复方新会陈皮含片质量控制研究

昌水平　梁志云　张明　张俊杰　余香　陈观凤　张军

【摘要】目的：建立復方新会陈皮含片的质量控制方法。方法：采用TLC鉴别含片中新会陈皮、蛇胆汁、甘草；采用高效液相色谱法同时测定含片中甘草苷、甘草酸铵、橙皮苷、川陈皮素和橘皮素的含量，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Kromasil C18 柱长为250 mm，内径为4.6 mm，粒径为 5 μm）；以乙腈（A）- 0.05%磷酸溶液（B）为流动相，梯度洗脱；检测波长为237 nm、254 nm；流速为1.0 mL/min；柱温为30 ℃。结果：复方新会陈皮含片色谱中，与新会陈皮的橙皮苷、川陈皮素、橘皮素及甘草的甘草苷、甘草酸铵对照品色谱相应的位置上有相同保留时间的色谱峰，阴性对照试验无干扰。各对照品峰面积与进样质量呈良好的线性关系，其回归方程分别为橙皮苷：y=267.92x+10.046，r=0.9992；川陈皮素：y=2771.4x-15.586，r=1；橘皮素：y=1692.3x+4.7767，r=0.9999；甘草苷：y=1684.6x+8.3101，r=0.9991；甘草酸铵：y=347.97x+12.726，r=0.9993。平均加样回收率分别为94.93%（RSD=0.76%），101.10%（RSD=1.39%），102.36%（RSD=0.91%），101.75%（RSD=1.98%），102.33%（RSD=1.60%）。结论：复方新会陈皮含片质量控制实验研究建立了药材的TLC定性鉴别方法和含片中橙皮苷、川陈皮素、橘皮素、甘草苷、甘草酸铵的含量测定方法，能有效地控制复方新会陈皮含片制剂的质量。

【关键词】复方新会陈皮含片；质量控制；实验研究

【中图分类号】R282【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2023）12-0024-06

Experimental Study on QualityControl of Compound Xinhui Citri Reticulatae Pericarpium Buccal TabletsCHANG Shuiping LIANG Zhiyun ZHANG Ming ZHANG Junjie YU Xiang CHEN Guanfeng ZHANG Jun

1.Jiangmen Xin Hui Hospital of Traditional Chinese Medicine，Jiangmen 529100，China；

2.Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510006，ChinaAbstract：Objective To establish the quality control method for compound Xinhui citri reticulatae pericarpium buccal tablets. Methods TLC was used to identifycitri reticulatae pericarpium， snake bile and licorice.The contents of liquiritin， ammonium glycyrrhetate， hesperidin，nobiletin and tangeretin in lozenges were determined by high performance liquid chromatography.Octadecylsilane bonded silica gel was used as filler （Kromasil C18 column length 250 mm， inner diameter 4.6 mm， particle size 5 μm）.Acetonitrile （A） -0.05% phosphoric acid solution （B） was used as mobile phase in gradient elution. The detection wavelength was 237 nm and 254 nm. The flow rate was 1.0 mL/min. The column temperature was 30 ℃.Results In the chromatogram of compound Xinhui citri reticulatae pericarpium buccal tablets，there were chromatographic peaks with the same retention time corresponding to the chromatographic positions of hesperidin，nobiletin，tangeretin，liquiritin and ammonium glycyrrhetate， and the negative control test had no interference.There was a good linear relationship between the peak area of each reference substance and the injection quality， and the regression equations were as follows：hesperidin：y=267.92x+10.046，r=0.9992. nobiletin：y=2771.4x-15.586，r=1. Tangeretin：y=1692.3x+4.7767，r=0.9999. liquiritin：y=1684.6x+8.3101，r=0.9991.ammonium glycyrrhetate：y=347.97x+12.726， r=0.9993.The average recovery rates respectively were 94.93%（RSD=0.76%），101.10%（RSD=1.39%），102.36%（RSD=0.91%），101.75%（RSD=1.98%），102.33%（RSD=1.60%）.Conclusion The TLC method for qualitative identification and determination of hesperidin，nobiletin，tangeretin，liquiritin and ammonium glycyrrhetate in lozenges were established，which can effectively control the quality of compound Xinhui citri reticulatae pericarpium buccal tablets.

Keywords：Compound Xinhui Citri Reticulatae Pericarpium Buccal Tablets；QualityControl；ExperimentalStudy

复方新会陈皮含片是将江门市新会区中医院由新会陈皮、蛇胆、甘草、桔梗炮制的特色饮片研制成口含片剂型，该含片制剂作过一些研究［1-2］。按照“医疗机构制剂注册管理办法”（试行）要求，在原处方用量、用法，没有使原组方中治疗疾病的物质基础改变的前提下，采用新会陈皮碎成细粉；甘草与桔梗煎煮，浓缩，加入蛇胆汁混匀，喷雾干燥成药粉；药粉与新会陈皮细粉混匀，制成含片。为了有效地控制其内在质量，本文参照《中国药典》和《广东省中药材标准》的有关指标［3-4］，对含片中新会陈皮、蛇胆汁、甘草的TLC鉴别，含片中甘草苷、甘草酸铵、橙皮苷、川陈皮素和橘皮素的含量测定开展了实验研究，取得结果良好，现报道如下。

1实验仪器与试药

PTy-C5200电子天平，华志电子科技有限公司；AB204-N电子天平，瑞士Mettler Toledo公司；SQP电子天平，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；Agilent 1260 Infinity II高效液相色谱仪，美国安捷伦公司；101-1AB电热鼓风干燥箱，天津市泰斯特仪器有限公司；KQ-400KDE高功率数控超声清洗仪，昆山市超声仪器有限公司；TC-15套式恒温器，海宁市新华医疗器械厂；N-1100V旋转蒸发仪，日本东京理化器械株式会社；2500y高速多功能粉碎机，武义海纳电器有限公司；80目、100目国家标准检验筛，浙江天台飞达金属筛网厂。

橙皮苷对照品（批号：MUST-20031701），川陈皮素对照品（批号：MUST-20041210），橘皮素对照品（批号：MUST-20072310），甘草苷对照品（批号：MUST-20052110），均由成都曼斯特生物科技有限公司提供。甘草酸铵（批号：111610-201005，中国食品药品检定研究院）。新会陈皮饮片（批号：20200201，广东龙晟制药有限公司），甘草饮片（批号：20200703，江西宏康中药饮片有限公司），桔梗饮片（批号：202005101，樟树市庆仁中药饮片有限公司），蛇胆汁（批号：201101，广州康圣药业有限公司），复方新会陈皮含片（批号：20211208，20220224，江门市新会区中医院）。乙腈、甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯，水为超纯水。

2方法与结果

2.1鉴别

2.1.1新会陈皮的鉴别取本品2片，研细，称取约1 g，加甲醇10 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。同法制备广陈皮阴性样品溶液。另取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法（《中国药典》（2020年版）（四部）通则0502）进行试验，吸取上述溶液各2 μL，分别点于同一0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶Ｇ薄层板上，以乙酸乙酯－甲醇－水（100∶17∶13）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇溶液，置于紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。如图1所示。

2.1.2甘草的薄层色谱鉴别取本品12片，研细，称取约6 g，加70%乙醇50 mL，超声处理（功率500 W，频率40 kHz）30 min，滤过，滤液加浓盐酸3 mL，摇匀，加热回流1h，滤过，滤液蒸干，残渣分次加水20 mL，在研棒搅拌下使溶解，用乙醚振摇提取3次，每次20 mL，合并乙醚液，用水洗涤3次，每次30 mL，弃去水液，乙醚液加氨水振摇提取2次，每次20 mL，合并氨水液，加浓盐酸使pH为1～2，用乙醚振摇提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，水洗3次，每次20 mL，弃去水液，乙醚液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。同法制备阴性样品溶液。另取甘草对照药材粉末1 g，加乙醇20 mL，超声处理（功率500 W，频率40 kHz）30 min，滤过，滤液加浓盐酸2 mL，摇匀，自“加热回流1 h”起，同法制成制成对照药材溶液4 mL。参照薄层色谱法（《中国药典》（2020年版）（四部）通则0502）试验，吸取上述溶液各3 μL，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（4∶1∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至各样品斑点显色清晰，置紫外光灯（365 nm） 下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。如图2所示。

2.1.3蛇胆汁的薄层色谱鉴别取供试品15片，研细，称取粉末10 g，用水飽和正丁醇30 mL超声提取30 min，滤过，滤液用正丁醇饱和水洗涤３次，每次15 mL，弃去水洗液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2 mL溶解，作为供试品溶液。同法制备阴性样品溶液。另取蛇胆汁对照药材，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为蛇胆汁对照药材溶液。参照薄层色谱法（《中国药典》（2020年版）（四部）通则0502）试验，吸取上述蛇胆汁对照药材溶液5 μL、供试品溶液及阴性样品溶液各15 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（10∶5∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。如图3所示。

2.2色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Kromasil C18 柱长为250 mm，内径为4.6 mm，粒径为 5 μm）；以乙腈（A）- 0.05%磷酸溶液（B）为流动相；流速为1.0 mL/min；柱温为30 ℃；检测波长为237 nm、254  nm，梯度洗脱方法见表1。

2.3溶液的制备

2.3.1供试品溶液的制备取复方新会陈皮含片研磨成粉末，精密称取粉末约0.7 g，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜（0.22 μm）滤过，取滤液作为供试品溶液。

2.3.2陈皮阴性对照溶液的制备取缺少陈皮药材的阴性对照样品，同供试品“2.3.1供试品溶液的制备”项下操作，制备阴性对照溶液。

2.3.3甘草阴性对照溶液的制备取缺少甘草药材的阴性对照样品，同供试品“2.3.1供试品溶液的制备”项下操作，制备阴性对照溶液。

2.3.4对照品溶液的制备

2.3.4.1甘草苷对照品储备液的制备取甘草苷对照品约10.5 mg，精密称定（10.44 mg），置50 mL量瓶中，以70%乙醇溶解，加70%乙醇至刻度，摇匀，备用。

2.3.4.2甘草酸铵对照品储备液的制备取甘草酸铵对照品约12.5 mg，精密称定（10.53 mg），置25 mL量瓶中，以70%乙醇溶解，加70%乙醇至刻度，摇匀，备用。

2.3.4.3橙皮苷对照品储备液的制备取橙皮苷对照品约30.5 mg，精密称定（30.68 mg），置100 mL量瓶中，以甲醇溶解，加甲醇至刻度，摇匀，备用。

2.3.4.4川陈皮素对照品储备液的制备取川陈皮素对照品约7.5 mg，精密称定（7.56 mg），置25 mL量瓶中，以甲醇溶解，加甲醇至刻度，摇匀，备用。再精密移取2.5 mL至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为配制混标备用液。

2.3.4.5橘皮素对照品储备液的制备取橘皮素对照品约7.8 mg，精密称定（7.84 mg），置25 mL量瓶中，以甲醇溶解，加甲醇至刻度，摇匀，备用。再精密移取2.5 mL至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为配制混标备用液。

2.3.4.6混合对照品溶液的制备精密移取甘草苷对照品储备液1.4 mL、甘草酸铵对照品储备液1.6 mL、橙皮苷对照品储备液2.8mL、川陈皮素对照品储备液2.1 mL、橘皮素对照品储备液1.7 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。（甘草苷0.05846 mg/mL，甘草酸铵0.07610 mg/mL，橙皮苷0.08494 mg/mL，川陈皮素0.01576 mg/mL，橘皮素0.01321 mg/mL）。

2.4专属性试验及结果分别精密吸取全方供试品溶液和阴性样品溶液各14 μL、混合对照品溶液16 μL，注入液相色谱仪，记录色谱。如图4、图5所示。

结果可见，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上有相同保留时间的色谱峰，且阴性对照试验无干扰。

2.5标准曲线的绘制精密吸取“2.3.4.6”项下混合对照品溶液1 μL、2 μL、4 μL、8 μL、10 μL、12 μL，按“2.2”项下色谱条件，甘草苷、甘草酸铵在237 nm波长处依次进样测定，并以进样质量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，计算回归方程甘草苷为y=1684.6x+8.3101，r=0.9991，浓度在0.02832～0.3398 μg范围内；甘草酸铵为：y=347.97x+12.726，r=0.9993，表明在0.1947～2.3368 μg范围内；橙皮苷、川陈皮素、橘皮素在254 nm波长处依次进样测定，橙皮苷回归方程为y=267.92x+10.046，r=0.9992，浓度在0.2521～3.0251 μg范围内；川陈皮素为y=2771.4x-15.586，r=1，浓度在0.1123～1.3477 μg范围内，橘皮素为y=1692.3x+4.7767，r=0.9999，浓度在0.06515～0.7818 μg范围内，进样质量与峰面积均呈良好的线性关系。

2.6精密度试验精密吸取上述“2.3.4.6”项下混合对照品溶液10 μL，按“2.2”项下色谱条件连续进样6次，结果甘草苷、甘草酸铵、橙皮苷、川陈皮素、橘皮素的峰面积RSD值分别为0.43%、0.64%、2.83%、1.85%、0.77%。表明仪器精密度良好。

2.7稳定性试验取本品细粉约0.35 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇25 mL，按“2.3.1”项下供试品溶液制备方法自“密塞”起，制备供试品溶液，分别于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h、24 h按“2.2”色谱条件进样测定，记录峰面积，计算RSD值分别为甘草苷0.98%、甘草酸铵1.80%、橙皮苷2.25%、川陈皮素1.51%、橘皮素1.47%，表明在24 h内基本稳定。

2.8重复性试验按“2.3.1”供试品溶液的制备方法，平行制备6份供试品，按“2.2”色谱条件测定。试验结果表明，复方新会陈皮含片中甘草苷含量为2.0483 mg·g-1，RSD值为0.86%；甘草酸含量为4.9996 mg·g-1，RSD值为0.71%；橙皮苷含量为5.9545 mg·g-1，RSD值为2.04%；川陈皮素含量为1.0222 mg·g-1，RSD值为1.52%；橘皮素含量为0.9083 mg·g-1，RSD值为1.98%。表明本方法重复性良好。

2.9加样回收试验精密称取已知含量的样品0.35 g，各6份，置具塞锥形瓶中，精密加入“2.3.4”项下甘草苷对照品溶液3.4 mL，甘草酸铵对照品溶液3.8 mL，橙皮苷对照品溶液8.3 mL，川陈皮素对照品溶液1.1 mL，橘皮素对照品溶液0.9 mL，再精密加入80%甲醇32.5 mL，按“2.3.1”項下供试品溶液制备方法自“密塞”起，制备加标供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件测定，计算回收率。结果见表2。

试验结果显示，甘草苷平均加样回收率为101.75%，RSD为1.98%；甘草酸平均加样回收率为102.33%，RSD为1.60%；橙皮苷平均加样回收率为94.93%，RSD为0.76%；川陈皮素平均加样回收率为101.10%，RSD为1.39%；橘皮素平均加样回收率为102.36%，RSD为0.91%。表明本方法回收率良好。

2.10样品含量测定取两批复方新会陈皮含片样品，按“2.3.1”项下制备方法制备供试品溶液，注入高效液相色谱仪，外标法计算样品中橙皮苷、川陈皮素、橘皮素、甘草苷、甘草酸的含量，结果见表3。

3讨论

有研究［5-6］表明新会陈皮中含有多种黄酮类活性成分，橙皮苷具有抗炎抗过敏性哮喘的作用，还具有抗氧化、抗炎、抗癌、抗菌、抗病毒等功效。橘皮素可以减少炎症细胞浸润起到抗炎和免疫调节的作用等［7］。川陈皮素可显著抑制5种肿瘤细胞的生长，且对HeLa细胞的抑制效果最好，可促进HeLa细胞的凋亡，并可以增加其凋亡蛋白酶caspase的活性［8］；川陈皮素对支气管有舒张作用能起到平喘的治疗效果［9］。甘草酸是一个最重要的甘草甜素类化合物，有显著的肾上腺皮质激素样作用，可用于人体抗衰老、抗炎、降压、增强机体免疫力、提高生理机能、抑制癌细胞生长等，甘草酸在临床上的应用表明了其确实的疗效［10］。甘草苷可以升高氧化酶活性，减少炎性因子的产生，进一步减轻UVB对细胞造成的氧化损伤，抑制皮肤光老化。甘草营对UVB诱导HaCaT细胞光老化的保护作用［11］。本实验建立了复方新会陈皮含片中主要药材新会陈皮、蛇胆汁、甘草的薄层色谱鉴别方法，耐用性考察试验结果表明，所建立的方法对特征斑点分离度好、阴性无干扰，且方法耐高湿、低湿、低温，可用于复方广陈皮含片的薄层定性鉴别。含量测定项，建立了含片中橙皮苷、川陈皮素、橘皮素、甘草苷、甘草酸同时测定的HPLC含量测定方法，对方法进行专属性、线性、精密度、稳定性、重复性、加样回收考察。结果显示，平均加样回收率分别为94.93%（RSD=0.76%），101.10%（RSD=1.39%），102.36%（RSD=0.91%），101.75%（RSD=1.98%），102.33%（RSD=1.60%），所建立方法简便、快速，结果准确可靠，适用于复方新会陈皮含片制剂的质量控制。参考文献

［1］梁志云，昌水平，张明，等. 复方新会陈皮含片中橙皮苷、川陈皮素、橘皮素的含量测定［J］.中国民族民间医药，2021，30（16）：36-38.

［2］昌水平，林子安，梁志云，等. 復方新会陈皮含片制备工艺研究［J］.新中医，2018，50（9）：22-24.

［3］国家药典委员会. 中华人民共和国药典（一部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2020：88，263.

［4］广东省食品药品监督管理局. 广东省中药材标准 ［S］.广州：广东科技出版社，2004：177-178.

［5］李雪飞，江洪. 橙皮苷药理学作用机制及研究进展［J］.海南医学，2016，27（14）：2337-2340.

［6］曹铭希. 陈皮中橙皮苷的提取及其药理活性的研究进展［J］.中国医药指南，2012，10（12）：452-454.

［7］潘红波，王衬衬，谢典，等.橘皮素药理作用及其机制研究进展［J］.江西科技师范大学学报，2020（6）：80-84.

［8］苏明媛，牛江龙，李林，等. 川陈皮素的体外抑癌活性及其机制研究［J］.中成药，2011，33（9）：1479-1483.

［9］梅全喜，杨得坡．新会陈皮的研究与应用［M］.北京：中国中医药出版社，2019：12.

［10］齐敏.甘草酸药理作用及机制的研究进展［J］.牡丹江医学院学报，2009，30（3）：79-81.

［11］张丽宏，傅云，廖建，等.甘草苷对UVB诱导H aCaT细胞光老化的保护作用及机制研究［J］.中国医药导报，2017，14（36）：13-16.

（收稿日期：2022-10-12编辑：刘斌）