子痫前期孕妇血清circRNA VRK1表达水平与临床指标的相关性及对妊娠结局的预测价值

刁瑞萍,李延伟,赵静超,李燕

子痫前期(preeclampsia,PE)是一种由胎盘缺陷引起的妊娠期高血压疾病,以高血压和蛋白尿为特征[1]。PE会引起产妇脑出血、肝破裂、胎儿死亡、胎儿宫内窘迫等不良妊娠结局[2]。尽管PE的发病机制尚未完全阐明,但螺旋动脉重塑受损、胎盘功能障碍和滋养层侵袭不足被认为是PE的致病因素[3]。在怀孕前三个月,侵入性绒毛外滋养层细胞(EVT)通过重塑子宫螺旋动脉提供胎儿所需的营养,通过上皮间质转化(EMT)从滋养层细胞衍生的高侵袭性EVT能够建立母胎联系[4]。然而,滋养层细胞功能障碍或入侵失败可导致母体螺旋动脉重塑失败,其在PE发病中起着至关重要的作用。研究显示,滋养层细胞的分化受多种因素调控,其中circRNA的调控作用备受关注。circRNA是一种高度稳定和丰富的新型内源性非编码RNA,已证实其可以影响细胞周期,是多种疾病的重要调节因子[5]。circRNA牛痘相关激酶1(circRNA VRK1)在乳腺癌、骨肉瘤等肿瘤中呈异常表达,参与调控肿瘤细胞周期以及EMT[6]。近期,Li等[3]研究显示,circRNA VRK1在PE孕妇胎盘中表达水平高于正常妊娠孕妇,广泛表达于滋养层细胞的细胞质中,能够对滋养细胞的迁移、侵袭产生抑制作用,同时参与EMT过程。这说明circRNA VRK1与PE发病过程密切相关,但其与临床指标相关性及妊娠结局的预测价值尚未有报道。本研究旨在明确PE孕妇血清circRNA VRK1表达与尿酸(UA)、舒张压(DBP)等临床指标的相关性,及其对妊娠结局的预测价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2019年1月至2021年12月邯郸市妇幼保健院收治的95例PE孕妇作为PE组,纳入同期来院检查的健康孕妇100例作为对照组,年龄20～35岁。两组一般资料比较,差异无统计学意义,具有可比性(P>0.05),详见表1。本研究通过本院伦理委员会批准,且符合伦理学标准,所有受试者及家属均自愿参加并签署知情同意书。

表1 两组基线资料比较

纳入标准:① 知情本研究内容且自愿参加;② 符合《妇产科学》中PE诊断标准[7];③ 单胎妊娠;④ 无慢性心脏病、贫血史。

排除标准:① 胎儿先天发育异常;② 孕前合并高血压、冠心病;③ 有生殖系统畸形或感染;④ 入院资料不全;⑤ 排除心率失常者;⑥ 孕期出现撞伤等影响妊娠结局。

1.2 观察指标

由于PE在妊娠20周后出现,妊娠<28周病情不稳定者临床常终止妊娠;妊娠>34周病情不稳定者促胎肺成熟终止妊娠;妊娠晚期由于血压持续升高与昼夜节律改变会加重PE患者的靶器官损伤,导致不良妊娠结局增加,故本研究选取妊娠28～35周入院检查时的临床指标及血清样品用于后续分析。两组孕妇均在妊娠28～35周入院检查时,测量收缩压(SBP,正常值:90～140 mmHg)、舒张压(DBP,正常值:60～90 mmHg),并抽取空腹外周血,离心后吸取上层血清并采用全自动生化仪(型号BS-220,迈瑞)检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT,正常值:0～40 U/L)、尿酸氮(BUN,正常值:1.69～8.34 mmol/L)、肌酐(Scr,正常值:44.20～97.20 μmol/L)、尿酸(UA,正常值:178.40～297.40 μmol/L)、超敏-C反应蛋白(Hs-CRP,正常值:0.5～10 mg/L)、天冬氨酸氨基转移酶(AST,正常值:13～35 U/L)等;收集24 h尿液,采用双缩脲法测定24 h尿蛋白水平(正常值:<0.15 g/24 h)。

统计孕妇妊娠结局(羊水过少、重要脏器功能不全或衰竭、胎盘早剥、HELLP综合征、血小板计数减少、产后出血等)以及围产儿结局(早产、死亡、宫内窘迫、生长受限、新生儿窒息、医源性引产/早产)。

1.3 血清circRNA VRK1表达水平检测

两组患者均在妊娠28～35周入院检查时采集空腹外周血5 mL,采用RNA提取试剂盒(货号:19241ES50)从血清中获得总RNA,RNA的纯度和浓度根据NanoDrop ND-1000核酸检测仪的OD 260/280读数进行评估;采用反转录试剂(货号:11119ES60)得到cDNA,然后根据定量PCR扩增溶液(货号:11184ES03)配制反应体系,并在Stratagene公司的MX4000P仪器上采集信号。采用2-△△Ct法计算circRNA VRK1表达水平。试剂盒购自翌圣生物科技股份有限公司。引物序列见表2。

表2 引物序列

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 两组孕妇血清circRNA VRK1表达水平及临床指标比较

PE组孕妇血清circRNA VRK1、24 h尿蛋白、SBP、DBP、BUN、ALT、Hs-CRP、Scr、AST、UA显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。详见表3。

表3 两组孕妇血清circRNAVRK1表达水平及临床指标比较

续表3

2.2 circRNA VRK1表达水平与各临床指标的相关性分析

相关性分析显示,circRNA VRK1与SBP、DBP、24 h尿蛋白、BUN、Hs-CRP、ALT、AST存在正相关性(r>0,P<0.05)。详见表4。

表4 circRNAVRK1表达水平与各临床指标的相关性分析

2.3 两组孕妇妊娠结局比较

对照组孕妇产后出血、早产、低体重儿比例显著低于PE组,且总不良妊娠结局率低于PE组,差异有统计学意义(P<0.05)。详见表5。

表5 两组孕妇妊娠结局比较[n(%)]

2.4 不良妊娠结局PE孕妇circRNA VRK1表达水平分析

通过分析不同妊娠结局PE孕妇血清circRNA VRK1表达水平,结果显示不良妊娠孕妇circRNA VRK1表达水平(2.15±0.52)显著高于正常妊娠孕妇(1.50±0.48),差异有统计学意义(t=9.057,P<0.001)。

2.5 circRNA VRK1预测PE孕妇不良妊娠结局的效能

ROC曲线结果显示,circRNA VRK1预测PE孕妇发生不良妊娠结局的曲线下面积为0.857(95%CI:0.779-0.934),敏感度为72.90%,特异性为89.40%。见下页图1。

图1 circRNAVRK1预测PE孕妇不良妊娠结局的ROC曲线

3 讨论

PE是一种严重的妊娠期高血压疾病,导致全球每年约70 000名孕妇和50 000名胎儿死亡[8]。尽管PE的临床症状在分娩后会消失,但最近研究证实,有PE史的女性产后5～10年内静脉血栓栓塞事件、中风和缺血性心脏病的发生风险会增加一倍[4]。此外,研究证实PE还会增加不良妊娠结局的发生[9]。既往研究揭示,PE的发病机制包括滋养层细胞的侵袭受损、螺旋动脉重构受损、免疫细胞、母体遗传、miRNA的参与等[10]。近期研究表明,PE的根本原因在于胎盘,在母体螺旋动脉的正常重塑过程中,EVT分化并侵入母体子宫内膜,从而导致血管内转化;滋养层细胞分化和侵袭的失败可能导致母体螺旋动脉重塑不足,胎盘血管发育不全和血管灌注不足,这些均是发生PE的重要原因[11]。因此,迫切需要明确PE的发病机制,及时监控病情变化,从而降低不良妊娠结局的风险。

circRNA在个体发育、繁殖、细胞凋亡和细胞重编程等生命周期活动中具有重要的病理和生理功能,与人类疾病发生发展密切相关[6]。多项研究证实,circRNA参与调节PE滋养层细胞增殖、迁移和侵袭,以及EMT过程[5,12]。Deng等[13]分析了来自重度PE和正常妊娠胎盘的RNA测序数据,发现94个circRNA为上调表达,86个circRNA为下调表达。另有研究显示,PE胎盘组织中circ_0085296呈现出异常上调表达,并会抑制滋养细胞活性[14]。以上研究提示,circRNA在PE进展中扮演重要角色。

circRNA VRK1是一种新发现的环状RNA,参与细胞周期、转录激活、DNA损伤应答和组蛋白修饰[15]。circRNA VRK1已被证实位于骨肉瘤细胞的细胞质中,肿瘤组织中circRNA VRK1呈下调表达,circRNA VRK1过表达能够抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭[16]。circRNA VRK1过表达可通过调节转录抑制因子snail、slug、twist来促进乳腺癌细胞EMT[17]。一项有关膀胱癌的研究报道,circRNA VRK1高表达是肿瘤进展的危险因素[18]。提示circRNA VRK1可能通过介导滋养细胞活性,参与PE发生、发展。近期有报道证实,circRNA VRK1在PE胎盘组织中异常上调表达,其可以结合miR-221-3p,影响滋养细胞侵袭、迁移和EMT[3]。然而,PE中滋养层细胞的EMT失调会导致迁移和侵袭缺陷。本研究PE组血清circRNA VRK1上调表达,与上述报道一致,提示circRNA VRK1的异常表达会抑制滋养层细胞侵入母体子宫内膜,导致螺旋动脉重构不足,胎盘发育不完全,这些过程最终导致了PE的发展。相关性分析显示,PE孕妇circRNA VRK1表达水平与SBP、DBP、24 h尿蛋白、BUN、Hs-CRP、ALT、AST存在正相关性,而以上指标均与病情相关[19],提示检测血清circRNA VRK1变化能够评估PE病情。本研究发现,PE组不良妊娠结局发生率为50.53%,高于对照组的13.00%。同时,PE不良妊娠结局孕妇血清circRNA VRK1表达水平明显高于正常妊娠结局者,提示circRNA VRK1与PE孕妇妊娠结局存在某种联系,circRNA VRK1有作为PE不良妊娠结局分子标志物的潜能。其原因可能是随着病情加重,circRNA VRK1持续高表达,加重胎盘缺氧、缺血,最终发生新生儿窒息等不良妊娠结局。进一步利用ROC曲线分析发现,circRNA VRK1预测不良妊娠结局的曲线下面积为0.857(95%CI:0.779-0.934),敏感度为72.90%,特异性为89.40%,说明血清circRNA VRK1在预测PE不良妊娠结局上有较高价值,并为PE孕儿不良结局预测提供新的研究方向。此外,circRNA具有稳定性、普遍性、特异性和保守性等特点,且血清样本获取简便,这使其成为比其他类型RNA更适合的生物标志物[16]。因此,血清circRNA VRK1的检测对临床预测PE孕妇妊娠结局有一定应用价值。

综上所述,血清circRNA VRK1在PE孕妇中呈上调表达,且与临床指标及妊娠结局有关,对不良妊娠结局有较高预测能力。然而,本研究纳入的PE孕妇均来自单一中心,且病例有限,circRNA VRK1对不良妊娠结局的预测尚有待多中心数据验证。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突。