静脉血真空采血管预稀释法在校正EDTA依赖性假性血小板减少症血小板计数中的应用研究

袁磊　黄平香　王炜艳　潘钱　严桃群

【摘要】  目的    探讨静脉血真空采血管预稀释法在校正乙二胺四乙酸（EDTA）依赖性假性血小板减少症（EDTA-PTCP）的血小板（PLT）计数中的应用效果。方法    选择2021年7月—2022年5月分宜县中医院检验科根据实验室复检标准筛选出确诊的假性血小板减少症患者（PTCP）30例作为研究对象，采集入组患者血氧标本，并分别采用EDTA法、静脉血真空采血管预稀释法在不同时间段测定PLT计数，对获得的数据进行分析。结果    EDTA法检测PLT水平随着时间的延长呈下降趋势（P<0.05），而静脉血真空采血管预稀释法随着时间的延长PLT测定值变化不明显（P>0.05），静脉血真空采血管预稀释法检测1 h、2 h及3 h的PLT水平均高于EDTA法（P<0.05）。两种校正方法PLT差值不同时间点存在明显差异，且随着时间延长呈上升趋势（P<0.05）。通过外周血涂片镜检，所有静脉血真空采血管预稀释法测定的全血标本随着时间推移均发生血小板聚集，但聚集程度随着时间的延长变化不明显。结论    与EDTA法检测结果相比，静脉血真空采血管预稀释法获得的PLT计数结果在3 h内稳定性相对较高，可用于EDTA-PTCP血小板计数测定中的校正，具有简便、准确度高等优点，该检查方法对检验员专业技能要求较低，可在基层医院推广。

【关键词】  乙二胺四乙酸依赖性假性血小板减少症； 血小板计数； 真空采血管预稀释法； 应用分析

中图分类号：R446.11+2        文献标识码：A

文章编号：1672-1721（2023）16-0089-03

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.16.030

乙二胺四乙酸（EDTA）是临床上血液分析仪测定过程中首选的抗凝剂，不会对细胞的形态、数目和大小等产生影响[1]。但是，該抗凝剂实际使用过程中亦存在少许病例在检测过程诱导血小板在体外发生聚集，导致血液分析仪测定的血小板计数低于真实值的现象[2]。EDTA依赖性假性血小板减少症（EDTA-PTCP）临床上虽然发生率较低，但是会增加临床诊断难度，造成血小板输注过度，影响患者身心健康[3]。因此，积极采取有效的措施快速纠正EDTA-PTCP，对提高临床输血安全性具有重要的意义。目前，临床上校正EDTA-PTCP方法较多，包括[4]：稀释模式法、微量离心法、更换抗凝剂法等；但实际使用过程中存在诸多不便，部分方法校正不彻底，导致临床使用受到限制。真空采血管预稀释法是一种新型的校正方法，可解决原稀释模式上末梢血不方便、标本不可靠及操作环节多等弊端，具有较强的可操作性[5]。本研究旨在探讨静脉血真空采血管预稀释法在校正EDTA-PTCP患者血小板（PLT）计数中的应用效果，报道如下。

1    资料与方法

1.1    临床资料    选择2021年7月—2022年5月分宜县中医院检验科根据实验室复检标准筛选出确诊的PTCP患者30例作为研究对象，男18例，女12例，年龄18～86岁，平均年龄（59.18±7.43）岁；体重指数（BMI）18～29 kg/m²，平均（22.67±4.23）kg/m²；合并症：高血压3例，糖尿病2例，高脂血症4例。本研究获得医学伦理委员会批准，患者均签署知情同意书。

1.2    纳入及排除标准    纳入标准：（1）符合假性血小板减少症诊断标准[6]，经实验室复检确诊；（2）血常规仪器结果显示血小板减少，乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）抗凝后血小板聚集；（3）病情稳定，未见皮肤紫癜、鼻出血及牙龈出血等症状。

排除标准：（1）二次抽血监测后血小板聚集现象得到纠正者（由于抽血不当引起）；（2）血涂片检查可见小红细胞、大血小板或伴有红细胞碎片者（血小板计数原因非单纯抗凝剂引起）；（3）检查前行放化疗、生物免疫治疗者或对本研究结果可能产生影响者。

1.3    方法    采集入组患者血氧标本，并分别采用EDTA法、静脉血真空采血管预稀释法在不同时间段测定PLT计数，具体方法如下。（1）仪器及设备。Olympus血液细胞分析仪，购自于日本奥林巴斯公司（采用厂家配套试剂）；DETA-K2抗凝管，购自于江西科伦医疗器械有限公司；双目显微镜，型号：BX41，购自于日本奥林巴斯公司。（2）实验方法：①给予患者胳膊上绑上止血带，进一步确定静脉血管的位置，对穿刺血管进行常规消毒，采用预稀释的真空采血管完成血液的采集。血液标本采集过程中，一端连接患者，另一端连接真空采集管，达到预采血量后，迅速拔掉插在管塞上的采血针头，并将采集的血液迅速颠倒5～8次，充分混合均匀后，获得稀释后的血液标本。②借助全自动血液细胞分析仪，对EDTA稀释后的血液标本进行检测，从而获得血小板数量的测定值，测定值×血量体积校正因子U，从而最终获得标本的血小板数目的真实值。③具体检测方法。常规采用EDTA-K2抗凝管，对患者真空采集静脉血2 mL，倒置放正混合8次后，采用Sysmex全自动血液分析仪，型号：xi-500i，在全血模式下完成PLT水平测定。同时，采用预稀释真空采集管采集静脉血1 mL，充分混合后，借助全自动血细胞分析仪BC-5300在全血模式下完成PLT水平测定，分别记录患者1，2，3 h的PLT水平，并对获得的数据进行分析。对每份标本完成涂片染色，并观察血小板聚集情况。上述操作均严格遵循仪器和试剂盒相关说明书完成。

1.4    统计学方法    使用SPSS 24.0统计学软件进行数据分析，计量资料以x±s表示，行t检验和方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2    结果

2.1    不同校正方法不同时间点PLT水平比较    EDTA法检测PLT水平随着时间的延长呈下降趋势（P<0.05）；而静脉血真空采血管预稀释法随着时间的延长PLT测定值变化不明显（P>0.05）；静脉血真空采血管预稀释法检测1 h、2 h及3 h PLT水平均高于EDTA法（P<0.05），见表1。

2.2    不同时间点两种校正方法PLT计数差值比较    两种校正方法PLT差值不同时间点存在明显差异，且随着时间延长呈上升趋势（P<0.05），见表2。

2.3    外周血涂片镜检结果    通过外周血涂片镜检显示，所有静脉血真空采血管预稀释法测定的全血标本随着时间推移均发生血小板聚集，但聚集程度随着时间的延长变化不明显，见图1。

3    讨论

临床血液常规检查内容相对较多，包括红细胞、白细胞、血小板等，常用仪器为全自动五分类血细胞分析仪，检测过程中使用的抗凝剂为国际血液学标准化委员会推荐的EDTA，虽然能满足临床检测需要，但是该抗凝剂使用时容易引起血小板聚集，导致血液分析过程中出现假性血小板减少现象（即EDTA-PTCP）。赵萌等[7]研究表明：血小板数量检测是临床实验室常用的诊断指标，对于危重症患者病情监测、治疗具有重要的意义。假性血小板减少如不能及时发现，将会增加临床误漏诊率，严重时可引起医疗纠纷。因此，临床血液检查过程中积极采取相应的措施校正，对提高检查准确度有重要意义。

桑海强等[8]研究表明：PTCP在临床上发生率较低，且多数患者是由于抗凝剂引起的血小板测定结果异常，加强血小板值检测校正，對指导临床诊疗具有重要意义。本研究中，EDTA法检测PLT水平随着时间的延长呈下降趋势（P<0.05），而静脉血真空采血管预稀释法随着时间的延长PLT测定值变化不明显（P>0.05），静脉血真空采血管预稀释法检测1 h、2 h及3 h PLT水平均高于EDTA法（P<0.05）。由此可见，静脉血真空采血管预稀释法检测PLT计数稳定性较高，而EDTA法检测时，随着时间的延长将会造成PLT测定水平呈下降趋势，影响诊断效果。静脉血真空采血管预稀释法临床使用时能弥补常规采血时存在的不足，同时，该校正方法操作相对简单，能实现静脉全血的稀释，亦可借助刻度线防止抗凝剂暴露血小板膜上糖蛋白中的自身抗体[9]。本研究中，EDTA法与静脉血真空采血管预稀释法的PLT差值不同时间点存在明显差异，且随着时间延长呈上升趋势（P<0.05）。由此可见，静脉血真空采血管预稀释法校正稳定性较强，对于血小板具有良好的保护作用，能避免遮蔽抗原的暴露，通过1∶10固定比例，有助于降低抗体滴度，从而能拮抗抗凝剂诱发的血小板聚集。但是，无论何种校正方法，随着静脉血采集时间的延长，均会对血小板检测结果产生影响。因此，血液标本采集后应尽早完成PLT检测，避免长时间放置而影响检测结果。

静脉血真空采血管预稀释法能降低真空采血管中凝血因子的浓度，避免凝血因子持续增加引起的静脉血液标本稀释，从而影响测定结果；该方法能抑制凝血因子产生的链式活性反应，避免采集的血液标本在真空管中凝固[10]。同时，PLT检测时通过采血管上的精密刻度，能提高静脉采血量的准确性[11]。本研究中，通过外周血涂片镜检，所有静脉血真空采血管预稀释法测定的全血标本随着时间推移均发生血小板聚集，但聚集程度随着时间的延长变化不明显。由此可见，静脉血真空采血管预稀释法测定血小板计数具有较强的稳定性。Zhang H等[12]研究表明：静脉血真空采血管预稀释法校正EDTA-PTCP血小板计数时，患者一次血液采集即可完成对标本的保存、离心、检测等步骤，能避免多次、重复采集。同时，静脉血真空采血管预稀释法具有操作简单、可靠等优点，能保证检测结果的科学性、合理性，且该稀释法对仪器及设备要求较低，适合基层医院使用。

综上所述，与EDTA法检测结果相比，静脉血真空采血管预稀释法测定的PLT计数结果在3 h内稳定性相对较高，可用于EDTA-PTCP血小板计数测定中的校正，具有简便、准确度高等优点，且该检查方法对检验员专业技能要求较低，适合在基层医院推广。

参考文献

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（收稿日期：2023-03-16）