水冬瓜伤科止痛酊质量标准提升研究

2023-06-27杨元凤李承筑罗玉玲陈启乾周训蓉

中国民族民间医药·上半月 2023年2期

杨元凤李承筑罗玉玲陈启乾周训蓉

【摘要】

目的：新建薄层鉴别方法，更加全面有效地控制水冬瓜伤科止痛酊的质量。方法：采用薄层色谱法，在原有质量标准的基础上，增加了黄连、姜黄、醋延胡索、栀子四味药材的定性鉴别。结果：黄连、姜黄、醋延胡索、栀子的薄层色谱斑点清晰、专属性强。结论：本研究建立的实验方法操作简单，结果可靠，重复性好，能够更有效地控制该制剂的质量。

【关键词】水冬瓜伤科止痛酊；质量標准提升；薄层色谱法

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2023）03-0028-04

Promotion on Quality Standard of Shuidonggua Shangke Zhitong Ding

YANG Yuanfeng1，2 LI Chengzhu3 LUO Yuling1，4 CHEN Qiqian1，2 ZHOU Xunrong1，2*

1.Department of Pharmacy， The Second Affiliated Hospital of Guizhou University of Traditional Chinese Medicin，Guiyang 550003，China;

2.Traditional Chinese Medicine Research Center， The Second Affiliated Hospital of Guizhou

University of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550003，China;

3.Department of pharmacy， Bijie Medical College，Guiyang 550003，China;

4.Pharmaceutical Research and Development Center， The Second Affiliated

Hospital of Guizhou University of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550003，China

Abstract：Objective To built up new TLC identification methods to control the quality of Shuidonggua Shangke Zhitong Ding more effectively and comprehensively.Methods TLC was used for distinguishing the Coptidis rhizoma、Processed Rhizome of Corydalis with Vinegar 、Gardeniae fructus and Curcumae longae rhizoma based on the original quality standard in the preparation.Results The TLC spots of Coptidis rhizoma、Corydalis rhizoma、Gardeniae fructus and Curcumae longae rhizoma were clear and specific without interference.Conclusion The test method set up in this study was simple and easy to repeat，the results were trustworthy， which can preferably and effectively control the quality of Shuidonggua Shangke Zhitong Ding.

Keywords：Shuidonggua Shangke Zhitong Ding; Promotion of Quality Standards；TLC

急性软组织损伤是骨伤科临床常见病，在中医学中归属于“筋伤”的范畴，证属气滞血瘀，治宜活血化瘀，消肿止痛［1］。外敷中药是中医骨伤科治疗急性软组织损伤的特色，其不仅具有局部疗效肯定、副作用少的特点，还可免除针灸之痛、服药之苦［2］。

水冬瓜伤科止痛酊（曾用名：苗药伤科止痛液）是我院骨伤科用于治疗急性软组织损伤的医院制剂，具有活血化瘀、消肿止痛之功。处方由苗药嘎炯令豆得（水冬瓜根皮）、黄芩、黄连、黄柏、栀子、伸筋草等22味药物组成，临床使用近11年，疗效确切，未发现明显毒副作用，取得了较好的经济效益与社会效益［3］。但在目前执行的水冬瓜伤科止痛酊的质量标准［4］中，定性鉴别检查项只有3味药材的薄层色谱鉴别方法。根据《贵州省医疗机构制剂技术审评要点（中药、民族药）（试行）》中对定性鉴别药味数的要求是至少要全处方的1/3的处方量，即该制剂至少需定性鉴别出7味药材（全处方由22味中药组成）才符合对产品质量有效控制的要求。为了提高水冬瓜伤科止痛酊的质量控制水平。按照新的医疗机构制剂技术评审要求，我院中药制剂研发中心正对其进行深度开发研究。在原有3味药材定性鉴别的基础上，新建立了制剂中黄连、姜黄、延胡索、栀子4味药材的薄层鉴别方法，提升了水冬瓜伤科止痛酊的质量标准，为其进一步研究奠定基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器 ZF-20D型暗箱式紫外分析仪（巩义市予华仪器有限责任公司）；JY 3001型药物电子天平（上海民桥精密科学仪器有限公司）；DZKW-4型电子恒温水浴锅（上海金桥科析仪器厂）；SK8210HP型超声波清洗机（上海科导超声仪器有限公司）；101-2AB型电热鼓风干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）。

1.2 试药黄连（黄连）、姜黄、栀子、延胡索对照药材（批号分别为121752-201801、121188-201605、120986-201610、120928-201609）均由中国食品药品检定研究院提供；水冬瓜伤科止痛酊（全方冰片、薄荷脑除外，其余20味饮片混合粉碎成最粗粉，装入2层过滤袋，置密闭容器中，第一次加4.6倍60%乙醇，第二次加3倍60%乙醇，密闭浸渍2次，每次浸渍7 d，每天搅拌一次，过滤，弃渣。合并浸出液，混匀，加入冰片、薄荷脑，搅拌，使完全溶解，加60%乙醇至1000 mL，搅匀，即得。制备3批，批号分別为20211001、20211002、20211003），缺黄连、姜黄、醋延胡索、栀子的阴性样品均由医院中药制剂研究中心提供；硅胶G 板（批号：20200901，由青岛海洋化工有限公司生产）；试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 黄连薄层鉴别取本品和缺黄连阴性制剂各1 mL，自然挥干至0.5 mL，分别作为供试品溶液和阴性对照液。另取黄连对照药材0.3 g，加甲醇15 mL，超声30 min，滤过，取滤液作为对照药材溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验［5］，吸取上述三种溶液各3 μL，分别点于同一硅胶G板上，以环己烷-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-水-三乙胺（5∶3. 5∶1∶1. 5∶0. 5∶1）为展开剂，置用浓氨试液预饱和20 min的展开缸内，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视［6］，结果如图1所示。

2.2 姜黄薄层鉴别取本品和缺姜黄阴性制剂各1 mL，自然挥干至0.5 mL，分别作为供试品溶液和阴性对照液。另取姜黄对照药材0.2 g，加无水乙醇20 mL，振摇后放置30 min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加无水乙醇2 mL使溶解，作为对照药材溶液。吸取上述三种溶液各4 μL，分别点于同一硅胶G板上，以氯仿-甲醇-甲酸（96∶4∶0.7）展开，取出，晾干，置365 nm紫外光灯下检视［7-8］，结果如图2所示。

2.3 醋延胡索薄层鉴别取本品和缺延胡索阴性制剂各10 mL，水浴蒸干，分别加甲醇50 mL，超声30 min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加水10 mL使溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚萃取3次，每次10 mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，分别作为供试品溶液和阴性对照液。另取延胡索对照药材1 g，加甲醇50 mL，同法制成对照药材溶液。吸取上述三种溶液各3 μL，分别点于同一硅胶G板上，以甲苯-丙酮（15∶1）展开，取出晾干，置碘缸中约3 min，取出，挥尽板上吸附的碘后，置365 nm紫外光灯下检视［9］145-146，结果如图3。

2.4 栀子薄层鉴别取本品和缺栀子阴性制剂各1 mL，自然挥干至0.5 mL，分别作为供试品溶液和阴性对照液。另取栀子对照药材1 g，加50%甲醇10 mL，超声40 min，滤过，取滤液作为对照药材溶液。分别吸取上述三种溶液各2 μL，点于同一硅胶G 板上，以氯仿-甲醇-冰醋酸-水（5∶2∶0.5∶0.5）为展开系统，预饱和15 min，展距8 cm，取出，晾干，可见光下检视［10］，结果见图4A；再喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰，结果如图4B所示。

3 讨论

质量是医院制剂的根，如果制剂质量出现问题，不仅达不到临床治病的效果，还有可能会适得其反，产生不良后果。因此，做好医院制剂的质量管理就成为重中之重。随着科学技术的发展，检测手段的进步以及《中国药典》质量标准的不断提升，我院部分研究批准较早的医院制剂品种存在质量标准水平较低（如检测指标过低、检查项目少，检测方法专属性较差等），这就制约着医院制剂的健康快速发展。质量标准的不断提高，能有效监测产品的质量，及时发现异常情况，保证配制制剂用于人体的安全、有效和质量可控。因此，为了提升和完善我院医疗机构制剂质量标准，以我院中药制剂研发中心为平台，开展水冬瓜伤科止痛质量标准提升的研究，制定更加科学合理制剂质量标准。

水冬瓜伤科止痛酊全方22味药物，现有质量标准仅有3个定性指标和1个定量指标。根据贵州省医疗机构制剂评审要求，该制剂定性鉴别药味数至少要7味，因此我们需要在3个定性指标的基础上，新建立至少4味药材的薄层鉴别方法。课题组根据前期质量标准研究结果［4］，参照《中国药典》2020年版一部［9］318，343-344及相关文献［11］，对还未进行薄层鉴别研究的君药水冬瓜根皮，臣药栀子、黄连、黄柏，佐药姜黄、醋延胡索、酒续断进行定性鉴别，结果酒续断、水冬瓜根皮供试品溶液分离度欠佳，阴性样品中某些成分存在干扰。黄柏薄层色谱图上相应的位置上虽阴性无干扰，但重现性差。最终建立了文中黄连、姜黄、醋延胡索、栀子4味药材的薄层鉴别方法，符合对产品质量有效控制的要求。

3.1 供试品溶液制备方法考察查阅并分析现行版《中国药典》一部，黄连、姜黄、栀子3味药材供试品溶液所用提取溶剂分别是甲醇、无水乙醇、50%甲醇，与水冬瓜伤科止痛酊所用浸提溶剂60%乙醇极性相差不大，是因为甲醇和乙醇两者结构相似、分子组成仅相差一个亚甲基（-CH2），都是极性较强的有机溶剂，因此制剂中黄连、姜黄、栀子3味药材的供试品溶液制备未做特殊处理，直接取制剂1 mL自然挥干至0.5 mL即可。

3.2 展开剂的选择延胡索的展开剂参照《中国药典》2020年版一部延胡索［9］145-146定性鉴别项下的种类与极性，调整原为甲苯-丙酮（9∶2），现将甲苯-丙酮改为（15∶1），结果色谱分离好，Rf值适中。栀子的展开系统预实验以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（5∶5∶1∶1）为展开剂［9］259，结果供试品溶液色谱斑点模糊不清，不易于鉴别。后参照杨立国等［10］对栀子药材的薄层鉴别方法研究项下的展开条件，结果色谱斑点数清晰，分离度良好。最终确定栀子的展开剂为氯仿-甲醇-冰醋酸-水（5∶2∶0.5∶0.5），预饱和15 min。

3.3 TLC耐用性考察本实验分别考察了不同温度（4 ℃、25 ℃、35 ℃）、不同湿度（18%、58%、88%）对TLC结果的影响，结果供试品在不同温度、不同湿度条件下的色谱行为基本一致，说明文中所用定性鉴别方法耐用性均较好。

参考文献

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［10］杨立国，张英杰，谢佳颖，等.栀子药材的薄层鉴别方法研究［J］.云南中医中药杂志，2015（12）：67-70.