食管癌组织中Krüppel-like Factor4表达与术后复发转移的相关性

安小康 丁钎州 郭明杰 周 冉 陈 涛 黄智超 郑先杰 张国瑜

食管癌(esophageal cancer,EC)是由食管鳞状上皮或腺上皮异常增生导致的恶性肿瘤,是全球第六大癌症死亡原因,全球90%以上的食管癌是鳞状细胞癌[1]。食管癌是消化系统常见的恶性肿瘤,其临床特点是侵袭性强、致死率高[2]。食管癌在中国的发病率高,中国的食管癌病例占全球病例总数的一半以上[3]。在中国,超过 90% 的食管癌是鳞状细胞癌[4]。目前治疗EC首选方式是外科手术切除[5]。尽管食管切除术仍然是食管癌的主要治疗方法,但食管癌具有很强的侵入性,并且与高发病率和死亡率相关[6]。Krüppel-like Factor4(KLF4)是一种进化上保守的含锌指的转录因子,可调节细胞生长、增殖和分化等多种细胞过程[7]。KLF4在多种肿瘤中异常表达,在不同组织中可与不同的靶基因相互作用,发挥抑癌或促癌双重作用[8]。但是,目前关于KLF4与食管癌的关系研究较少。本研究采用免疫组化法检测食管癌组织中KLF4蛋白的表达水平,并分析其与复发转移的关系。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2017年5月至2020年2月本院收治的食管癌患者160例。纳入标准:①符合《食管癌诊疗规范》[9]标准,经电子胃镜检查以及病理活检诊断为食管癌;②未接受其他肿瘤治疗;③患者签署自愿受试同意书,患者及其家属需签署知情同意书。排除标准:①精神疾病患者;②合并其他恶性肿瘤患者;③合并其他器官严重性病变患者;④不能耐受手术或麻醉者。

1.2 Krüppel-like Factor4检测

手术中获取患者癌组织,用4%多聚甲醛固定、脱水、包埋成石蜡标本,切成约4 μm切片,经常规烤片、脱蜡、水化,微波炉法抗原修复15 min,山羊血清白蛋白孵育30 min。孵育Krüppel-like Factor4 一抗,4 ℃孵育过夜,次日孵育二抗,DAB显色,苏木精复染,梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树脂封片。结果判断标准:①以切片中细胞着色深浅评分,0分表示细胞无着色;1分为浅黄色;2分为棕黄色;3分为棕褐色;②以阳性细胞数在同类细胞数中所占百分比评分:0分为无阳性细胞;1分为阳性细胞占比<10%;2分为占比10%～50%;3分为>50%。以两项相加得分为染色结果:>2分为阳性,≤2分为阴性。

1.3 术后随访及复发转移判断

随访时间自患者确诊日期至截访日期(2021年12月30日),每3个月回访1次,随访方式为电话、门诊复查等。术后复发转移根据患者病史、体格检查、影像学检查及病理检查确定。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 Krüppel-like Factor4在食管癌组织中的表达情况

160例患者Krüppel-like Factor4阳性表达68例(42.5%),阴性表达92例。

2.2 Krüppel-like Factor4表达水平与食管癌患者临床病理参数的相关性

Krüppel-like Factor4蛋白表达与分化程度、临床分期和淋巴结转移等临床病理参数显著相关(P<0.05),与患者的年龄、性别、肿瘤直径均无相关性(P>0.05),见表1。

表1 Krüppel-like Factor 4 表达水平与食管癌患者临床病理参数的相关性/例

2.3 复发转移组和未复发转移组Krüppel-like Factor4表达水平比较

复发转移组Krüppel-like Factor4阳性表达率显著低于未复发转移组,差异有统计学意义(P<0.05),见表2。

表2 复发转移组和未复发转移组术后Krüppel-like Factor4表达水平比较/例

2.4 多因素 Logistic 回归分析

多因素分析显示,Krüppel-like Factor4(OR=2.012,P<0.001)是食管癌术后发生复发转移的独立影响因素。见表 3。

表3 食管癌术后发生复发转移的多因素 Logistic 回归分析

3 讨论

食管癌属于常见的消化道恶性肿瘤,具有高发病率和死亡率的特点[10]。食管癌是所有胃肠道恶性肿瘤中最具侵袭性的一种,主要包括食管上部三分之一或中部的鳞状细胞癌(SCC),或下部三分之一或食管与胃相交处的腺癌(AC)[11-12]。手术切除被认为是食管癌治疗的首选,目前常采用食管癌根治术进行治疗,可有效改善患者预后,但是手术创伤较大,且手术切除患者5年生存率仅约25%[13-14]。食管切除术是一个复杂的过程,包括胸腔,腹部或颈部[15],其术后预后情况受以下几个因素影响:手术方式的选择、标准化围手术期临床护理方案、术后并发症情况等[16-17]。对于浸润性癌,经典的经胸食管切除术被认为是最好的肿瘤手术,因为它允许完全切除肿瘤,但是术后容易出现食欲减退、早饱、吞咽困难、误吸和反流等症状,影响患者的生活质量[18-19]。由此可见,食管癌早期有效治疗对提高生存率、促进预后改善尤为重要。

Krüppel样因子4(KLF4/GKLF)是一种锌指转录因子,KLF4属于SP/KLF因子家族,其特征在于其羧基末端序列中的3个锌指基序,在胃肠道上皮细胞中广泛表达[20]。在其氨基末端,KLF4 拥有一个反式激活域(TAD)和与之相邻的一个抑制域,它们通过与其他因子相互作用和调节DNA结合效率共同决定了KLF4转录调节活性的特异性[21-22]。研究证明了KLF4在调节结肠上皮细胞的生长和分化中的潜在作用[23]。在结肠癌细胞中,KLF4的组成型过表达诱导细胞周期停滞在G1期并抑制DNA合成和细胞增殖[24]。这些作用似乎是通过激活p21 WAF1/Cip1和/或抑制细胞周期蛋白D1启动子来介导的[25]。研究表明,KLF4反式激活人肠碱性磷酸酶基因并促进丁酸钠诱导的结肠癌细胞分化和凋亡[26]。KLF4表达在各种人类癌症类型中经常丢失,例如结直肠癌、胃癌、食道鳞状细胞癌、肠癌、前列腺癌和膀胱癌[27]。本研究中Krüppel-like Factor4蛋白表达与分化程度、临床分期和淋巴结转移等临床病理参数显著相关,复发转移组术后Krüppel-like Factor4阳性表达率显著低于未复发转移组,提示Krüppel-like Factor4与食管癌术后复发转移存在一定的关联。进一步进行多因素分析,结果显示Krüppel-like Factor4(OR=2.012,P<0.001)是食管癌术后发生复发转移的独立影响因素,提示Krüppel-like Factor4参与了食管癌术后复发转移,监测患者术后组织Krüppel-like Factor4表达情况,对患者的预后评估有重要临床意义。

综上所述,食管癌患者术后组织中Krüppel-like Factor4表达与复发转移具有相关性,其对患者术后复发转移具有重要预测价值。然而本研究的样本量有限,未来计划开展多中心大样本研究以增加研究结果的可信度,并开展针对性的预防措施。