膀胱癌组织miRNA-15a、miRNA-21表达预测经尿道膀胱肿瘤切除术后复发的效能分析

张泽峰 殷 波 何文谋 陈百全

1 河南省信阳市第三人民医院泌尿外科 464000; 2 信阳市中心医院泌尿外科

膀胱癌属于临床一种常见癌症,每年新发病例约43万人,时至今日,膀胱癌于靶向药物治疗、手术治疗以及免疫治疗等多个方面已获得明显进步,但膀胱癌复发率与死亡率仍较高[1-2]。故寻找更为准确、适用于膀胱癌的早期诊断、治疗与预后预测的新指标具有重要意义。MicroRNAs(miRNAs)属于丰富的一类非编码调控单链RNA,含20～30个核苷酸序列;miRNAs通过和3’-非翻译区(3’-UTR)不完全互补配对减少目标mRNA表达,甚至降解目标mRNA,此复合体于多个生物学过程中起重要作用,涉及组织生长发育、心血管疾病、免疫反应、代谢类疾病与肿瘤发生发展等过程[3-4]。鉴于此,本文选取我院收治的173例(均完成1年随访)经尿道膀胱肿瘤切除术治疗的膀胱癌患者,分析术后切除组织miRNA-15a、miRNA-21表达对术后复发的预测价值,以期为临床早期制定防治措施提供可参考依据,现报告如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料 选取我院2019年3月—2021年6月收治的173例(均完成1年随访)经尿道膀胱肿瘤切除术治疗的膀胱癌患者为研究对象。纳入标准:(1)符合《膀胱癌临床实践指南(2016)》[5]中关于膀胱癌的诊断标准;(2)膀胱镜组织活检、手术切除组织术后的病理检查等诊断为膀胱癌;(3)完整临床资料;(4)同一医院、同一主刀医师择期实施经尿道膀胱肿瘤切除术;(5)知晓本研究,且签署知情同意书;(6)经伦理委员会与学术委员会的审核批准。排除标准:(1)伴有其他恶性肿瘤;(2)肾功能、肝功能不全;(3)自身免疫类疾病或者免疫缺陷症;(4)伴有其他危重症致使预计生存期<1年;(5)入组前已接受抗肿瘤治疗或者肿瘤复发;(6)中途自愿退出。根据术后1年复发情况将患者分为复发组(35例)和未复发组(138例)。

1.2 方法 膀胱癌组织与配对癌旁组织标本于手术切除之后立即存在液氮内;总RNA用美国加州卡尔斯巴德Invitgen公司提供的Trizol试剂提取,用NanoDrop ND-2000分光光度计检测RNA全部样品的纯度、浓度;应用NCodeTMSYB®Green miRNA qRT-PCR Kit合成miRNA-15a、miRNA-21特异性cDNA(作内对照),实施qRT-PCR,应用DNA Engine Opticon 2 Real-time Cycler予以分析。miRNA-15a正向引物为5’-GCGGTAGCAGCACATAA-3’,反向引物为5’-GTGCAGGGTCCGAGGT-3’;miRNA-21正向引物为5’-UGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUU-3’,反向引物为5’-CUAUACAACCUACUACCUCAUU-3’。利用2-ΔΔCt法计算miRNA-21、miRNA-15a表达水平。

1.3 观察指标 (1)比较两组术后切除癌组织miRNA-15a、miRNA-21表达水平。(2)比较不同病理学参数膀胱癌患者术后切除癌组织miRNA-15a、miRNA-21表达水平。(3)分析术后切除癌组织miRNA-15a、miRNA-21表达水平与病理学参数及复发相关性。(4)分析术后切除膀胱癌组织中miRNA-15a、miRNA-21不同表达水平对术后复发的危险度。

2 结果

2.1 两组术后切除癌组织miRNA-15a、miRNA-21表达水平比较 与复发组相比,未复发组术后切除癌组织miRNA-15a表达水平较高,miRNA-21表达水平较低(P<0.05)。见表1。

表1 两组术后切除癌组织miRNA-15a、miRNA-21表达水平比较

2.2 不同病理学参数膀胱癌患者术后切除癌组织miRNA-15a、miRNA-21表达水平比较 术后切除癌组织miRNA-15a、miRNA-21表达水平与年龄、性别、肿瘤数目、肿瘤直径无关(P>0.05)。术后切除癌组织miRNA-15a表达水平比较:Ta期>T1期,G1/G2级>G3级,有淋巴结转移<无淋巴结转移(P<0.05);术后切除癌组织miRNA-21表达水平比较:Ta期无淋巴结转移(P<0.05)。见表2。

表2 不病理学参数膀胱癌患者术后切除癌组织miRNA-15a、miRNA-21表达水平比较

2.3 术后切除癌组织miRNA-15a、miRNA-21表达水平与病理学参数及复发相关性分析 术后切除癌组织miRNA-15a表达水平与肿瘤分期、肿瘤分级、淋巴结转移、复发呈负相关(P<0.05);术后切除癌组织miRNA-21表达水平与肿瘤分期、肿瘤分级、淋巴结转移、复发呈正相关(P<0.05)。见表3。

表3 术后切除癌组织miRNA-15a、miRNA-21表达水平与病理学参数及复发相关性分析

2.4 术后切除癌组织miRNA-15a、miRNA-21不同表达水平对术后复发的危险度分析 以术后切除膀胱癌组织中miRNA-15a、miRNA-21表达水平的平均值为界,将经尿道膀胱肿瘤切除术治疗的膀胱癌患者分为高水平、低水平,结果显示,术后切除癌组织中miRNA-15a、miRNA-21高水平患者复发的危险度是低水平的0.140、4.355倍(P<0.05)。见表4。

表4 各指标不同水平对术后复发的危险度分析

3 讨论

膀胱肿瘤为全球较为常见的一种肿瘤,其病理分期主要取决于经尿道膀胱肿瘤切除术,其中约66.7%膀胱癌为低级别或者非肌肉浸润性膀胱癌,约33.3%膀胱癌为高级别或者肌肉浸润性膀胱癌[6-7]。根治性膀胱切除术为治疗膀胱癌的标准术式,临床观察和实践中得知,约13%膀胱肿瘤患者于术后可出现远处转移,例如肺、肝、前列腺等器官[8]。临床常用的临床与组织病理学的预测指标,例如组织学分级、肿瘤分期、肿瘤大小等指标,于描述肿瘤进展至肌肉浸润或者肿瘤复发等方面已取得良好应用价值,但无法精准预测非肌肉浸润性膀胱癌的生物学行为,尤其高级别非肌肉浸润性膀胱癌[9]。故需寻找更为准确的新预后指标来预测膀胱肿瘤患者的进展风险。

miRNA-15a基因簇位在人类13号染色体上,处在长链非编码RNA(LncRNA)基因淋巴细胞白血病2(DLEU2)1个内含子中,其通过诱导细胞凋亡,增加肿瘤细胞对于化疗药的敏感度,组织肿瘤自身微环境的产生,抑制肿瘤细胞的侵袭、增殖以及血管生成[10]。以往研究显示,miRNA-15a能作为多个肿瘤诊断与预后预测的一种生物学标志物,其于多个肿瘤组织内表达下调或者缺失[11]。本研究结果指出,未复发组术后切除癌组织miRNA-15a表达水平较高,且Ta期术后切除癌组织miRNA-15a表达水平高于T1期、G1/G2级高于G3级、有淋巴结转移低于无淋巴结转移,此外,术后切除癌组织miRNA-15a表达水平与复发呈负相关,由此可知,miRNA-15a参与膀胱癌患者的肿瘤细胞增殖、迁移等。miRNA-15a表达水平升高可明显抑制扭曲相关蛋白1(Twist1)-3’-UTR活性,下调了包括E钙黏素、N-钙黏素、Twist1、α黏平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在内上皮-间质转化调控(EMT)有关的基因活性,同时降低基质金属蛋白9(MMP9)、基质金属蛋白2(MMP2)活性,抑制肿瘤细胞的迁移与侵袭[12]。本研究指出,未复发组术后切除癌组织miRNA-21表达水平较低,Ta期术后切除癌组织miRNA-21表达水平比较低于T1期,G1/G2级低于G3级、有淋巴结转移高于无淋巴结转移,并与复发成正比(P<0.05),提示miRNA-21表达水平在膀胱癌患者的肿瘤细胞迁移、增殖中起到重要作用。miRNA-21为高度保守的一种小分子RNA,有较独立的启动子,能通过对于抑癌基因的负调控能力,使靶位点失活或者突变,从而引起细胞恶变和转移[13]。

综上可知,miRNA-15a、miRNA-21参与膀胱癌肿瘤细胞的增殖和迁移,与术后复发紧密联系,动态监测其水平变化可为临床预测复发风险提供依据。