止咳化痰片质量标准研究

李乃智

摘 要：为了确定止咳化痰片的质量标准，现选取已上市的止咳化痰片，在此选样中，其主要的成分有远志、桔梗、贝母、甘草、半夏、连翘等，在此研究中将利用薄层色谱法对选样配方中的几种药材进行鉴别，并通过高效液相色谱法对药材中的橙皮苷的含量进行数据测定，利用检测结果中的内线性、平均回收率及RSD来制定较为准确的质量标准，从而控制止咳化痰片的质量。

关键词：止咳化痰片；质量标准；薄层色谱法；高效液相色谱法

现利用TLC及HPLC对止咳化痰片中的半夏、连翘、甘草进行检测，对药材中橙皮苷的含量进行准确的测定，以下是止咳化痰片质量标准研究的详细方法。

一、仪器与试药

在实验中采用的仪器有Agilent1100型号高效液相色谱仪、定量毛细管、超声波清洗器。选用已上市的某止咳化痰片作为实验产品，并选取半夏、连翘、甘草所用的对照药材，确定药材通过国家药品检定标准。准备硅胶G、硅胶GF254、重蒸水、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

二、方法与结果

1、薄层鉴别

（1）半夏

首先取样止咳化痰片5片，研磨至细粉状，向选样中加入15ml甲醇溶液，进行超声处理，20min后进行过滤，对过滤后的溶液进行蒸干处理，对蒸干所得残渣加入15ml水，保证其得到充分溶解，之后利用乙醚进行提取工作，共两次，每次加如乙醚溶液10ml进行振摇提取，析離出的乙醚层弃用，水层用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，分取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液A；氢氧化钠溶液加盐酸调节pH值为1—2，再用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次10ml，分取正丁醇层，用水洗涤2次，每次10ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液B。另取半夏对照药材1g，加甲醇20ml，超声处理30min，作为对照药材溶液。吸取供试品溶液A1—5μL，对照药材溶液2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸（5：1：0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷磷钼酸试液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，至少显1个相同颜色的主斑点。

（2）甘草

首先选用半夏试验中所得供试品溶液B作为甘草试验中的供试品。取用甘草对照药材1g，向其中加入8ml甲醇溶液，对溶液进行10min的超声处理，在超声处理后对溶液进行过滤，处理后的滤液作为对照溶液进行试验。吸取供试品溶液B2—5μl，对照药材溶液3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（5：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷10%硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显一个相同颜色的主斑点。

（3）连翘苷

选用半夏试验中所得供试品溶液A作为连翘实验中的供试品。取用连翘对照药材0.5g，向其中加入甲醇溶液，保证所制成的对照溶液每1ml中含有连翘苷1mg，作为对照品溶液备用。吸取供试品溶液A10—15μl、对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸（13：2：0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2、含量测定

（1）色谱条件

色谱柱：WatersSymmetryC18色谱柱（4.6mm×150mm，5μm）；检测波长：283nm；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（20：80），流速为1.0ml/min；理论板数以橙皮苷峰计不低于2000。

（2）对照品溶液制备

首先需选用适量的橙皮苷对照品，并对对照品的含量进行精准的称量，之后向其中加入标准为70%的甲醇溶液，制成每1ml含有橙皮苷17μg的溶液，并进行摇匀处理。

（3）供试品溶液制备

精细称量止咳化痰片并进行研磨，准确取用0.5g样品，向其中加入甲醇溶液并进行超声处理，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，上聚酰胺柱吸附，水10ml冲洗，弃去；再用30ml30%甲醇洗脱至50ml量瓶中，用30%甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45μm滤膜过滤，即得。

（4）检测波长选择

对橙皮苷对照品溶液进行光谱检测，可见283nm处均有最大吸收，所以选择283nm作为检测波长。

（5）标准曲线

精密吸取浓度为17.98μg/ml橙皮苷对照品溶液5，10，20μl和浓度为107.88μg/ml对照品溶液10，15μl注入高效液相色谱仪，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线。得回归方程：Y=1.8252X-14.6831，r=0.99998，表明橙皮苷进样量在89.9—1618.2ng内有良好的线性关系。

（6）稳定性

吸取供试品溶液，于0，2，6，12，22h进样，测定峰面积，结果供试品峰面积的RSD为0.11%，说明22h内供试品溶液稳定。

（7）回收率

采用加样回收试验，取同一批样品9份，分3组，分别加入高、中、低3种浓度的橙皮苷对照品溶液，按“（3）”项下方法处理后，依法测定，计算回收率。结果橙皮苷的平均回收率为97.86%，RSD为1.30%（n=9），结果见表1。