p53 抗体、miR-451、CYFRA21-1、CEA 联合检测对食管鳞状细胞癌的诊断价值

林 琳,曹伟娟

(1.郑州大学附属肿瘤医院 河南省肿瘤医院检验科,郑州 450000;2.浙江药科职业大学,浙江 宁波 315100)

食管癌是食管上皮细胞在多种诱因作用下出现的恶性增殖导致的癌变,其中病理分型以鳞状细胞癌居多[1]。我国食管癌发病率高,每年的发病率约占所有癌症的2%,且在患者人群中有较高的病死率[2]。在对于食管鳞状细胞癌的诊断中,多数患者在确诊时多已处于中晚期阶段,不利于患者诊疗活动的开展,导致患者病情迅速恶化进展至终末期[3]。食管鳞状细胞癌诊断的“金标准”为组织病理学活检,但作为有创性检查,限制了其临床应用,而影像学检查如CT、MRI存在准确率不高、检测费用较高等问题[4]。肿瘤标志物检测是常用的检查手段,具有简便、快速、成本低等优点,p53 抗体、微小RNA-451(miR-451)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、癌胚抗原(CEA)均为食管癌患者常见肿瘤标志物,但单一肿瘤标志物诊断存在灵敏度、特异度不足的问题,联合检测成为近几年肿瘤标志物检测的发展方向[5-6]。为此,本文以食管鳞状细胞癌患者为研究对象,采用p53 抗体、miR-451、CYFRA21-1、CEA联合检测,评估对患者的诊断价值。

1 对象与方法

1.2 方法

1.2.1 检测方法 观察组患者及对照组受试者入院后采集晨起空腹静脉血约3 mL,以Stuart FC5型实验室高速离心机(广州市赛拓仪器科技有限公司)离心,转速8 000 rpm、离心半径5 cm、离心15 min,得到血清上清液标本,将处理后的血清样本在37 ℃恒温箱中孵育,45 min后以磷酸盐缓冲液洗脱后,在每孔中加入终止液100 μL,然后以HBS-ScanY全波长酶标分析仪(南京德铁实验设备公司)对p53 抗体(0～10 U·mL-1)、miR-451(0～50 U·mL-1)、CYFRA21-1(0～50 U·mL-1)、CEA(0～100 U·mL-1)水平进行检测,试剂盒由上海梵态生物科技有限公司提供。

1.2.2 观察指标 ①观察组与对照组各项指标比较:比较观察组患者与对照组受试者的p53 抗体、miR-451、CYFRA21-1、CEA水平。②观察组不同分期各项指标比较:根据观察组患者不同TNM分期进行分类统计,比较患者的p53 抗体、miR-451、CYFRA21-1、CEA水平。③诊断一致性比较:以组织病理学结果为“金标准”,计算对比p53 抗体、miR-451、CYFRA21-1、CEA检查及联合检查与病理学诊断结果的一致性,各检测指标诊断食管鳞状细胞癌阳性判断标准为:p53 抗体>0.5 U·mL-1、miR-451>10 U·mL-1、CYFRA21-1>3.3 μg·L-1、CEA>5 μg·L-1[7],联合检查法阳性判断标准为p53 抗体、miR-451、CYFRA21-1、CEA指标中有一项为阳性即可判断为阳性结果,Kappa值>0.75提示一致性较高,Kappa值为0.40～0.75说明一致性一般,Kappa值<0.40一致性较差。④ 诊断效能指标比较:以组织病理学结果为“金标准”,对p53 抗体、miR-451、CYFRA21-1、CEA检测及联合检测法的诊断效能指标进行计算比较,灵敏度=真阳性/(真阳性+假阴性) ×100%,特异度=真阴性/(假阳性+真阴性)×100%,阳性预测值=真阳性/(真阳性+假阳性)×100%,阴性预测值=真阴性/(真阴性+假阴性)×100%,准确度=(真阳性+真阴性)/总例数×100%[8]。

2 结果

2.1 2组受试者各项指标水平比较 观察组p53 抗体、miR-451、CYFRA21-1、CEA水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 2组受试者各项指标水平比较

2.2 观察组患者不同分期各项指标比较 观察组内患者的TNM分期越高,p53 抗体、miR-451、CYFRA21-1、CEA表达水平依次升高,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 观察组患者不同分期各项指标比较

2.3 诊断一致性比较 经组织病理学检查,确诊食管鳞状细胞癌患者86例,经Kappa一致性检验,联合检测诊断食管鳞状细胞癌与“金标准”有高度一致性(Kappa值=0.908)。见表3。

表3 诊断一致性比较[n(%)]

2.4 诊断效能比较 联合检测诊断指标包括灵敏度、特异度、阴性预测值及正确率高于p53 抗体、miR-451、CYFRA21-1、CEA各项指标单一检测结果(P<0.05)。见表4。

表4 诊断效能比较

3 讨论

近些年,由于各种因素的影响,如工作、生活压力的增加,不良生活习惯、不良饮食习惯的形成,食管癌的发病率逐年升高,使其在临床诊治中的关注度不断提高。然而早期食管鳞状细胞癌由于缺乏典型的症状表现,难以引起患者的重视,且缺乏简便、准确的检查手段,易出现漏诊误诊现象,患者在确诊时多处于中晚期阶段,此时患者已经失去了最佳治疗时机,患者在得不到有效治疗的情况下病情迅速进展至终末期[9]。对于食管癌患者确诊的主要依据是组织病理学检查,但作为有创性检查, 患者的耐受性较差,且操作复杂,难以快速做出诊断结果。而影像学检查如CT、MRI等,诊断正确率不高,且检测费用较高[10]。随着分子病理技术的广泛应用,推动了食管鳞状细胞癌诊断研究地发展。

在本研究中通过选取临床常见的肿瘤标志物,对疑似食管鳞状细胞癌患者及对照组受试者进行检测比较,结果显示,观察组p53 抗体、miR-451、CYFRA21-1、CEA水平高于对照组,表明上述各项肿瘤标志物参与食管鳞状细胞癌的发生过程。进一步通过对食管鳞状细胞癌患者不同分期间各项标志物水平进行比较,结果显示随着患者的TNM分期越高,p53 抗体、miR-451、CYFRA21-1、CEA表达水平依次升高,表明各肿瘤标志物水平与食管癌病情程度及病情的发展恶化有密切关联。这是因为p53抗体是机体存在的一种小分子蛋白类物质,在基因突变情况下p53基因能够刺激机体产生免疫应答,进而诱导p53抗体的产生,能够使癌细胞的快速凋亡,从而可预防癌变的发生,而突变型的p53的基因位点和结构发生改变,会失去抑癌作用,转而成为促癌基因,在癌症疾病中可加快癌细胞的生长繁殖,在癌症疾病发生发展过程中呈高表达[11-12]。miR-451是微小RNA家族中的成员,有研究[13]报道,miR-451与多种癌症疾病的发生发展有关,通过与靶信使RNA紧密结合,抑制信使RNA的翻译转录过程,促进机体正常细胞的凋亡,诱导促癌因子的合成,进而促进癌细胞的释放、转移和增殖。CYFRA21-1是临床常见的肿瘤标志物,既往在肺癌诊断中被广泛应用,近年发现CYFRA21-1在食管癌患者中也呈高表达,在癌症病灶组织的上皮细胞中能够通过蛋白酶的激活加速降解细胞,致使细胞角蛋白片段大量释放入血,引起在癌症疾病中的高表达[14]。CEA是多种癌症疾病的肿瘤标志物,存在于内胚层细胞分化而来的癌症细胞表面,是细胞膜的结构蛋白,具有一定的黏附作用,可用于肿瘤疾病的诊断、疗效判断、病情评估和预后监测等[15]。因此,p53 抗体、miR-451、CYFRA21-1、CEA等肿瘤标志物的检测可用于食管鳞状细胞癌的诊断。本研究中,以组织病理学结果为“金标准”,判断各肿瘤标志物监测诊断食管鳞状细胞癌的诊断正确率,结果显示,联合检测诊断食管鳞状细胞癌与“金标准”有高度一致性,诊断正确率高于单个肿瘤指标的检测。这是因为单个肿瘤标志物受患者个体差异、灵敏度、特异度及偶然因素的影响,影响诊断正确率,而多个指标联合检测,则有助于排除这些因素的影响,从而提高诊断结果的准确性和可靠性。在诊断效能指标比较中,联合检测诊断食管鳞状细胞癌的诊断效能指标包括灵敏度、特异度、阴性预测值及正确率高于各项指标单一检测结果,进一步证实了p53 抗体、miR-451、CYFRA21-1、CEA各指标联合检测在食管鳞状细胞癌中有较高诊断价值。

综上所述,p53 抗体、miR-451、CYFRA21-1、CEA在食管鳞状细胞癌中呈高表达,且各指标联合检测在食管鳞状细胞癌中有较高的诊断正确率,提高诊断的灵敏度、特异度,可作为组织病理学检查的替代手段应用于临床。