溃疡性结肠炎患者结肠黏膜CCL-2、IL-23、MGP表达与临床参数的关系

王莹莹 汪秀梅 陈晓燕

（郑州大学附属郑州市中心医院消化内科，河南 郑州 450001）

溃疡性结肠炎（Ulcerative colitis，UC）为一种慢性非特异性炎性疾病，病变组织多为大肠黏膜、黏膜下层，其病程长，病情易反复，同时具有癌变风险[1-2]。近年来UC的发病率呈逐年上升趋势，其发病与免疫异常关系密切，但其具体机制目前尚不清楚。随着人们对UC认识的不断深入，研究发现UC病情严重程度不同，治疗方案和预后差别较大[3]，故找寻高特异性组织学指标对该类患者的病情及活动度进行判断意义重大。

趋化因子是一类具有诱导附近反应细胞定向趋化的能力的信号蛋白，C-C基序趋化因子配体（C-C motif chemokine ligand，CCL）在直肠癌、结肠癌、胃癌等多种恶性肿瘤中呈高表达[4]。CCL-2为趋化因子家族的一员，推测其与UC、结肠癌的发生、发展有关。白细胞介素-23（Interleukin-23，IL-23）主要产生于抗原呈递细胞，可与靶细胞膜上的IL-23受体结合，激活细胞内信号分子，激活记忆T细胞、树突细胞、巨噬细胞等，产生促炎症因子，进而引起慢性肠道疾病[5-6]。基质Gla蛋白（Matrix Gla protein，MGP）为人体血管和软骨钙化抑制剂，在肿瘤、动脉粥样硬化的发生、发展中具有重要作用[7]，而在炎症性疾病的研究中罕见报道。目前UC患者结肠黏膜CCL-2、IL-23、MGP表达与临床参数的关系目前尚不清楚，鉴于此，本研究收集UC患者结肠黏膜组织、健康者正常黏膜组织进行分析，针对以上问题进行探讨。

1 资料与方法

1.1 临床资料

收集2018年4月至2022年10月医院收治的103例UC患者结肠黏膜组织记为研究组，同一时期单发息肉切除后行结肠镜复查的58例健康者的正常黏膜组织记为对照组。研究组中男62例、女41例，年龄23～68岁，平均年龄42.86±12.37岁，病程22～51 m，平均病程36.27±6.45 m，病变部位：直肠38例、乙状结肠42例、左半结肠23例，缓解期39例、活动期64例（轻度20例、中度31例、重度13例）；对照组中男33例、女25例，年龄22～65岁，平均年龄41.72±12.54岁；两组性别构成比、年龄对比，差异无统计学意义（P＞0.05）。本研究经本院医学伦理委员会审批通过。

纳入标准：符合《炎症性肠病诊断与治疗的共识意见》中UC诊断标准[8]；年龄＞18岁；近期未服用抗生素、止痛类药物；患者对本研究知情同意。排除标准：合并肝肾疾病；合并严重心脑血管疾病；有肠道手术史、吸毒史、药物滥用史；行全结直肠切除手术；合并恶性肿瘤；妊娠或哺乳期女性；合并精神疾病或认知功能障碍；合并免疫系统或血液系统疾病者；合并放射性肠炎、肠道寄生虫病等其他肠道疾病。

1.2 结肠黏膜组织CCL-2、IL-23及MGP mRNA检测

收集所有研究对象结肠黏膜组织，采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real time fluorescence quantitative Polymerase chain reaction，RT-PCR）检测结肠黏膜组织CCL-2 mRNA、IL-23 mRNA及MGP mRNA水平：取结肠黏膜组织，使用Trizol法提取组织RNA，反转录为cDNA，设计CCL-2、IL-23、MGP及内参基因β-actin上下游引物（PCR引物序列见表1）；RT-PCR反应条件：93℃预变性32 s；93℃变性14 s；65℃退火28 s；72℃延伸20 s；41个循环。根据2-ΔΔCt计算CCL-2 mRNA、IL-23 mRNA及MGP mRNA相对表达量。

表1 PCR引物序列表

1.3 统计学分析

所有数据用SPSS21.0统计软件进行分析，计量资料以均数±标准差（±SD）表示，采用t检验；计数资料以率（%）表示，用χ2检验；相关分析用Spearman法。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对比两组结肠黏膜组织CCL-2 mRNA、IL-23 mRNA及MGP mRNA表达水平

研究组结肠黏膜组织CCL-2、IL-23及MGP mRNA表达水平高于对照组（P＜0.05），见表2。

表2 结肠黏膜组织CCL-2、IL-23及MGP mRNA表达水平对比（±SD）

表2 结肠黏膜组织CCL-2、IL-23及MGP mRNA表达水平对比（±SD）

注：与对照组相比，*P＜0.05。

组别 例数 CCL-2 mRNA IL-23 mRNA MGP mRNA研究组 103 2.25±0.95* 2.84±1.33* 3.20±1.39*对照组 58 0.58±0.13 0.62±0.15 0.75±0.23

2.2 结肠黏膜组织CCL-2、IL-23及MGP表达水平与UC患者病情分期的关系

活动期UC患者结肠黏膜组织CCL-2 mRNA、IL-23 mRNA及MGP mRNA表达水平高于缓解期（P＜0.05）；活动期重度UC患者结肠黏膜组织CCL-2 mRNA、IL-23 mRNA及MGP mRNA表达水平高于轻度、中度患者（P＜0.05）；活动期中度UC患者结肠黏膜组织CCL-2 mRNA、IL-23 mRNA及MGP mRNA表达水平高于轻度患者（P＜0.05）；结肠黏膜组织CCL-2、IL-23及MGP表达水平与UC患者病情分期呈正相关（r=0.732、0.748、0.739，P=0.000、0.000、0.000），见表3。

表3 不同UC分期结肠黏膜组织CCL-2、IL-23及MGP表达水平（±SD）

表3 不同UC分期结肠黏膜组织CCL-2、IL-23及MGP表达水平（±SD）

注：与缓解期相比，*P＜0.05；与轻度相比，aP＜0.05；与中度相比，bP＜0.05。

病情分期 例数 CCL-2 mRNA IL-23 mRNA MGP mRNA活动期 64 2.85±0.67* 3.74±0.81* 4.19±0.67*缓解期 39 1.28±0.31 1.36±0.32 1.58±0.36活动期 轻度 20 2.10±0.40 2.82±0.58 3.37±0.50中度 31 2.93±0.24a 3.87±0.25a 4.44±0.26a重度 13 3.78±0.27ab 4.82±0.25ab 4.82±0.25ab

2.3 结肠黏膜组织CCL-2、IL-23及MGP表达水平与UC患者病变范围的关系

依据Montreal分型将病变范围分为E1（直肠）、E2（左半结肠）、E3（广泛结肠）；病变范围为E3的UC患者结肠黏膜组织CCL-2 mRNA、IL-23 mRNA及MGP mRNA表达水平高于E1、E2患者（P＜0.05）；病变范围为E2的UC患者结肠黏膜组织CCL-2 mRNA、IL-23 mRNA及MGP mRNA表达水平高于E1患者（P＜0.05）；结肠黏膜组织CCL-2、IL-23及MGP表达水平与UC患者病变范围呈正相关（r=0.515、0.401、0.389，P=0.000、0.000、0.000），见表4。

表4 不同病变范围结肠黏膜组织CCL-2、IL-23及MGP表达水平（±SD）

表4 不同病变范围结肠黏膜组织CCL-2、IL-23及MGP表达水平（±SD）

注：与E1相比，aP＜0.05；与E2相比，bP＜0.05。

病变范围 例数 CCL-2 mRNA IL-23 mRNA MGP mRNA E1 18 1.35±0.66 1.82±1.04 2.20±1.16 E2 34 2.07±0.79a 2.65±1.25a 2.99±1.36a E3 51 2.68±0.89ab 3.29±1.29ab 3.67±1.31ab

2.4 结肠黏膜组织CCL-2、IL-23及MGP表达水平与UC患者内镜分级的关系

依据Truelove标准分为I级、Ⅱ级及Ⅲ级；内镜分级为Ⅲ级的UC患者结肠黏膜组织CCL-2 mRNA、IL-23 mRNA及MGP mRNA表达水平高于I级、Ⅱ级患者（P＜0.05）；病变范围为Ⅱ级的UC患者结肠黏膜组织CCL-2 mRNA、IL-23 mRNA及MGP mRNA表达水平高于I级患者（P＜0.05）；结肠黏膜组织CCL-2、IL-23及MGP表达水平与UC患者内镜分级呈正相关（r=0.681、0.623、0.602，P=0.000、0.000、0.000），见表5。

表5 不同内镜分级结肠黏膜组织CCL-2、IL-23及MGP表达水平（±SD）

表5 不同内镜分级结肠黏膜组织CCL-2、IL-23及MGP表达水平（±SD）

注：与Ⅰ级相比，aP＜0.05；与Ⅱ级相比，bP＜0.05。

内镜分级 例数 CCL-2 mRNA IL-23 mRNA MGP mRNAⅠ级 35 1.44±0.61 1.81±0.95 2.10±1.03Ⅱ级 47 2.43±0.73a 3.02±1.17a 3.48±1.23aⅢ级 21 3.20±0.77ab 4.14±0.85ab 4.40±0.92ab

3 讨论

UC为一种病因不明的慢性直肠和结肠炎性病变，其临床治愈难度大，治疗后易复发，给患者及其家属带来了严重的精神和经济困扰[9-11]。UC病因及发病机制目前尚不明确，一些学者认为其发生可能与遗传、黏膜屏障功能及免疫等因素有关，其中免疫因素关注相对较多[12]。UC患者病情迁延不愈，易反复发作，有研究表明[13]，UC病程越长，癌变发生风险越高；故早期对UC病情进行判断，及早对癌变发生进行诊断，并指导临床给予有针对性的治疗意义重大。本研究通过探讨UC患者结肠黏膜CCL-2、IL-23、MGP表达与临床参数的关系，对临床该类患者的治疗、预后改善具有一定的理论参考依据。

本研究中，研究组结肠黏膜组织CCL-2 mRNA、IL-23 mRNA及MGP mRNA表达水平高于对照组，提示与正常黏膜组织相比，UC患者病变结肠黏膜CCL-2、IL-23、MGP表达异常升高。为维持肠的平衡，正常肠黏膜免疫系统需在促炎、抗炎细胞因子之间保持平衡，若平衡被打破，可能会致使效应细胞过度增殖或调节细胞功能降低，进而可加剧黏膜的炎症反应[14-17]。相关研究表明[18]，炎症因子在UC的发生发展中具有重要作用，CCL-2可有效趋化巨噬细胞、单核细胞向炎症区域的方向聚集，其表达水平与UC炎症程度、疾病进展关系密切。

炎症反应是UC发生、发展的病理特征之一，而IL-23可活化记忆T细胞，并可产生IL-6、IL-17炎性因子，进而可致使肠道发生慢性炎症[19-21]。辛群等[22]人研究表明，IL-23在UC疾病的进展中具有重要作用，且黏膜中的IL-23表达量可反应疾病的活动度。MGP为一种小分子量基质蛋白，有关研究表明[23-24]，MGP表达上调、MGP启动子区甲基化下调可致使UC患者免疫失衡。董旭旸等[25]人研究发现，MGP与UC活动度、病情关系密切，随着炎症程度的加重，MGP呈升高趋势，且结肠黏膜组织MGP表达水平与梅奥（Mayo）内镜评分相关。本研究中，结肠黏膜组织CCL-2、IL-23及MGP表达水平与UC患者病情分期、病变范围及内镜分级均呈正相关，说明三者均参与UC的发生发展。

综上所述，与正常黏膜组织相比，UC患者病变结肠黏膜CCL-2、IL-23、MGP表达异常升高，且UC患者结肠黏膜CCL-2、IL-23、MGP表达与病情分期、病变范围及内镜分级有关，可作为临床该类患者病情判断、预测早期癌变的重要参考指标，但其具体作用机制、调控因素仍有待进一步深入研究。