微柱凝胶法输血相容性检测弱凝集现象的影响原因及应对策略

段晓旭

（河南宏力医院输血科，河南 新乡 453400）

在对危急重症患者进行救治时，输血已经成为不可替代的操作[1]。但是，随着输血在临床上的应用越来越普遍，也发现其存在巨大的潜在风险，例如输血后出现输血感染、输血不良反应等不良情况，严重威胁患者的生命安全[2]。相关研究指出[3]，输血相容性检查可有效降低患者输血后出现相关不良反应的风险，可明显提高患者输血的安全性。因此，输血前进行输血相容性检测至关重要，已成为确保输血安全的关键环节之一。但丁琴丽[4]等人在研究中指出，输血相容性检测在对ⅠgG 及ⅠgM 性质抗体进行检测时，误检及漏检率相对较多。

微柱凝胶法是临床中较为常见的输血相容性检测方式之一，在检测ⅠgG 及ⅠgM 性质抗体时存在明显优越性，并且具有血标本用量少、可长时间保存、敏感性较高、操作简单方便以及结果观察容易等特点，其在临床应用中已经取得广泛认可[5]。近年来，临床中发现运用微柱凝胶法对患者的血标本进行血型鉴定、交叉配血以及抗体筛查等检测时，偶有弱凝集现象出现而对检测结果的准确性产生影响，从而给输血操作带来一定安全隐患[6]。

基于此，作者将46 例采用微柱凝胶法进行ABO 血型鉴定、交叉配血以及抗体筛查试验后表现为弱凝集的患者血标本纳入研究，并进行相关处理后观察血标本变化，以期为提高输血相容性检测的准确率提高理论依据和参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

经过我院伦理委员会审批，选取2020 年9 月-2022 年12 月经微柱凝胶法应用于ABO 血型鉴定、交叉配血以及抗体筛查试验后表现为弱凝集的46 例患者血标本作为研究对象。46 例患者中，男性25 例，女性21 例；年龄范围为2～75 岁。其中ABO 血型检测卡、抗人球蛋白检测卡由长春博迅生物技术有现公司提供，ABO 反定型红细胞、抗体筛检细胞由长春博德生物技术有限责任公司提供，聚凝胺试剂、RhD 试剂均从珠海贝索生物技术有限公司购买；抗A1 抗体、抗A 与抗B 单克隆的抗体血型、抗体鉴定谱细胞及抗H 抗体等试剂均从上海血液医药公司购买。

1.2 方法

制备血标本 操作者抽取患者3～4mLEDTA钾盐抗凝全血，随后将其缓慢注入试管并充分混合；将其放置于37℃水中20～30 min，可离心分离出血浆和红细胞；取出红细胞并将其配制成不同浓度（10 mL·L-1～40 mL·L-1）的悬液。

鉴定Rh、ABO 血型 将10μL 的红细胞悬液（浓度为10 mL·L-1）分别加在A、B、D 及Ctrl 的凝胶卡上，离心处理10min 后，观察结果。ABO 反定型检测：将50 μL 血浆分别加入A1、B的凝胶卡上，随后再将50 μL 的A1 细胞（浓度为10 mL·L-1）、B 细胞（浓度为10 mL·L-1）分别加在A1、B 的凝胶卡上，离心处理10 min 后，观察结果。

抗体筛选 在凝胶卡上加入25 μL 的患者血浆，随后再加入25 μL 的抗体筛选细胞，将其放置于37℃的环境中孵育15 min，进行离心处理10 min 后观察结果。结果显示为抗体筛选阳性的血标本，需选取谱细胞进一步鉴定抗体特异性。

交叉配血试验 将受血者的血浆加至供血者的红细胞悬液中进行主侧配血；将受血者的红细胞悬液加至供血者的血浆中进行次侧配血，并将其置于37℃的环境中孵育15 min，并进行10 min的离心处理后，观察结果。

抗人球蛋白试验 对患者的红细胞进行3 次洗涤处理后，配制成浓度为20 mL·L-1的悬液，随后将其加至凝胶卡中，进行离心处理10 min 后判断结果。

处理弱凝集血标本 对经相关处理后显示为弱凝集的患者血标本进行增加血清量或红细胞、37℃洗涤红细胞、两次离心血清标本以及吸收放散试验，随后再使用间接抗人球蛋白法（Ⅰndirect antiglobulin test，ⅠAT) 及盐水法作对照检测。

2 结果

2.1 80 例患者血标本弱凝集现象的影响因素

在对80 例患者的血标本进行微柱凝胶法检测其输血相容性后，凝集强度显示为1+w～2+w中，有19 例（23.75%）ABO 血型的抗原性较弱，有7 例（8.75%）为ABO 亚血型，有9 例（11.25%）ABO 血型的抗体效价较低，有15 例（18.75%）纤维蛋白有所增高，有11 例（13.75%）高效价冷凝激素，有19 例（23.75%）自身免疫性抗体。见表1。

表1 46 例患者的血标本经微柱凝胶法结果及影响原因

2.2 正反定型和交叉配血结果

在对80 例患者的血标本进行微柱凝胶法检测其输血相容性中，出现55 例（68.75%）ABO 血型正反定型不相符，出现25 例（31.25%）抗体筛选阳性。在交叉配血中出现不合的有 49 例（61.25%），其中包含28 例（57.14%）抗体筛选为阳性，包含21 例（42.86%）正反定型为不符合。见表1。

2.3 直接抗人球蛋白法（ Direct antiglobulin test，DAT）检测结果

11 例（13.75%）高效价冷凝激素的血标本经DAT 检测后均显示为抗C3d 阳性，19 例（23.75%）自身免疫性抗体的血标本经DAT 检测后均显示为抗ⅠgG 阳性。详见表1。

3 讨论

输血是临床中较为常见的医疗技术之一，其在救治患者时起着关键作用；随着输血操作在临床上的运用越来越广泛，输血安全问题也逐渐暴露出来并受到业界关注[7]。WHO 早在2013 年指出，血液无比宝贵，是人类最为稀缺的资源[8]。因此，在输血前进行输血相容性检测尤为重要。目前，关于输血相容性的检测方式主要包括凝聚胺法、微柱凝胶法以及食管抗球蛋白法等，其中微柱凝胶法是通过改变凝胶浓度以控制其间隙大小，确保期间的空间位阻，利用红细胞及相关抗体的反应，采用低速离心处理后，观察凝胶卡的情况判断结果。相关研究证实[9]，微柱凝胶法具有便于标准化、结果稳定、重复性好、结果便于保存以及特异性高等特点，是临床中应用较为普遍且有效的检测方法。但朱洁好等人[10]在研究中指出，微柱凝胶法在进行相容性检测时容易出现弱凝集现象，对检测结果的准确性产生影响。为了进一步验证，作者将存在弱凝集现象的46 例患者血标本纳入研究，并对血标本进行相关处理，以期为临床输血前检测工作提供参考。

血标本经微柱凝胶法处理后，采用以下方式观察结果：若凝胶卡的上面或者中段出现凝集红细胞，提示为阳性；在进行离心处理时，红细胞（未与抗体发生结合）穿过凝胶间隙，出现在凝胶卡底部，提示为阴性；同时根据凝块在凝胶卡上分布程度以多少来判定凝集强弱，其中在凝胶卡上出现上面的凝集带，同时从中至下面由游离红细胞形成条状，提示为假凝集或者弱凝集，用1+～2+w表示。本研究结果显示：80 例患者的血标本凝集强度显示为1+w～2+w中，有19 例（23.75%）ABO 血型的抗原性较弱，有7 例（8.75%）为ABO亚血型，有9 例（11.25%）ABO 血型的抗体效价较低，有15 例（18.75%）纤维蛋白有所增高，有11 例（13.75%）高效价冷凝激素，有19 例（23.75%）自身免疫性抗体。随后，对血标本进行增加血清量或红细胞、37℃洗涤红细胞、两次离心血清标本以及吸收放散试验后，可排除相关影响因素对弱凝集现象的干扰。

分析原因：其一，患者ABO 血型的抗原性较弱产生的原因包括先天性的与后天获得性，例如恶性肿瘤及急性白血病等引起的血型抗原性降低，从而引起患者的ABO 血型出现正反型不相符。张勇萍等人在ABO 疑难血型鉴定的应用研究中指出，将红细胞悬液浓度增加，例如吸收放散试验，可改善血型抗原减弱情况。其二，ABO 亚血型主要包括B（A）、A 亚型、A（B）及B 亚型等，其产生原因为A、B 基因位点发生突变，进而合成氨基酸相关序列出现变异。而相关血标本出现的血清学特点为：在对患者的血标本进行ABO 血型的正反定型时，A 抗原及抗A 抗体或者B 抗原及抗B 抗体出现凝集或为弱凝集，从而导致输血相容性检查的误诊，其中常把B 亚型或A 亚型错判为O 型。其三，对患者的血标本进行ABO 血型的正反定型时，抗体效价丢失或者丢失、血型的抗体量出现合成不足，也会导致正反定型不相符的结果。相关研究已证实，置换血清或增加血清量，并将其置于4℃环境中反应15min，随后进行离心处理，可改善抗体效价低引起的正反定型不相符。其四，患者的纤维蛋白出现增高会影响血标本的抗凝效果，致使多数红细胞穿过凝胶间隙沉降至凝胶卡的下面。其五，7 例（15.22%）高效价冷凝激素的血标本经DAT 检测后均显示为抗C3d 阳性。相关研究指出，高效价冷的自身抗体在体外条件并不高的时候，补体成分对红细胞会出现致敏现象，从而出现DAT 及ⅠAT 阳性结果，但是相关阳性结果对体内情况并没有代表意义。梁路石等人指出，高效抗体-Ⅰ的患者若进行多次输血可出现同种抗体的产生，在一定程度上可增大鉴定抗体特异性的难度，并且当室温效价≥32或者血标本的效价≥512 时可能导严重的输血反应。因此，患者的血标本若出现增加的冷凝集效价，尽量避免进行输血治疗，必需使用时可选取洗涤的同型红细胞，并放置于室温内确定复温后在进行缓慢输注。其六，Ferrer G 等人在一项慢性淋巴细胞白血病发展为自身免疫性溶血性贫血时MicroRNA 的表达研究中指出，自身免疫性疾病及恶性肿瘤等可引起ⅠAT 阳性的患者血清中，经常会存在自身抗体，引起自身红细胞致敏或者被吸附，从而发生红细胞凝集。遇到此类情况时，可利用吸收试验将血清中的自身抗体去除，对同种抗体进行检测后，对去除患者自体抗体的血清完成主侧配血；同时将放散试验应用于患者的红细胞中，随后完成次侧配血。

综上所述，ABO 血型的抗原性较弱、ABO 亚血型、ABO 血型的抗体效价较低、纤维蛋白有所增高以及自身免疫性抗体是影响微柱凝胶法发生弱凝集现象的相关因素；可在微柱凝胶法检测前，通过增加血清量或红细胞，37℃洗涤红细胞，对血清标本离心两次以及吸收放散试验等处理，能有效排除上述因素对发生弱凝集现象的干扰。本研究仍存在不足之处：血标本选取较少，在进行结果观察时，可能存在偶然性，有待扩大样本量进一步验证。