三种免疫检测法对乙型肝炎血清学标志物的检测价值分析

朱晓雨

乙型肝炎由乙型肝炎病毒(HBV)感染导致, 若患者未得到及时有效的治疗, 可发展为肝硬化、肝癌,危及患者生命安全［1］。早期诊断对乙型肝炎的治疗及预后具有重要意义［2］。乙型肝炎血清学标志物是临床诊断HBV 感染的主要依据, 包括HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb 及HBcAb 5 项, 其 中HBsAg 是HBV感染后最先出现在血清中的病毒抗原, 故临床主要以HBsAg 指标协助乙型肝炎的早期诊断。目前临床常用的血清学检测方法有胶体金免疫层析法、酶联免疫法及化学发光免疫分析法等, 其中胶体金免疫层析法操作简便, 但诊断特异度较低；酶联免疫法成本低, 但存在操作步骤繁琐、操作时间长等不足；化学发光免疫分析法灵敏度和准确度均较高, 但存在试剂稳定性差、发光过程短等问题［3,4］。基于此, 本研究比较了上述三种免疫检测法对乙型肝炎血清学标志物的检测价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017 年6 月～2020 年6 月于本院门诊就诊的57 例疑似乙型肝炎患者为研究对象, 纳入标准：因疲倦乏力、恶心、食欲下降、口干等症状来院就诊；初次接受乙型肝炎血清学标志物检查；既往无肝病史；年龄>18 岁；影像学检查及病历资料完整。排除标准：合并血液系统疾病者；合并其他肝脏疾病者；合并心、肾等脏器功能不全者。其中, 男32 例, 女25 例；年龄21～75 岁, 平均年龄(39.28±14.21)岁；体质量40～72 kg, 平均体质量(53.59±7.47)kg。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂 ①胶体金免疫层析法采用胶体金免疫层析分析仪(广州埃克森生物科技有限公司, 粤械注准20222220802), 所用试剂盒均购自英科新创(厦门)科技有限公司。②酶联免疫法采用BK-EL10A 型酶联免疫检测仪(山东博冠生物技术有限公司, 鲁械注准20212220931)及配套洗板机, 所用试剂盒均购自沈阳惠民生物技术有限公司。③化学发光免疫分析法采用全自动电化学发光免疫分析仪(深圳安赛诊断技术有限公司, 粤械注准20222220387), 所用试剂盒均购自北京泰格科信生物科技有限公司。

1.2.2 检测方法 采集患者清晨空腹静脉血6 ml, 以14 cm 离心半径, 3500 r/min 离心, 10 min 后取上清液,均分为3 份, 分别采用胶体金免疫层析法、酶联免疫法及化学发光免疫分析法检测乙型肝炎血清学标志物。

1.2.3 阳性标准 ①胶体金免疫层析法：若试纸条检测线及对照线各出现一条紫红色反应线, 则检测结果为阳性；仅对照线显色为阴性；对照线不显色表明实验失败, 需重测。②酶联免疫法：以吸光度(OD 值)/临界值为标准, HBsAg、HBeAg、HBsAb 的OD 值/临界值≥1.0, HBeAb、HBcAb 的OD 值/临界值<1.0, 即可判定为阳性。③化学发光免疫分析法：以样本信号/cut-off 值(s/co) 判 断, HBsAg、HBeAg：s/co≥1 为 阳性, s/co<0.9 为阴性, 若s/co 为0.9～1.0 则需重复检测确认；HBcAb、HBeAb：s/co>1 则为阴性, 反之为阳性；HBsAb 含量≥10 mU/ml 则为阳性, 反之为阴性。

1.2.4 荧光定量PCR 检验 采用AGS4800 型实时荧光定量PCR 仪(杭州安誉科技有限公司, 国械注准20173220921), 乙型肝炎病毒核酸(HBV-DNA)定量检测试剂盒由圣湘公司提供。取200 μl 血清加入450 μl DNA 浓缩液, 在100℃温育器中进行10 min 预热, 以12000 r/min 在冰冻离心机离心5 min 后, 将20 μl 上清液置入PCR 管, 设置正确程序后放入仪器设备中检测；设置阳性标准品对照、强阳性与弱阳性对照、阴性对照,结束反应后采取Ct值作标准荧光曲线并计算DNA含量。1.3 观察指标 ①统计实时荧光定量PCR 检验结果。②以实时荧光定量PCR 检验结果为金标准, 比较三种检验方法对乙型肝炎血清学标志物的阳性检出率。③比较三种检验方法对HBsAg 的诊断效能, 准确性=(真阴性+真阳性)/总例数×100%；特异度=真阴性/(真阴性+假阳性)×100%；灵敏度=真阳性/(真阳性+假阴性)×100%。

1.4 统计学方法 采用SPSS19.0 统计学软件处理数据。计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验。P<0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 实时荧光定量PCR 检验结果 实时荧光定量PCR 检验结果显示, 阳性21 例, 阴性36 例。

2.2 三种检验方法对乙型肝炎血清学标志物的阳性检出率比较 胶体金免疫层析法、酶联免疫法及化学发光免疫分析法对HBsAg、HBsAb、HBeAb、HBeAg、HBcAb的阳性检出率比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 三种检验方法对乙型肝炎血清学标志物的阳性检出率比较［n(%)］

2.3 三种检验方法对HBsAg 的检验结果及诊断效能比较 化学发光免疫分析法对HBsAg 的诊断准确性及灵敏度均高于胶体金免疫层析法, 差异有统计学意义(P<0.05)；化学发光免疫法对HBsAg 的诊断准确性高于酶联免疫法, 差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 三种检验方法对HBsAg 的检测结果及诊断效能比较(n, %)

3 讨论

乙型肝炎患者临床症状多表现为食欲不振、干呕恶心和肢体乏力等, 若未得到及时治疗, 可引发多种肝脏疾病, 如肝硬化、急慢性肝炎等, 严重影响降低患者生命质量［3］。乙型肝炎具有较高的传染率, 传染途径包括医源性感染、母婴传播、性传播和血液传播等［4］。因此, 对乙型肝炎进行有效、准确诊断是防治的关键。乙型肝炎血清学标志物是临床诊断乙型肝炎感染的常用指标, 包括HBeAg、HBsAg、HBeAb 等, 可有效反映HBV 在人体内的转变过程。酶联免疫法、胶体金免疫层析法和化学发光免疫分析法均为临床检测血清学标志物的常用免疫检测方法［5］。

酶联免疫法是运用放射免疫技术检测体液中微量物质的固相免疫测定方法, 原理是将抗原或抗体和酶连接, 使其成为保持免疫活性的酶标抗原或抗体复合物, 然后加入底物, 经酶的催化作用变为有色产物, 依据颜色的深浅度对抗原或抗体的水平进行判断, 常用来作定性或者定量的分析［6,7］。胶体金免疫层析法是以胶体金标记与抗原抗体反应相结合的免疫标记技术,采用胶体金标记抗体, 使抗原抗体反应和洗涤在同一渗滤膜(一般为硝酸纤维素)上, 利用微孔膜毛细血管作用向膜的另一端渗移, 反应后根据在膜上的颜色判断结果。化学发光免疫分析法是运用化学发光物质经氧化等化学反应后形成激发态中间体, 通过免疫反应系统标记在被检测标本上, 再用化学方法测定从激发态到基态状态发出的光子量的方法。

本研究结果显示, 胶体金免疫层析法、酶联免疫法及化学发光免疫分析法对HBsAg、HBsAb、HBeAb、HBeAg、HBcAb 的阳性检出率比较差异无统计学意义(P>0.05)。与胶体金免疫层析法比较, 化学发光免疫分析法对HBsAg 的诊断准确性及灵敏度均更高；与酶联免疫法比较, 化学发光免疫法对HBsAg 的诊断准确性更高, 提示化学发光免疫分析法应用于乙型肝炎血清学标志物检测中具有较高的诊断准确性, 可为临床诊断乙型肝炎提供可靠依据。分析原因为酶联免疫法可有效测定乙型肝炎血清学标志物水平, 通过分析相关数据, 可获取较为理想的检测效果, 该方法具有成本低廉的优势, 但操作较为复杂, 且易受到多种因素干扰,进而对检测结果产生影响［8,9］。胶体金免疫层析法成本低廉, 且具有操作简便、检测时间短等优势, 适用于紧急情况如急诊等快速检测, 但对检测低浓度标本存在一定的局限性［10］。化学发光免疫分析法结合了化学发光测定技术与免疫反应的优点, 不易受外界因素的干扰, 对于低浓度标本亦有较高的灵敏度, 试剂稳定且有效期长、检测范围广, 操作快速简单［11］, 对乙型肝炎血清学标志物诊断准确性较高。

综上所述, 胶体金免疫层析法、酶联免疫法及化学发光免疫分析法均为乙型肝炎血清标志物检测的常规免疫检测法, 且各有优缺点, 相比之下, 化学发光免疫分析法的诊断准确性更高。