MYLK-AS相对表达量≥102为早期肝癌诊断标准，样本的诊断结果显示，血清LncRNA MYLK-AS诊断早期肝癌灵敏度及特异度均达到90%以上，并且与实际结果具有高度一致性（Kappa=0.893），表明血清LncRNA MYLK-AS对早期肝癌的诊断价值较高，见表3。

3  讨论

肝癌是我国常见的恶性肿瘤，由于该病初期并无明显症状，多数患者确诊时已经进展到中晚期[13]。虽然肝癌的治疗已取得显著进展，但总体发病率和死亡率尚无明显改观，进一步提高患者生存预后仍面临严峻挑战。目前早发现、早诊断、早治疗是防治原发性肝癌的关键环节。临床上肝癌诊断金标准是组织活检，但这种方法有创伤性，尚需要更有效的诊断指标[14]。研究发现[15]甲胎蛋白、癌胚抗原、糖蛋白抗原199等生物标志物作为筛选原发性肝癌的重要指标，其灵敏度、特异性均不高，部分原发性肝癌患者用上述指标检测无法确诊。

LncRNA能够在肿瘤的发生和发展中发挥关键的作用，是目前临床上常见的抑癌或者抑癌基因，其可作为miRNA的“分子海绵”，与miRNA共同调控目的基因的表达，进而调控细胞增殖、炎性因子分泌、细胞凋亡、细胞迁移等细胞生物学行为，进而影响癌症进展[16-18]。LncRNA MYLK-AS1处在第3号染色体上，最初被证实具有人类基因内替代启动因子的功能，且在近几年已被证实是人类的致癌基因[19]。相关研究发现[20]，较高MYLK-AS1表达的胃癌患者生存期明显缩短，且其表达的上调明显促进了胃癌的增殖和分化。本研究结果显示，相较于对照组患者，观察组患者血清LncRNA MYLK-AS1水平更高。提示，肝癌患者血清LncRNA MYLK-AS1存在明显的升高。高度表达的LncRNA MYLK-AS1会促进肝细胞周期的发展，同时还能够抑制肝癌细胞的凋亡，说明表示其水平在细胞增殖中起到一定的作用[21-22]。本研究结果显示，中低分化和存在微血管侵犯患者血清LncRNA MYLK-AS1水平明显高于高分化和不存在微血管侵犯患者。这也进一步证实了LncRNA MYLK-AS1与肝癌的增殖分化存在的关系。本研究发现，本研究进一步分析发现，血清LncRNA MYLK-AS1对于早期肝癌诊断的AUC曲线下面积为0.827（95%CI：0.756～0.898），以血清LncRNA MYLK-AS相對表达量≥102为早期肝癌诊断标准，诊断的灵敏度=97.22%，特异度= 91.43% ，Kappa= 0.893。说明LncRNA MYLK-AS1对于早期肝癌的诊断价值较高。

综上所述，早期肝癌患者血清LncRNA MYLK-AS1水平明显升高，且与分化程度和微血管侵犯存在一定关系，其水平对于早期肝癌诊断的真实性和一致性均较高，有临床应用价值。但本次研究样本量较小，且未进行外推实验，需要继续深入研究，进一步明确临床应用效果。

4  参考文献

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[2023-07-05收稿]

作者单位：226200  江苏省启东市人民医院/启东肝癌防治研究所/南通大学附属启东医院检验科

*通讯作者