不同免疫检验法对乙肝病毒感染血清标志物检测的效果分析

石永林

摘要：目的 探讨不同免疫检验法对乙肝病毒感染血清标志物检测的效果。方法 选取我院2021年5月～2023年3月接收的40例疑似乙肝病毒感染患者为研究对象，均实施ECL检测（电化学发光法检测）及ELISA检测（酶联免疫吸附试验），将实时荧光定量多聚酶链反应（PCR）检测结果作为金标准。比较乙肝病毒感染血清标志物检测结果阳性率、HBV-DNA水平和检测成本。结果 开展不同免疫检验法后，ECL检测对于检出乙肝病毒感染血清标志物阳性率有明显提升（P＜0.05）；同时，HBV-DNA水平及检测成本也有较大差异（P＜0.05）。结论 对比ELISA检测方法，ECL检测检出乙肝病毒感染血清标志物阳性率更高，临床应用价值显著。

关键词：电化学发光法检测；酶联免疫吸附试验；乙肝病毒感染；血清标志物

乙肝是由乙型肝炎病毒引起的一种传染性疾病。乙肝病毒主要通过血液和体液传播，包括性传播、血液传播（如共用注射器、输血和器官移植）、母婴传播（妊娠期间、分娩或母乳喂养）以及通过其他感染者的打孔皮肤、黏膜接触传播。乙肝病毒是DNA病毒，包裹在核心颗粒和表面抗原上。病毒的表面抗原（HBsAg）是诊断乙肝感染的关键标志物。在症状和并发症方面，乙肝感染者可能在起初阶段没有明显的症状，也可能表现为疲劳、食欲不振、恶心、呕吐、腹痛等，而长期慢性感染可能导致肝硬化、肝癌等严重并发症。乙肝是一种需要高度关注和管理的重要传染病，可以通过预防措施和适当的医疗干预减少感染的风险，防止病情恶化。本文旨在探讨不同免疫检验法检测乙肝病毒感染血清标志物的效果。

1研究对象和方法

1.1 研究对象

选取我院2021年5月～2023年3月接收的40例疑似乙肝病毒感染患者为研究对象，男26例，女14例，年龄22～64岁，平均（43.12±0.33）岁。

1.2 研究方法

1.2.1 ECL检测

（1）准备样本：获取合适类型的乙肝病毒样本，如血液、血清或血浆。确保样本收集过程遵循相关的安全和无菌操作规范。（2）样本处理：根据需要，进行必要的预处理步骤，如离心和去除杂质，获得纯净的样本。（3）准备试剂与设备：准备电化学发光法检测所需的试剂盒和仪器设备。按照操作手册中的说明，正确配制试剂，并将其预热至适当温度。（4）标准品与质控品：根据要求，配制并标记乙肝病毒检测的标准品和质控品。（5）操作步骤：按照所用试剂盒和仪器的操作指南，进行相应的实验步骤，包括样品加入、试剂加入、孵育时间和温度等。（6）电化学发光测定：将处理好的样本和试剂加载至电化学发光仪器中。根据仪器操作指南设置适当的参数，执行电化学发光测定，并记录结果。（7）数据分析与解读：根据仪器自动生成的测定数据，进行数据分析和结果解读。检测结果可以定性或定量方式表示，根据需要确定阈值和判断标准。（8）结果报告：根据实验室或医疗机构的要求，将乙肝病毒的检测结果记录并报告给相关人员。在进行电化学发光法检测乙肝病毒样本之前，请确保仪器和试剂的正常工作状态，并严格按照操作手册中的指导进行操作。此外，及时清理废弃物。需要注意的是，具体的操作步骤和要求可能因试剂盒和仪器的不同而有所变化。因此，在进行电化学发光法检测乙肝病毒样本前，应当仔细阅读和遵循相关试剂盒和仪器的操作手册。

1.2.2 ELISA检测

酶联免疫吸附试验是一种常用的生物医学检测技术，用于测定体液中特定抗原或抗体的存在和浓度。

（1）样品处理：收集待检测的样本，包括血清、尿液、唾液或其他体液，离心除去固体颗粒。（2）吸附：将待检测的抗原或抗体溶液加入微孔板中，使其吸附在孔板表面上。通常使用多孔板，每个孔内都有特定的吸附剂，用于捕获待检测物质。（3）阻断：为了防止非特异性吸附，需要将孔板中的空白孔款进行阻断处理。一般使用类似牛血清蛋白或牛血清的无关蛋白质，添加到孔中，以减少非特异性结合。（4）反应：将待检测样本加入包含抗原或抗体的孔中，使其与吸附的抗体或抗原发生特异性结合。经过一定的反应时间，待检测物质与孔中的抗原或抗体发生免疫反应。（5）清洗：在反应完成后，需要对孔板进行清洗，以去除非特异性结合物质。多次用缓冲液或洗涤溶液洗涤，以减少干扰。（6）酶标记：加入酶标记的二抗或单抗溶液，其可以识别目标分子的另外一个表位，并与其发生特异性结合。这些二抗或单抗通常与酶（如辣根过氧化物酶）结合，使得使用底物后能够产生可量化的酶反应产物。（7）底物反应：加入底物溶液，被酶催化反应后产生可观察和测定的信号。常见的底物包括TMB或ABTS。（8）反应停止：加入停止溶液，终止酶反应，使其产生的颜色发生变化或停止。（9）读取结果：使用酶标仪读取吸光度（OD）值，通过比较样品与标准曲线的关系，可以确定待检测分子的浓度或阳性与阴性结果。需要注意的是，细节和具体的实验步骤可能会因不同的ELISA类型、厂家或试剂组合而有所不同。

1.3 观察指标

观察不同检测方法乙肝病毒感染血清标志物检测结果阳性率、HBV-DNA水平和检测成本。

1.4 统计学方法

数据处理采用SPSS 28.0统计学软件，计量资料以（±s）表示，采用ｔ检验，计数资料用比率表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2结果

2.1 乙肝病毒感染血清标志物检测阳性率比较

ECL检测乙肝病毒感染血清标志物检测结果阳性率高于ELISA检测，P＜0.05。见表1。

2.2 HBV-DNA水平比较

ECL檢测HBV-DNA水平高于ELISA检测，P＜0.05。见表2。

2.3 检测成本比较

ECL检测检测成本高于ELISA检测，P＜0.05。见表3。

3讨论

乙肝极易出现肝硬化等诸多问题，未得到及时治疗可能会发展为肝癌，严重威胁患者身体健康，降低生活品质[1]。因此，面对乙肝病毒感染人员应秉持早诊断、早治疗的原则，采取适宜的干预方法，优化治疗效果。酶联免疫吸附试验（ELISA）广泛应用于乙肝病毒感染血清标志物检测。ELISA对乙肝病毒感染血清中的抗原或抗体具有高度敏感性，可以检测到低浓度的乙肝病毒标志物[2]。ELISA使用特异性的抗体与乙肝病毒感染血清中的抗原或抗体结合，因此具有较高的特异性，可以准确区分乙肝病毒感染和其他相关疾病。ELISA可以同时检测多个不同的乙肝病毒标志物，包括乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、乙肝病毒e抗原（HBeAg）、乙肝病毒核心抗体（HBcAb）等，从而提供更全面的信息[3]。通过对比待测样本与标准曲线上的标准品的反应程度，可以得出乙肝病毒标志物在血清中的浓度，为疾病的诊断和监测提供定量结果[4]。但ELISA通常需要一定的实验时间，包括样本处理、孔板吸附、反应、洗涤和染色等步骤。因此，无法实现实时或快速的结果检测。ELISA通常是批量进行的，需要同时处理多个样本，这可能会增加实验的复杂性和手工操作的风险[5]。ELISA主要用于检测乙肝病毒感染血清中的抗体或抗原，可能无法直接检测其他类型的乙肝病毒相关标志物，如核酸。ELISA需要具备特定的实验室设施、试剂和设备，操作要求较为严格。对初学者或非专业人员而言，可能需要一定的培训才能正确进行实验[6]。总之，ELISA在乙肝病毒感染血清标志物检测方面具有高度敏感性、特异性强和多参数检测的优点，然而也存在不能即时检测、批量化操作和特定实验条件要求等缺点。

电化学发光法是一种常用于检测乙肝病毒感染血清标志物的方法。与传统的酶联免疫吸附试验（ELISA）相比，电化学发光法可以检测非常低浓度的乙肝病毒指标，具有优异的灵敏度，可提供高准确性的结果，并能够检测早期感染或低病毒载量的情况[7]。电化学发光法具有较宽的线性测量范围，可以适应不同样本中乙肝病毒指标的广泛浓度，能在同一份样本中同时检测高浓度和低浓度的病毒抗原或抗体。电化学发光法具有快速的分析速度和高通量测试的能力，可以在较短时间内处理大批样本，适用于临床诊断实验室或大规模筛查项目。通过使用特异性的抗原-抗体反应体系，电化学发光法可以准确检测乙肝病毒指标，而不受其他物质的干扰[8]，确保了检测结果的准确性和可靠性。电化学发光法可以与自动化的仪器平台集成，使得操作更加简便、快捷和标准化，有助于提高实验室工作效率，减少人为误差的风险。电化学发光法可同时检测多个乙肝病毒指标，如乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝核心抗体（anti-HBc）等，对全面评估乙肝感染状态和监测治疗效果有很高的应用价值。

综上所述，电化学发光法在乙肝病毒感染的检测中具有高灵敏度、宽线性范围、快速高通量、特异性、自动化和多指标检测等应用优势。对比ELISA检测方法，ECL检测检出乙肝病毒感染血清标志物阳性率更高，临床应用价值显著。

参考文献

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[4] 关玲.不同免疫检验法对乙肝病毒感染血清标志物检验的效果分析[J].医学食疗与健康，2021，19（15）：192，194.

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[7] 王慧，代燕玲.不同乙肝病毒载量与乙肝血清标志物模式、Pre-S1抗原定性结果的相关性分析[J].基层医学论坛，2023（10）：55-58，74.

[8] 王旭旭，劉媛.不同免疫检验方法对乙肝病毒感染血清标志物的检测探究[J].中外女性健康研究，2022（24）：179-181.