喉癌组织中let-7a表达及其临床意义

董玉科 李玉杰 黄 炜 李 韬 党燕伟 许连方 申 晓 李蓓莹 李鸿燕 黄丽洁

喉癌属于临床上常见的恶性肿瘤疾病之一,发病率范围为5.7%～7.6%[1]。研究报道[2],2015年在我国范围内新发喉癌达到2.64万,其中死亡人数达到了1.45万,且此类疾病的发病率依旧呈现上升趋势。喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)属于喉癌中较为常见的类型,占据95%以上。近几年,临床常通过手术、放化疗及生物治疗等方式用于喉癌患者,近期预后有效得到改善,但是患者远期生存效果并不理想。研究报道[3],晚期喉癌患者5年生存率仅仅51%左右,此类患者常见死因为局部复发及转移。近年来,人们生活质量明显得到改善,使得患者对生存质量提出更高的要求,以往治疗理念是提高生存几率,现如今转变为尽可能保留患者喉功能。由此,积极探讨喉癌细胞生物学行为特征,在诊断、治疗喉癌方面具有重要意义。因此,积极寻找敏感性、特异性高的生物标志物属于目前研究重点。MicroRNA属于一类非编码小RNA,其与微泡包裹,或者结合于蛋白质复合物中,从而分泌至细胞外,再输送至两个邻近的远处的细胞,最终发挥调节作用。miRNA主要通过调节细胞通路,用于治疗癌症等。let-7a属于MicroRNA分子中的成员之一,能与癌基因的3＇非编码翻译区相互作用,进而下调靶基因表达,最终抑制肿瘤细胞的生长、浸润等[4]。关于喉癌let-7a水平与喉癌的关系尚且需要进一步探讨,为寻找新型生物标志物提供参考,内容如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

将2019年12月至2022年12月在本院就诊的80例经病理检查确诊为喉癌的患者作为研究对象。其中男性48例,女性32例,年龄≤60岁43例,>60岁37例,肿瘤类型:声门上型9例,声门型65例,声门下型6例,分化程度:高分化52例,中低分化28例,TNM分期:Ⅰ～Ⅱ期59例,Ⅲ～Ⅳ期21例,49例吸烟,44例饮酒,淋巴结转移:无54例,有26例。

1.2 研究方法

采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测let-7a表达。依据Trizol试剂盒(生产厂家:上海名劲生物科技有限公司)说明书步骤操作提取血清总RNA,采用Super Script Ⅲ试剂盒(北京智杰方远科技有限公司)将上述获取的RNA进行反转录操作,合成cDNA。采用qRT-PCR MasterMix试剂盒(北京百奥莱博科技有限公司)进行qRT-PCR,用于检测let-7a水平。具体反应条件:95 ℃预变性30 s,95 ℃变性5 s,50 ℃复性15 s,75 ℃延伸30 s,包括40个cycles。内参基因为U6,let-7a引物来源于生工生物工程(上海)股份有限公司。采用2-△△Ct计算let-7a相对表达量。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 let-7a表达与喉癌患者临床病理参数的关系

let-7a表达量在分化程度、TNM分期、淋巴结转移方面比较,P<0.05,在性别、年龄、肿瘤类型、吸烟史及饮酒史方面比较,P>0.05。见表1。

表1 let-7a表达与喉癌患者临床病理参数的关系

2.2 ROC曲线分析let-7a水平诊断喉癌的价值

ROC曲线分析显示,曲线下面积(Area Un-der Curve,AUC)为0.851,95%置信区间为0.775～0.933,灵敏度为73.9%,特异度为78.2%,let-7a相对表达量的最佳临界值为0.77。见图1。

图1 ROC曲线分析let-7a水平诊断喉癌的价值

3 讨论

let-7属于一类序列、表达模式、调控功能均高度保守的miRNA,let-7a是let-7家族成员之一。研究报道[5],let-7a属于肿瘤抑制因子。let-7a在肺癌[6]、乳腺癌[7]、淋巴瘤[8]等疾病中表达较低,说明低水平的let-7a在多种肿瘤疾病的发生和发展中具有重要作用。研究显示[9],let-7a可负性调控基因表达水平,抑制头颈癌疾病进展。又如周斌等的研究称[10],甲状腺乳头状癌患者let-7a表达水平明显下调。let-7a在不同恶性肿瘤疾病的作用及可能存在的机制越来越深入,let-7a可指望成为评估肿瘤患者病情、预后的分子标志物。目前关于miRNA与肿瘤疾病的关系研究报道较多,但是关于let-7a与喉癌的关系值得深入探讨。

本次研究结果显示,喉癌患者let-7a表达量在分化程度、TNM分期、淋巴结转移方面比较,P<0.05,此项研究结果说明let-7a水平的下降与喉癌细胞侵袭、转移存在关系。研究称[11],上调喉癌细胞中let-7a表达,可通过靶向抑制高迁移率族蛋白A2(high Mobility Group A2,HMGA2)表达,进一步控制细胞增殖、迁移等,而通过下调let-7a,并促进HMGA2表达上升后,肿瘤细胞恶性程度增强。ROC曲线分析显示,let-7a水平诊断喉癌AUC为0.851,灵敏度为73.9%,特异度为78.2%,说明let-7a对喉癌患者病情监测具有一定参考价值。

综上所述,let-7a水平在喉癌呈低表达,其水平变化与分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关,且且可作为预测喉癌发病风险敏感指标。但是let-7a辅助诊断喉癌的价值依旧存在限制,肿瘤疾病的发生机制较为复杂,无法以miRNA发生变化来解释,或许可能存在更多血清miRNA变化及机制的探讨有利于挖掘喉癌疾病发生机制。