基于TGF-β/Smads信号通路探究养心通脉方调控慢性心力衰竭血瘀证大鼠的作用机制

肖清玄，郭志华，罗佳敏，陈宇霞，张书萌，于子璇，陈伶利，李杰

〔摘要〕 目的 基于轉化生长因子-β（tansforming growth factor-β， TGF-β）/Smads信号通路探讨养心通脉方对慢性心力衰竭（chronic heart failure， CHF）血瘀证大鼠心肌纤维化和炎症损伤的影响。方法 通过随机数字表法将45只SD雄性大鼠分为造模组（27只）、正常组（12只）和假手术组（6只），适应性喂养1周后行冠脉结扎术造模，术后10 min行心电图检测，6周后检测超声心动图、血清N端前脑钠肽（N-terminal pro-brain natriuretic peptide， NT-pro BNP）含量和血液流变学相关指标。成模后，运用随机数字表法从造模组中取18只大鼠均分为中药组、西医组和模型组，中药组予养心通脉方溶液12 g/kg灌胃，西药组予以缬沙坦溶液0.8 g/kg灌胃，正常组、假手术组和模型组予等量蒸馏水，每日1次，持续4周。药物干预结束后，超声心动图检测心功能指标，HE染色和Masson染色观察大鼠心肌组织病理改变及纤维化程度，ELISA法检测大鼠血清NT-pro BNP和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）、白细胞介素-1β（interleukin-1β， IL-1β）、白细胞介素-6（interleukin-6， IL-6）、白细胞介素-10（interleukin-10， IL-10）含量，Western blot法检测大鼠心肌组织TGF-β/Smads信号通路相关蛋白表达。结果 与正常组比较，造模组大鼠心电图出现明显的ST段上抬，大鼠血清NT-pro BNP含量显著升高（P＜0.01），左室射血分数（left ventricular ejection fraction， LVEF）水平显著下降（P＜0.01），全血高切黏度、中切黏度、低切黏度显著升高（P＜0.01）。药物干预4周后，与正常组比较，模型组LVEF明显降低（P＜0.01），血清NT-Pro BNP、TNF-α、IL-1β及IL-6水平上升（P＜0.01），IL-10水平明显下降（P＜0.01），心肌组织ANGPT2、TGF-β1、Smad 2、Smad 3蛋白表达明显升高（P＜0.01）；与模型组比较，中药组、西药组LVEF水平上升（P＜0.01），血清NT-pro BNP和TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低（P＜0.01），IL-10含量增多（P＜0.01），心肌组织TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达减少（P＜0.05或P＜0.01）。结论 冠脉结扎术可成功制备CHF血瘀证大鼠模型，养心通脉方可能通过抑制CHF血瘀证模型大鼠TGF-β/Smads信号通路，调控机体炎症损伤和纤维化机制。

〔关键词〕 TGF-β/Smads信号通路；慢性心力衰竭；血瘀证；养心通脉方；炎症损伤；心肌纤维化

〔中图分类号〕R285.5       〔文献标志码〕A        〔文章编号〕doi：10.3969/j.issn.1674－070X.２０23.08.003

Exploring the mechanism of action for Yangxin Tongmai Formula in regulating rats with chronic heart failure of blood stasis pattern

based on TGF-β/Smads signaling pathway

XIAO Qingxuan， GUO Zhihua， LUO Jiamin， CHEN Yuxia， ZHANG Shumeng， YU Zixuan， CHEN Lingli， LI Jie*

Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China

〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Objective To observe the effects of Yangxin Tongmai Formula （YXTMF） on myocardial fibrosis and inflammatory injury in rats with chronic heart failure （CHF） of blood stasis pattern based on the transforming growth factor-β （TGF-β）/Smads signaling pathway. Methods A total of 45 male SD rats were divided into modeling group （n=27）， normal group （n=12） and sham group （n=6） by random number table method. Coronary ligation modeling was performed after 1 week of adaptive feeding. Electrocardiography was performed 10 mins after surgery. Echocardiography， serum N-terminal pro-brain natriuretic peptide （NT-pro BNP） content， and hemorheological indicators were checked 6 weeks later. After modeling， 18 rats taken from the modeling group by random number table method were randomly subdivided into Chinese medicine group （with YXTMF solution gavage， 12 g/kg）， western medicine group （with valsartan solution gavage， 0.8 g/kg） and model group. The normal group， sham group， and model group were given equal amount of distilled water. All groups had been provided with corresponding drugs or distilled water once daily for 4 weeks. After 4 weeks of drug intervention， echocardiography was used to examine the cardiac function indicators; HE staining and Masson staining were used to observe the pathological changes and fibrosis degree of rat myocardial tissue; ELISA method was used to test the levels of serum NT-pro BNP， tumor necrosis factor-α （TNF-α）， interleukin-1β （IL-1β）， interleukin-6 （IL-6）， and interleukin-10 （IL-10） in rats; Western blot method was used to check the TGF-β/Smads signaling pathway-related protein expressions in rat myocardial tissue. Results Compared with normal group， rats in model group showed significant ST-segment elevation in electrocardiogram， significantly increased serum NT-pro BNP content （P<0.01）， significantly decreased left ventricular ejection fraction （LVEF） level （P<0.01）， and significantly increased whole blood viscosity at high， medium， and low shear rate （P<0.01）. After 4 weeks of drug intervention， compared with normal group， the rats in model group showed significantly decreased LVEF level （P<0.01）， increased serum NT-pro BNP， TNF-α， IL-1β， and IL-6 levels （P<0.01）， significantly decreased IL-10 level （P<0.01）， and significantly increased protein expressions of ANGPT2， TGF-β1， Smad2， and Smad3 in myocardial tissue （P<0.01）. Compared with model group， Chinese medicine and western medicine groups had increased LVEF level （P<0.01）， decreased levels of serum NT-pro BNP， TNF-α， IL-1β， and IL-6 （P<0.01）， increased IL-10 content （P<0.01）， and decreased protein expressions of TGF-β1， Smad2 and Smad3 in myocardial tissue （P<0.05 or P<0.01）. Conclusion Coronary ligation can successfully prepare CHF rats of blood stasis pattern， and YXTMF may regulate the mechanism of inflammatory injury and fibrosis by inhibiting the TGF-β/Smads signaling pathway of model rats with CHF of blood stasis pattern.

〔Ｋｅｙｗｏｒｄｓ〕 TGF-β/Smads signaling pathway; chronic heart failure; blood stasis pattern; Yangxin Tongmai Formula; inflammatory injury; myocardial fibrosis

慢性心力衰竭（chronic heart failure， CHF）是一种发病率高、病程漫长、致死率高的疾病，临床上难以治愈[1-2]。当心脏发生结构病变或功能障碍时，若病程进展未得到及时有效防治，最终可演变成心力衰竭[3-4]。现代研究表明，CHF的发病机制主要与心肌纤维化引起的心室重构、炎症损伤及氧化应激反应、心肌能量代谢异常、肠道菌群失调等相关[5-7]。转化生长因子-β（tansforming growth factor-β， TGF-β）/Smads信号通路是目前研究较多的纤维化相关通路，TGF-β在以炎症和纤维化为特征的各种疾病的诊断和治疗中起关键作用[8]，TGF-β/Smads信号通路在心血管疾病中扮演着重要角色，对心血管疾病有着重大影响[9]。

CHF属于中医学“心痹”“心水”“心悸”“心胀”“喘证”等范畴[10]，后续病程主要表现为虚实夹杂之象，气虚与血瘀贯穿疾病始终，血瘀是中心病理环节。临床研究证实，血瘀证是CHF主要的证型之一[11]。故中医治疗CHF主要以补养心气、和通血脉为原则，以补气药、活血药为基础，从根本上祛除病根。养心通脉方由袁肇凯教授在名医秦伯未先生创制的治疗胸痹有效名方[12]基础上精简提炼而成，现方由人参、丹参、桂枝、枳实、泽泻组成，能益气活血化瘀，诸药相伍共同发挥养心通脉的作用。临床上将养心通脉方用于治疗CHF取得了良好的治疗效果，在西医常规药物治疗的基础上加用养心通脉方，患者的血清N端前脑钠肽（N-terminal pro-brain natriuretic peptide， NT-pro BNP）含量更低，中醫证候疗效积分更高，心功能恢复比仅用西药治疗理想，患者生活质量明显提高[13-14]。实验研究发现，养心通脉方可缓解肠道机械屏障功能障碍、调节肠道菌群、防止炎性细胞因子过度表达、抑制心室重构、改善心功能等[15-17]。故本课题基于TGF-β/Smads信号通路探究养心通脉方调控CHF血瘀证的作用机制，以期为临床CHF的中医药防治与规范用药提供充足的实验依据和有力支撑。

1 材料

1.1  实验动物

从湖南安生美药物研究院实验动物有限公司购入45只SD雄性大鼠，许可证号为SYXK（湘）2019-0004，动物合格证号为430727221100257174，体质量（200±10） g，饲养于湖南中医药大学实验动物中心，整体实验方案经由湖南中医药大学实验动物伦理委员会审批通过，伦理编号为LLBH-202110250001。

1.2  药物

养心通脉方（人参10 g，丹参10 g，桂枝10 g，枳实10 g，泽泻10 g）中药超微配方颗粒，批号分别210412、210747、210551、210355、210312，购于湖南春光九汇现代中药有限公司；缬沙坦胶囊（批号：H20103521，规格：80 mg/粒，湖南千金湘江药业股份有限公司）；异氟烷麻醉剂（宠物用）（批号：R510-22，深圳瑞沃德生命科技有限公司）；乌拉坦（批号：U299635-100，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；生理盐水（批号：H10983065，四川科伦股份有限公司）。

1.3  主要试剂

Masson三色染色试剂盒、HE染色试剂盒[批号：abs9217、abs9347，爱必信（上海）生物科技有限公司]；大鼠NT-pro BNP、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）、白细胞介素-1β（interleukin-1β， IL-1β）、白细胞介素-6（interleukin-6， IL-6）、白细胞介素-10（interleukin-10， IL-10）ELISA试剂盒（批号：ML-E-202205703、ML-E-202205123、ML-E-202206708、ML-E-20225761、ML-E-202205836，上海酶联生物科技有限公司）；BCA蛋白定量试剂盒（批号：E-BC-K318-M，武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司）；TGF-β1抗体（批号：AF03634，湖南艾方生物科技有限公司）；ANGPT2抗体（批号：A11306，武汉爱博泰克生物科技有限公司）；Smad2、Smad3、GAPDH抗体（批号：67343-1-Ig、66516-1-Ig、60004-1-Ig，武汉三鹰生物技术有限公司）；蛋白预制胶（4％～20％）（批号：F11420Gel，长沙安吉行生物科技有限公司）；ECL化学发光试剂盒（批号：GE2301，美国皆为尔公司）。

1.4  主要仪器

R407型小动物呼吸机（深圳瑞沃德生命科技有限公司）；H1650R型台式高速冷冻离心机（湖南湘仪实验室仪器有限公司）；GOWEF680型小动物呼吸麻醉机（长沙临科仪器设备有限公司）；6LAB型小动物超声仪（北京益仁恒业科技有限公司）；SA-66OO型血流变测试仪（北京赛科希德科技发展有限公司）；RT-6100型多功能酶标分析仪（深圳雷杜生命科学股份有限公司）；BA410E型研究用三目生物显微镜（厦门麦克奥迪实业集团有限公司）；KD-BM Ⅱ型包埋机（浙江科迪仪器设备有限公司）；M199型切片刀（上海徕卡显微系统有限公司）；HM325型石蜡切片机（美国赛默飞世尔科技公司）；YD-A型摊片机（浙江益迪医疗设备有限公司）；DYY-6C型电泳仪电源、DYCZ-24DN型双垂直电泳仪、DYCZ-40D型转印电泳仪（北京六一生物科技有限公司）。

2 方法

2.1  模型制备与验证

45只成年SD雄性大鼠按照随机数字表法选取27只用于制备CHF血瘀证大鼠模型，其余大鼠分为正常组（12只）和假手术组（6只）。

采用冠脉结扎术[18]进行造模：大鼠麻醉后固定于鼠板，常规消毒备皮。行气管插管，以小动物呼吸机辅助呼吸，呼吸频率为（70±10）次/min，术中密切关注大鼠状态，调节潮气量。沿左锁骨中线在皮肤上做4～5 cm的竖行切口，按肌肉纹理逐层钝性分离，从第3～4肋间破开胸腔，剥离心包膜（注意勿损伤胸腺），找到冠状动脉左前降支，垂直血管走行方向于左心耳下1～2 mm处进针并迅速结扎，肉眼观察可见结扎部位下的心肌变白。检查心脏无渗血渗液、无心律失常后关闭胸腔，逐层缝合。假手术组大鼠只打开胸腔，不结扎冠状动脉。

6周后随机抽取正常组、造模组大鼠各6只，检测其心电图、血清NT-pro BNP含量、超声心动图及血液流变学指标用于模型验证。

2.2  分组与给药

冠脉结扎术后，运用随机数字表法从造模组中取18只随机分为中药组、西医组和模型组，各6只。通过人与动物等效剂量换算确定各组给药剂量，中药组予养心通脉方溶液12 g/kg灌胃[19]（中药超微颗粒溶解于无菌生理盐水），西药组予缬沙坦溶液0.8 g/kg灌胃（除去胶囊外壳，粉剂溶于无菌生理盐水），其他3组大鼠予等量蒸馏水。每日1次，灌胃周期均为4周。

2.3  样本收集

2.3.1  模型验证  随机取造模组、正常组大鼠各6只，冠脉结扎术后10 min采集造模组心电图数据，隔日同时段采集正常组心电图；造模6周后于呼吸麻醉状态下行超声心动图检查；腹主动脉取血，其中肝素钠采血管用于血流变检测，普通采血管室温下放置，自然凝固析出分层后离心，取上清液于-80 ℃冰箱中保存。

2.3.2  取材  药物干预4周结束后隔日取材。呼吸麻醉后行超声心动图检查；用腹主动脉采血法进行采血，离心后取上清液于-80 ℃冰箱中冻存，用于后续检测；腹主动脉取血后打开大鼠胸腔，剪取完整心脏，用生理盐水冲洗出心脏内的残留血液，将各组大鼠心脏浸泡于4％多聚甲醛溶液中保存，用于病理组织学观察；并剪取大鼠的左心室与心尖部位组织，放入冻存管中，存放于-80 ℃冰箱备用。

2.4  检测方法

2.4.1  心电图  冠脉结扎术后10 min，大鼠仍处于麻醉状态，固定后按照“右上—左上—左下—右下—左胸部”的次序连接各导联，以PP连线为基线，当波形平稳后，记录肢体Ⅱ导联心电图，关注心电图ST段情况及其波形变化。

2.4.2  超声心动图  使用宠物用异氟烷，借助小动物呼吸麻醉机进行呼吸麻醉，将大鼠固定后，脱除心脏周边毛发，维持麻醉且状态平稳时行超声心动图检查，使用M型超声探头，取左室长轴切面，测量大鼠左心室舒张期内径（left ventricular internal dimension diastole， LVIDd）、左心室收缩期内径（left ventri？鄄

cular internal dimension systole， LVIDs）、左室射血分数（left ventricular ejection fraction， LVEF）和左心室短轴收缩率（left ventricular fraction shortening， LVFS）。

2.4.3  ELISA法检测血清NT-pro BNP、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10含量  于-80 ℃冰箱取出冻存血清样本，融化后用于检测血清NT-pro BNP和TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10含量，实验操作步骤严格按照试剂盒说明书执行。

2.4.4  血液流变学检测  肝素钠采血管收集血液样本，防止血液凝固，使用SA-66OO全自动血流变测试仪检测相关指标，整个检测过程在血液样本采集后4 h内完成。

2.4.5  心肌组织病理组织学观察  心脏于4％多聚甲醛中固定，石蜡包埋、切片、HE染色后显微镜下观察心肌组织结构变化；Masson染色后观察心肌组织纤维化病变情况，并通过Image J软件进行心肌组织纤维化率分析。

2.4.6  Western blot法检测心肌组织TGF-β/Smads通路相关蛋白表达  称量（75±5） mg心肌组织，加入10×蛋白裂解液、0.1×蛋白酶抑制剂和0.1×磷酸蛋白酶抑制剂，冰上裂解25 min；充分溶解后，离心，取上清液，测定各蛋白浓度。配制上样液，95 ℃煮10 min，冷却后置于-20 ℃条件下保存；上样量为10 μL，160 V电泳60 min，25 min快速转膜，5%脱脂奶粉封闭90 min；TBST稀释一抗[TGF-β1（1∶2 000）、ANGPT2（1∶1 500）、Smad2（1∶6 000）、Smad3（1∶5 000）、GAPDH（1∶8 000）]孵育120 min。TBST洗膜4次，每次8 min；TBST稀释二抗[Goat Anti-Rabbit IgG（H+L）（1∶10 000）、Goat Anti-Mouse IgG（H+L）（1∶8 000）孵育90 min；重复洗膜操作；使用ECL高效化学发光显影液，于凝胶成像系统中成像并保存；使用Image Lab、Image J软件进行后续分析，计算各指标相对表达量（指标相对表达量=指标灰度值/GAPDH灰度值）。

2.5  统计学分析

数據以“ｘ±s”表示，数据分析采用SPSS 26.0软件，两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。采用GraphPad Prism 8.0软件绘制图表。

3 结果

3.1  CHF血瘀证大鼠成模情况

3.1.1  心电图  大鼠行冠脉结扎术后10 min行心电图检查发现，造模组大鼠ST段明显抬高，心率加快，为350～450次/min。详见图1。

3.1.2  超声心动图  冠脉结扎术后6周，与正常组比较，造模组大鼠LVIDd、LVIDs水平明显上升（P＜0.01），LVEF、LVFS水平显著下降（P＜0.01）。详见表1。

3.1.3  血清NT-pro BNP含量和血液流变学相关指标  冠脉结扎术后6周，与正常组比较，造模组血清NT-pro BNP含量明显增多（P＜0.01），全血高切黏度、中切黏度、低切黏度显著升高（P＜0.01）。详见表2。

3.2  各組大鼠病理组织学观察结果

3.2.1  HE染色结果  正常组、假手术组大鼠心肌细胞组织结构正常，排列整齐，未见病理性改变；与正常组比较，模型组心肌细胞形态大小不等，排列紊乱，各结构之间界限模糊，心肌细胞间质炎症细胞浸润明显，伴有大量纤维结缔组织增生；与模型组比较，中药组大鼠心肌细胞形态逐渐恢复，细胞间质纤维结缔组织增生和炎症细胞浸润明显减少，西药组大鼠心肌细胞形态恢复良好，但细胞间质仍有部分纤维结缔组织增生和炎症细胞浸润。详见图2。

3.2.2  Masson染色结果  正常组、假手术组大鼠心肌组织中无纤维化改变；与正常组比较，模型组大鼠心肌组织中大量胶原蛋白沉积，心肌纤维化率升高（P＜0.01）；与模型组比较，中药组大鼠心肌组织中胶原蛋白沉积明显减少，心肌纤维化率降低（P＜0.01），西药组大鼠心肌纤维化率降低（P＜0.01）。详见图2、表3。

3.3  各组大鼠超声心动图情况

与正常组比较，模型组大鼠LVIDd、LVIDs水平显著上升（P＜0.01），LVEF、LVFS水平明显降低（P＜0.01）。与模型组比较，中药组、西药组LVIDd和LVIDs水平均下降（P＜0.05或P＜0.01），LVEF、LVFS水平明显上升（P＜0.01）。详见表4。

3.4  各组大鼠血清NT-pro BNP和相关炎症因子比较

与正常组比较，模型组大鼠血清NT-pro BNP含量明显增多（P＜0.01），TNF-α、IL-1β及IL-6水平显著上升（P＜0.01），IL-10水平明显下降（P＜0.01）；与模型组比较，中药组和西药组NT-pro BNP含量减少（P＜0.01），血清TNF-α、IL-1β及IL-6水平下降（P＜0.01），IL-10水平明显上升（P＜0.01）。详见表5。

3.5  各组大鼠心肌组织TGF-β/Smads通路相关蛋白比较

与正常组比较，模型组大鼠心肌组织ANGPT2、TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达均升高（P＜0.01）；与模型组比较，中药组、西药组大鼠心肌组织TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达下降（P＜0.05或P＜0.01）。详见图3—4。

4 讨论

CHF是一类以呼吸困难、运动耐力明显下降为主要症状的难治性心血管疾病，炎症损伤机制是其最主要的发病机制之一，炎症损伤往往会导致心血管系统的功能障碍，严重者甚至会引发器质性损害，全身性炎症在CHF中很常见[20]。

中医学认为CHF发病伊始多因心气虚、心阳虚，随着病程发展，在此基础上，瘀血、痰饮、水湿等病理产物在体内堆积，阻滞心脉，加重CHF病情，形成恶性循环。养心通脉方可扶养心气、和通血脉，方中人参、丹参常用于心血管疾病中药处方，魏佳明等[21]发现，丹参、人参等药物使用频次居于中医治疗CHF用药频次前列，且CHF治疗中使用频次较高的药物大多都具有益气活血化瘀的功效。

炎症因子可通过多种途径参与CHF的病变过程[22]，炎症反应系统的激活促使心肌纤维化加快，造成不可逆的心室重塑。炎症因子TNF-α是反映CHF病情严重程度的一个典型指标，CHF患者血浆中TNF-α含量明显增多[23]；IL-1β可进入全身血液循环，与炎症反应密切相关，还可引起心肌纤维化，导致心室重构；IL-6是早期反映CHF的一个极为敏感的指标，与CHF的预后密切相关，其含量与血清NT-pro BNP含量呈正相关，与LVEF呈负相关[24]；TNF-α、IL-1β、IL-6在CHF病程中均发挥促炎作用，IL-10为抗炎因子，其血清含量水平与CHF病情严重程度呈负相关[25]。本研究发现，CHF血瘀证大鼠经养心通脉方干预4周后，血清TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著降低，IL-10生成明显增多，证明养心通脉方能改善CHF血瘀证大鼠炎症损伤。

TGF-β存在于人体各种组织细胞中，是典型的促心肌纤维化因子[26]，具有多种生物学效应，密切参与人体胚胎发育、生殖细胞分化、炎症反应、组织修复和机体免疫调节[27]。TGF-β下游信号蛋白分子主要为Smads蛋白，Smads家族可介导TGF-β的细胞内信号转导，其中以Smad2、Smad3为最主要的正反馈转导蛋白分子，在TGF-β1诱导的纤维化中起重要作用[28-29]。研究发现，TGF-β1可调节机体炎症反应，在组织受伤后被激活，促使炎症因子IL-1和TNF-α等释放，活化后的炎症因子又可加速TGF-β1的分泌，还可诱导成纤维细胞增加细胞外基质的合成与分泌，促使纤维结缔组织增生[30]。但也有研究发现，炎症反应得到控制后，TGF-β1含量下降，其对炎症因子的生物学活性减弱，此时TGF-β/Smads信号通路中发挥传导作用的下游分子以Smad6、Smad7为主，而这两者属于抑制性Smads，TNF-α等炎症细胞因子随之减少，此时TGF-β1则表现为抗炎作用[31]。除影响炎症反应和心肌纤维化外，TGF-β还可与Ang Ⅱ形成工作网影响心室重构，当心肌损伤或心脏负荷过重时，TGF-β/Smads通路信号转导是心室重构的重要机制之一[32]。TGF-β1过量表达会引起心肌肥厚和心肌纤维化，TGF-β1参与心室重构发生发展的全过程[33]。Ang Ⅱ在增加TGF-β1基因表达的同时，还会抑制TGF-β1降解，使得TGF-β1含量更高[34]，诱发心室肥厚[35]；心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌细胞TGF-β1表达上调，Smad2、Smad3表达下调[36]，抑制TGF-β/Smads通路信号转导或可成为减轻心室重构、防止心力衰竭疾病发生发展的有效切入点。本研究发现，CHF血瘀证大鼠心肌组织中TGF-β/Smads信号通路相关蛋白表达明显上调；经过养心通脉方干预后，其TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白水平下降，证明养心通脉方能调控TGF-β/Smads信号通路相关蛋白表达，有效缓解心肌纤维化，降低心室重构，改善炎症损伤，促使CHF血瘀证大鼠心功能恢复。

综上所述，TGF-β/Smads信号通路活化可激活机体炎症反应系统，促使心肌纤维化，加快心室重构，导致心力衰竭。养心通脉方可通过抑制TGF-β/Smads信号通路相关蛋白表达，有效降低心肌纤维化程度，改善CHF血瘀证模型大鼠的炎症损伤，缓解心力衰竭病情进展并促使心功能恢复。本研究将为CHF临床中医药防治提供较好的参考意义和科学依据。

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（本文编辑  周  旦）