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Septin9基因甲基化检测对肿瘤风险筛查的价值分析

2023-07-27朱莉莉李岩

四川生理科学杂志 2023年7期
关键词:甲基化符合率直肠癌

朱莉莉 李岩

(1.河南科技大学附属许昌市中心医院健康管理中心,河南 许昌 461000;2.河南科技大学附属许昌市中心医院消化内科,河南 许昌 461000)

肿瘤是机体细胞异常增生形成的一类疾病。结直肠癌作为一类较为常见的恶性肿瘤,近年来发病率和死亡率均呈现出明显上升趋势,而恶性肿瘤的早期筛查是发现和治疗的重要手段[1]。

体检作为人们筛查潜在疾病的一种常用手段,能够提高认门早期识别疾病风险并进行治疗,但在常规体检项目中,对肿瘤风险筛查的项目较少。结肠镜虽作为检测结直肠癌的“金标准”,但由于其侵入性操作使得其很少作为健康人群的筛查肿瘤的方式,而粪便隐血试验由于方便自身的性状以及容易受其余疾病影响大的特点也无法满足早期结直肠癌的筛查。

YKL-40作为一种潜在的肿瘤标志物,已有众多研究证实了其在筛查结肠癌中的价值[2-3]。Septin9基因的结直肠癌的发生发展具有密切联系,能作为结直肠癌的特异性肿瘤标志物[4],因两种检测样本仅需抽取体检人群的外周静脉血,无需健康体检人群进行其他有创操作使得其接受度较高,能够将其作为健康体检人群筛查结直肠癌的体检项目,无需健康体检人群进行其他有创操作使得其接受度较高。

为了进一步研究两种检测方法在健康人群中的应用价值,其本文将进一步对在我院实施Septin9基因甲基化和血清YKL-40检测的健康人群筛查结直肠癌的数据进行进一步分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本研究由本院医学伦理会批准。选取2021年5月~2022年8月于本院健康管理中心行Septin9基因甲基化检测的健康体检人群462例为研究对象,其中男256例,女206例。纳入标准:年龄18~80岁。体检人群均签署知情同意书。排除标准:①已确诊的肿瘤患者;②合并其他严重心、肺功能疾病的患者;③合并血液系统以及凝血功能的疾病。

1.2 方法

1.2.1 标本采集

在早晨体检人群空腹时用K2EDTA真空10 mL抗凝管(紫帽)和EDTA管分别采集外周静脉血10 mL和4 mL。

1.2.2 Septin9基因甲基化检测

将用K2EDTA管采集的10 mL血液标本在2-8℃的条件下保存并在4 h内进行血浆制备,血浆制备采用离心机,以1350±150 g的相对离心力离心全血标本12 min最终完成血浆分离,将离心后的血浆使用移液管转移3.5 mL至另一全新离心管中,该血浆标本于-15至-25℃的条件下保存,4 w内完成检验。

严格按照试剂说明书进行血浆样本提取、DNA硫化处理、洗脱以及PCR反应等步骤对血浆样本进行检测,最后依据定量结果的Ct值进行判断,当3次平行PCR反应中2次结果Septin9基因Ct值<45时判断结果为阳性。本研究所用Septin9基因甲基化检测试剂盒由上海羽哚生物科技有限公司生产的人Septin9基因甲基化DNA检测试剂盒(PCR荧光法)。

1.2.3 血清YKL-40检测

将用EDTA管采集到的4 mL血液标本先静置10 min,接着采用由上海昀冠机电设备有限公司生产的H/T12MM型血液离心机分离出血清,并将其先置于—70℃的条件下保存。接着用使用酶联免疫吸附法实验方法进行血清YKL-40检测并选择河北柏世林科技公司生产的人YKL-40试剂盒,根据说明书步骤严格进行操作,最后根据绘制出的吸光浓度以及标准品浓度绘制曲线并计算出两者的回归方程,最后算出血清YKL-40的检测值,最后以131.27 μg·L-1为临界值[5],血清YKL-40值小于131.27 μg·L-1为阴性和血清YKL-40值大于131.27 μg·L-1为阳性。

1.3 观察指标

(1)两种方法检出阳性率比较;(2)两种方法与肠镜结果符合率比较;(3)两种检测方法在不同年龄人群之中的差异。

1.4 统计学分析

本研究所有数据均用SPSS19.0分析,计数资料百分数(%)表示,卡方检验;计量资料(±s)表示,t检验,等级资料用秩和检验,P<0.05时即差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种方法检出阳性率比较

分析结果发现,使用显示Septin9基因甲基化的阳性检出率为14.07%(65/462例)大于YKL-40检出率为9.09%(42/462例),Septin9基因甲基化的阳性检出率优于YKL-40阳性检出率(P<0.05),见表1。

表1 两种检测方法在不同年龄人群中的筛查差异[n(%)]

表1 两种方法检出阳性率比较两种检测

2.2 两种方法与肠镜结果符合率比较

Septin9基因甲基化检测65例阳性人群之中23例进行肠镜检查,有13人显示结果异常,其符合率为56.52%;CEA检测42例阳性人群之中14例进行肠镜检查,有3人显示结果异常,其符合率为21.43%。Septin9基因甲基化检测方法与肠镜的符合率大于血清YKL-40检测与肠镜的符合率(P<0.05),见表2。

表2 两种检测与肠镜符合率比较[n(%)]

2.3 两种检测方法的特异性和灵敏度比较

比较两种检测方法在不同年龄人群中的筛查差异。根据年龄将筛查人群分为低龄组(<50岁)193人和高龄组(≥50岁)269人。Septin9检测在高龄组的检查率高于低龄组(P<0.05),而CEA检测在不同年龄的筛查人群中差异无统计学意义(P>0.05)。

3 讨论

结直肠癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一,具有较高的死亡率[6]。因其早期无明显症状,大多数患者仅表现出腹泻、便秘以及排便时里急后重等非特异症状,所以只有极少部分患者会在早期确诊,而早期诊断结直肠癌是有效改善其预后并降低死亡率的重要举措。

体检是对未病和将病的健康人群早期发现疾病线索和健康隐患的重要手段,对患者早期诊断疾病具有重要意义。

电子纤维肠镜检查虽然是结直肠癌诊断的金标准,但存在许多缺点:

① 要求受检人群进行长时间肠道准备;

② 作为一项侵入性操作,对患者的身体具有较大的损伤;

③ 存在一定的局限性,有禁忌症的人群并不能进行此项检查。

因此该检查在人群中接受度较小,不能用于健康人群的体检筛查。

Septin9基因甲基化作为结直肠癌的重要生物学特征且具有采样方便、无创伤以及依从性好等特点,将其应用于健康人群体检项目作为早期筛查结直肠癌成为可能。Septin基因家族是能在胞质分裂和细胞极化发挥重要作用且具有 GTP酶活性的基因家族[7]。

当Septin9基因甲基化程度升高,基因表达将被抑制,导致编码蛋白数量减少、结构稳定性减弱,最终促进细胞发生癌变[8]。外周血中Septin9基因发生的甲基化可以通过DNA的特异扩增而被检测到。在多个经肠镜确诊的结直肠癌病例和阴性对照的研究报道中,均表明在结直肠癌病人的血浆中通过检测Septin9基因的甲基化可有效检测到早期癌细胞的DNA。

因此,Septin9基因甲基化能够作为筛查结直肠癌的重要指标,在健康人群中的筛查具有重要意义。其优势之处在于:相比传统检查更为私密,接受度更高。采样方便快捷且创伤小,只需采集一管外周血。

本研究发现Septin9基因甲基化对结直肠病变的阳性检出率高于YKL-40阳性检出率。可能是因为:对比在症状较重时血清YKL-40水平才会有较大的差异大,Septin9作为大肠癌的特殊生物学标记,在早期结直肠病变症状不显著时其血液中的Septin9水平也会存在明显不同。调查结果还显示Septin9基因甲基化检测结果与肠镜检查结果的符合率高于YKL-40检测与肠镜检查的符合率。

文献[9]报道Septin9基因甲基化改变在多数早期结直肠癌患者中就已发生,甚至存在于息肉、腺瘤等癌前病变阶段,其阳性检出率也会随着结直肠癌分期的增加明显升高,所以应用S9基因甲基化检测法能够帮助健康群进行早期的肿瘤风险筛查,本篇研究数据结果证实了这一观点。

在对两种检测结果的年龄分析中发现Septin9检测在高龄组的检查率高于低龄组,而CEA检测在不同年龄的筛查人群中差异无统计学意义。说明将Septin9基因甲基化作为高龄健康人群的筛查项目更有更高的价值,提高早期识别高龄人群患病的风险。

综上所述,通过Septin9基因甲基化检测结果与肠镜结果检查结合,发现Septin9基因甲基化检测能够作为健康人群的体检项目,特别是适用于高龄健康人群早期发现肿瘤与提高结直肠癌的风险筛查上具有重要的意义。

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