106 例痰菌涂阳肺结核患者IGRA 检测结果假阴性的影响因素

夏雪松，李伦，田二军，郭建沂

（1.平顶山市第三人民医院检验科，河南 平顶山 467000；2.平顶山市第一人民医院检验科，河南 平顶山 467000；3.平顶山市疾控中心检验科，河南 平顶山 467000）

肺结核属于慢性传染病，由结核分枝杆菌感染所致，随着疾病进展会累及患者其他脏器，严重威胁生命健康[1]。我国是全世界结核病发病率最高的国家之一，随着《全国结核病防治规划》等措施的实施，结核病发病率呈现一定下降趋势，但防治工作仍不容忽视[2]。肺结核临床症状缺乏典型性，且随着疾病严重程度而不同，尤其是早期发病且病情较轻时，临床诊断难度较大，误诊、漏诊时有发生，不利于临床治疗[3]。痰菌涂片检验与γ-干扰素释放试验（IGRA）均为临床诊断肺结核的常用检验手段，其中IGRA 在肺结核诊断中具有较高特异度（75.2%～95.6%）及敏感度（81.7%～97.1%），但仍会出现假阴性情况[4]。基于此，本研究拟探究痰菌涂阳肺结核患者IGRA 检测结果假阴性的影响因素，旨在为临床辅助诊断肺结核提供参考，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取平顶山市第三人民医院于2020 年10 月—2022 年6 月就诊的106 例痰菌涂阳肺结核患者。纳入标准：①符合肺结核相关诊断标准[5]，痰菌涂片结果阳性；②临床资料完整。排除标准：①最终诊断非肺结核；②合并其他肺部疾病；③免疫系统疾病；④严重脏器损伤。

1.2 方法

①通过查阅病例资料、现场问询等方式收集患者相关资料，包括性别、年龄、糖尿病、贫血、咳嗽、咳痰、治疗史、免疫抑制剂使用、结核病程、卡介苗接种史、γ-干扰素释放量、血清总蛋白、血清白蛋白、白细胞（WBC）计数、NK 细胞计数、淋巴细胞计数、嗜酸性粒细胞（EOS）计数、CD4+T 细胞计数、CD8+T 细胞计数、C 反应蛋白（CRP）、降钙素原（PCT）水平。②IGRA：采集患者静脉血3 ml，采用体外释放酶联免疫吸附法（试剂盒购自北京万泰）进行IGRA 检测。结果判定标准：分为阴性孔（N）、检测孔（T）、阳性孔（P），其中N 孔检测基础γ-干扰素含量，T 孔检测经结核分支杆菌特异性抗原刺激并感染的特异性T 细胞释放的γ-干扰素含量，P 孔检测经植物血凝素非特异性刺激后T细胞释放的γ-干扰素含量，（T-N）≥14 且（T-N）≥N/4 时为阳性，（T-N）＜14 时为阴性；根据IGRA检测结果分为阳性组、假阴性组。③采集患者（空腹状态）外周静脉血，以3500 r/min 转速离心5 min，取上层清液，静置于-70℃冰箱内待检。采用CytoFLEX 流式细胞仪（厂家：美国贝克曼库尔特公司）检测外周血CD4+T 细胞、CD8+T 细胞、WBC、NK 细胞、淋巴细胞、EOS 水平，采用酶联免疫吸附法（试剂盒厂家：上海酶研生物科技有限公司）检测血清总蛋白、CRP、PCT 水平，采用比色法（试剂盒厂家：武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司）检测血清白蛋白水平。

1.3 统计学方法

采用SPSS22.0 统计学软件对数据进行分析。计量资料以（±s）表示，采用t检验；计数资料以[n（%）]表示，采用χ2检验。采用Logistic 多因素回归模型分析痰菌涂阳肺结核患者IGRA 检测结果假阴性的危险因素。以P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 痰菌涂阳肺结核患者IGRA 检测结果假阴性的单因素分析

106 例痰菌涂阳肺结核患者IGRA 检测结果假阴性率为21.70%；两组性别、年龄、糖尿病、贫血、咳嗽、咳痰、治疗史、免疫抑制剂使用、结核病程、卡介苗接种史、血清总蛋白、血清白蛋白、WBC 计数、NK 细胞计数、CD8+T 细胞计数、CRP、PCT 水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；阳性组γ-干扰素释放量、淋巴细胞计数、EOS 计数、CD4+T细胞计数与假阴性组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 痰菌涂阳肺结核患者IGRA 检测结果假阴性的单因素分析

2.2 痰菌涂阳肺结核患者IGRA 检测结果假阴性的多因素Logistic 回归分析

以106 例痰菌涂阳肺结核患者IGRA 检测结果为因变量，将单因素分析中差异有统计学意义的因素（γ-干扰素释放量、淋巴细胞计数、EOS 计数、CD4+T细胞计数）作为自变量，对自变量进行赋值（以106例平均值为界：≤平均值=1；＞平均值=2）。经多因素Logistic 回归分析显示，γ-干扰素释放量（≤3.19 IU/ml）、淋巴细胞计数（≤1.45×109/L）、EOS 计数（＞0.17×109/L）、CD4+T 细胞计数（≤573.09 个/μl）是痰菌涂阳肺结核患者IGRA 检测结果为假阴性的危险因素，见表2。

表2 痰菌涂阳肺结核患者IGRA 检测结果假阴性的多因素回归分析

3 讨论

3.1 痰菌涂阳肺结核患者IGRA 检测结果假阴性的现状

因患者无痰等情况，痰菌涂片检测在肺结核诊断中受到一定限制，而IGRA 具有检测快速等优势，故成为临床辅助诊断肺结核的重要手段[6]。俞珊等[7]研究显示，IGRA 检测结果假阴性率为24.20%，与本研究痰菌涂阳肺结核患者IGRA 检测结果假阴性率21.70%接近，表明采用IGRA 诊断肺结核具有一定误诊、漏诊率。因此，探究痰菌涂阳肺结核患者IGRA 检测结果假阴性的影响因素，对临床辅助诊断肺结核有重要意义。

3.2 痰菌涂阳肺结核患者IGRA 检测结果假阴性的影响因素

本研究通过Logistic 回归分析发现，γ-干扰素释放量（≤3.19 IU/ml）、淋巴细胞计数（≤1.45×109/L）、EOS 计数（＞0.17×109/L）、CD4+T 细胞计数（≤573.09个/μl）是痰菌涂阳肺结核患者IGRA 检测结果假阴性的危险因素。进一步分析其原因在于：①IGRA 是于体外检测经结合特异性抗原刺激后的T 细胞释放γ-干扰素能力的一项免疫学技术，γ-干扰素释放量较少时，会抑制IGRA 的灵敏度及敏感度，从而影响IGRA 检测结果准确性[8]。徐宁等[9]研究结果也表示，γ-干扰素释放量是IGRA 检测结果的影响因素，也支持本研究结果。②杨毅等[10]研究发现，淋巴细胞计数在临床鉴别诊断脊柱结核和布鲁氏菌性脊柱炎中具有重要作用。淋巴细胞是参与机体免疫应答反应的重要组分，淋巴细胞的降低会导致机体缺乏对结核抗原的应答，从而抑制γ-干扰素释放，影响IGRA检测结果准确性。③陈彬[11]的一项研究中表示，EOS 计数与全血酶联免疫吸附测定法的IGRA 检测结果假阴性有关（OR=0.057，95%CI：0.004～0.811）。本研究数据显示，EOS 计数（＞0.17×109/L）的痰菌涂阳肺结核患者IGRA 检测结果假阴性发生风险是EOS 计数（≤0.17×109/L）的5.718 倍，说明EOS计数是IGRA 检测结果假阴性的影响因素。考虑原因在于EOS 可通过介导白介素-6、过氧化物酶等多种介体，调控Th1-Th2 免疫应答，参与机体抗结核免疫反应。当EOS 增多时，会降低IGRA 敏感性，从而增加假阴性风险。④有研究发现[12]，结核病患者常伴随CD4+T 细胞计数降低，而CD4+T 细胞是分泌γ-干扰素的重要细胞，CD4+T 细胞较少会降低γ-干扰素水平，从而提高IGRA 假阴性率。马进宝等[13]研究中显示，CD4+T 细胞计数（＜400 个/μl）是涂阳肺结核患者IGRA 检测假阴性的独立危险因素，一定程度上支持本研究结果。

此外，既往有研究表示[14]，年龄（≥40 岁）是IGRA 检测痰菌阴性肺结核患者假阳性的危险因素。但本研究经进一步分析发现，IGRA 检测假阴性与年龄无显著相关性，与上述研究结果不一致，这可能与研究对象不同有关，患者年龄越大，其身体综合素质及免疫力逐渐下降，且基础疾病患病风险越高，可能会对研究结果造成一定影响。孙丹雄[15]的一项IGRA 假阴性影响因素的研究中指出，空腹血糖水平与结核杆菌特异性γ-干扰素水平呈负相关，糖尿病和结核病程均可导致IGRA 假阴性，与本研究结果较不一致，考虑原因为本研究选取对象平均年龄较小，且平均病程较短，糖尿病及肺结核疾病程度可能相对较轻，在一定程度上影响了研究结果，造成一定偏差。若要明确年龄、糖尿病、结核病程等其他因素与IGRA 检测假阴性的相关性，应扩大样本选取范围进一步深入分析。

3.3 总结

综上所述，γ-干扰素释放量（≤3.19 IU/ml）、淋巴细胞计数（≤1.45×109/L）、EOS 计数（＞0.17×109/L）、CD4+T 细胞计数（≤573.09 个/μl）均为痰菌涂阳肺结核患者IGRA 检测结果假阴性的危险因素，临床应用IGRA 诊断肺结核时应综合评估，如检测结果为阴性且存在以上因素异常，应慎重结合临床表现及进一步检查进行综合判断，以防止误诊、漏诊。