蒙药制剂亚玛丸中羟基红花黄色素A的含量测定方法研究

郭司群　迟晓雪　白雅静

【摘要】目的：建立亚玛丸中羟基红花黄色素A的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱为SHIMADZU-GL WondaCract ODS-2 C18 （4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为甲醇、乙腈和0.7%磷酸溶液进行洗脱，流速为0.8 mL/min；柱温：35 ℃；检测波长403 nm。结果：羟基红花黄色素A在2.01～30.15 μg/mL的浓度范围内线性关系良好，r=0.9999，回收率为96.5%。结论：该方法经方法学验证准确可行，可用于亚玛丸的质量控制。

【关键词】高效液相色谱法；亚玛丸；羟基红花黄色素A

【中图分类号】R284.1【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2023）12-0030-03

Study on Determination of Hydroxysafflower Yellow A in Yama Pill GUO Siqun CHI Xiaoxue BAI Yajing

1.Hulunbeier Institute for Food and Drug Control，Hulunbeier 021008，China;

2.Hulunbuir Institute of Forestry and Grassland Science， Hulunbeier 021008，ChinaAbstract：Objective To establish a method for the determination of Hydroxysafflower yellow A in Yama pill. Methods high performance liquid chromatography was used. The column was SHIMADZU-GL WondaCract ODS-2 C18 （4.6 mm×250 mm，5 μm）， the mobile phase was methanol acetonitrile 0.7% phosphoric acid solution， the flow rate was 0.8 mL/min， the column temperature was 35 ℃， and the detection wavelength was 403 nm. Results the linear relationship of Hydroxysafflower yellow A was good in the range of 2.01-30.15 μg/mL，r=0.9999，the recovery rate was 96.5%.Conclusion The method is proved to be accurate and feasible by methodology， and can be used for the quality control of Yama Pills.

Keywords：HPLC；Yama Pill；Hydroxysafflower Yellow A

蒙藥制剂亚玛丸由制硼砂、热制水银、制硫磺、人工牛黄、草乌叶、诃子、翻白草、苘麻子、决明子、栀子、枫香脂、红花、石菖蒲、山麦冬、没药、檀香、大托叶云实、木香、水牛角浓缩粉、丁香、文冠木、银朱、川楝子、人工麝香二十四味药组成。具有消“粘”，祛“亚玛”病，清血，热的功效，可用来治疗“亚玛”病诸症［1］，风湿，类风湿，皮肤病，偏正头疼、血热头疼，小脑刺痛，中风初期，白脉病。蒙药制剂是保障蒙医药事业发展的重要前提，其中制剂质量控制又是保证蒙药安全、有效的重要基础［2］，由于亚玛丸目前暂无质量标准，无法有效控制制剂质量，因此本实验根据制剂功效选取组方药材红花作为制剂质量控制药材。红花，性温、味辛，具有通经散瘀、消肿止痛的功效［3］。参考《中国药典》2020年版一部中“红花”项下的含量测定方法［4］，建立高效液相色谱法，对处方中红花所含的羟基红花黄色素A的含量测定进行研究。

1仪器与材料

岛津LC-20AT型高效液相色谱仪（二极管阵列检测器）；KQ2200DB型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；赛多利斯BSA224S型、BP211D型电子天平（德国赛多利斯科技有限公司）；PB-10型酸度计（德国赛多利斯科技有限公司）。

亚玛丸样品由内蒙古国际蒙医医院提供（批号：20191811、20200313、20200324）；羟基红花黄色素A （批号：111637-202111，中国食品药品检定研究院）；乙腈、甲醇（色谱纯 Fisher Chemical）；磷酸（分析纯，天津科密欧试剂有限公司）；自制纯化水。

2方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：SHIMADZU-GL WondaCract ODS-2 C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇-乙腈（26∶2）为流动相A，0.7%磷酸溶液（用三乙胺调制pH为6.0±0.1）为流动相B，A∶B（20∶80）；流速：0.8 mL/min；柱温：35 ℃；检测波长：403 nm；进样量：20 μL。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备取羟基红花黄色素A对照品4.12 mg，用25%甲醇稀释制成4.12 μg/mL的溶液，作为对照品溶液。

2.2.2供试品溶液的制备取上述丸剂研细，取约2.0 g，置具塞锥形瓶中，加入25%甲醇50 mL，密塞，称取重量，超声（功率350 W，频率40 kHz）40 min，放冷，再称取重量，以25%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.3阴性对照溶液制备取按处方配比并以同样工艺生产的缺红花的阴性供试品，按2.2.2项下供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液。

2.3干扰试验分别取2.2.1、2.2.2、2.2.3项下对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20 μL，按2.1项下色谱条件进行测定，结果表明：其他组分对羟基红花黄色素A的测定无干扰。结果如图-1、图-2和图-3所示。

2.4方法学考察

2.4.1线性关系精密称取羟基红花黄色素A对照品2.01 mg，用25%甲醇溶解制成每1 mL含羟基红花黄色素A 40.20 μg的储备溶液。精密量取对照品储备溶液0.5 mL、1.0 mL、2.5 mL、5.0 mL和7.5 mL，分别置于10 mL量瓶中，用25%甲醇稀释至刻度，摇匀，制成羟基红花黄色素A的2.01 μg/mL、4.02 μg/mL、10.05 μg/mL、20.10 μg/mL和30.15 μg/m 1系列浓度溶液。按2.1项下色谱条件，以浓度X（μg/mL）为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线。结果见表1。

2.4.2精密度试验取2.2.1项下对照品溶液，按2.1色谱条件连续进样5针，记录色谱峰面积，羟基红花黄色素 A 峰面积的 RSD为0.36%，表明仪器精密度良好。

2.4.3稳定性试验取同一供试品溶液，分别于0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h进行测定，结果见表2，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.4.4重复性试验取样品（批号：20200313）供试品6份，各约2.0 g，精密称定，按2.2.2项下方法制备，按2.1项下色谱条件测定，结果见表3，表明该方法的重复性良好。

2.4.5回收率试验取已知含量的样品（批号：20200313，含量为0.063 mg/g）9份，各约1.0 g，精密称定，置具塞錐形瓶中，分别加入用25%甲醇配制的0.0326 mg/mL羟基红花黄色素A对照品溶液1.5 mL、1.8 mL、和2.2 mL，按2.2.2项下方法制备，按2.1项下色谱条件测定，计算回收率，结果见表4，表明该方法的准确度良好。

2.5样品含量测定取三批样品按2.2.2项下方法制备，按2.1项下色谱条件测定。结果见表5。

3讨论

3.1色谱条件的选择参考2020年版《中国药典》一部“红花”含量测定项下流动相组成，分别考察甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液（26∶2∶78）、甲醇-0.7%磷酸溶液（22∶78）、甲醇-0.7%磷酸溶液（20∶80）及2.1项下流动相比例时羟基红花黄色素A的保留时间和分离情况，结果表明：以2.1项下流动相比例，羟基红花黄色素A能与其他成分达到较好分离，且保留时间在20 min内。采用紫外-可见分光光度计对2.2.1项下羟基红花黄色素 A 对照品溶液在200～450 nm范围内进行波长扫描，结果在 402.5 nm处有最大吸收，因此选择 403 nm 作为检测波长。

3.2供试品溶液制备分别使用甲醇、25%甲醇、50%甲醇和水作为提取溶剂进行考察，结果表明25%甲醇提取量明显高于其他三种提取溶剂。对加热回流和超声两种提取方法进行比较，结果表明两种提取方法含量差异并不明显，考虑操作的简便性，最终选用超声作为提取方法。同时又对超声30 min、40 min和50 min进行比较，结果表明超声40 min时，羟基红花黄色素A的提取量明显高于30 min，与50 min差异不大，所以本次实验选择超声时间为40 min。

综上，研究建立的高效液相色谱法简便可行、结果准确，可用于亚玛丸的质量控制。参考文献

［1］石瑞平.蒙医药辨证治疗亚玛病的临床体会［J］.中国民族医药杂志，2012，18（2）：17.

［2］董玉.基于质量标志物的蒙药质量标准体系建设［J］.中华中医药杂志，2021，36（1）：56-59.

［3］高海珣，杨秀芬.羟基红花黄色素A药理作用研究进展［J］.亚太传统医药，2015，11（19）：41-44.

［4］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2020：157-158.

（收稿日期：2022-10-14编辑：刘斌）