活化激酶C受体1、四个半LIM结构域蛋白1在食管鳞状细胞癌中的表达及与患者预后的关系△

乔滨，刘孝民，肖中岳，孙佳春

河南科技大学第一附属医院肿瘤外科，河南 洛阳 471003

食管癌是临床上较为常见的消化系统疾病，多好发于中老年人群。食管癌以食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）最为常见，约占全部食管癌类型的90%[1]。ESCC 发生发展与肿瘤相关基因的异常表达密切相关。化疗是目前临床治疗ESCC 的重要方法之一，但部分患者对化疗反应存在一定异质性，预后亦有很大差异[2]。因此，寻找有效的分子标志物对ESCC 患者对化疗的反应进行预测有重要作用，可为ESCC 的个体化治疗提供指导意见。活化激酶C 受体1（receptor for activated C kinase 1，RACK1）属于细胞质内锚定蛋白，已有研究证实，RACK1 参与了多种肿瘤的发生发展，与临床分期、淋巴结转移等密切相关[3]。四个半LIM 结构域蛋白1（four and a half LIM domains 1，FHL1）则是一种肿瘤抑制因子，可有效抑制肿瘤的发生发展[4]。但目前关于RACK1、FHL1 在局部晚期ESCC 疗效评估及预后预测中的价值仍存在争议。鉴于此，本研究通过回顾性分析局部晚期ESCC 患者的临床资料，探讨RACK1及FHL1 的表达对局部晚期ESCC 化疗疗效及预后的评估价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2015年2月至2021年3月河南科技大学第一附属医院收治的局部晚期ESCC 患者的临床资料。纳入标准：①经手术切除、穿刺活检或穿刺细胞学检查等确诊为ESCC；②年龄﹥18 岁；③既往未接受放疗、化疗；④临床资料完整。排除标准：①过敏体质；②存在意识障碍或精神类疾病；③合并全身感染性疾病。依据纳入和排除标准，本研究共纳入122 例ESCC 患者，其中男68 例，女54 例；年龄41～71 岁，平均（57.23±5.47）岁；临床分期：Ⅲ期64 例，Ⅳ期58 例；肿瘤部位：颈段20 例，胸上段34 例，胸中段53 例，胸下段15 例。本研究经医院伦理委员会批准通过，所有患者均知情同意。

1.2 化疗方法

所有患者均采用紫杉醇联合顺铂同步化疗：第1、8 天，紫杉醇80 mg/m2静脉滴注，第1～3 天，顺铂40 mg/m2静脉滴注，21 天为一个周期，共化疗4 个周期。

1.3 免疫组化法检测RACK1、FHL1 的表达情况

取122 例ESCC 患者的ESCC 组织及距瘤体5 cm 以上的癌旁组织，制成石蜡切片。组织标本脱水，10%甲醛固定，二甲苯透明，常规石蜡包埋，5 μm 连续切片。采用免疫组化法检测RACK1、FHL1 的表达情况。采用RACK1、FHL1 兔抗人单克隆抗体，详细步骤严格遵循说明书，采用磷酸盐缓冲液（phosphate buffered solution，PBS）代替一抗作为阴性对照。

结果判定[5]：RACK1、FHL1 主要定位于细胞核，呈棕色染色判定为阳性。依据染色强度和阳性细胞所占比例进行评分。无着色计0 分，淡黄色染色计1 分，棕黄色染色计2 分，黄褐色染色计3分；无阳性细胞计0 分，阳性细胞所占比例﹤10%计1 分，阳性细胞所占比例10%～50%计2 分，阳性细胞所占比例51%～75%计3 分，阳性细胞所占比例﹥75%计4 分。染色强度评分和阳性细胞所占比例评分相乘，﹤3分判定为阴性，≥3分判定为阳性。

1.4 观察指标和评价标准

①比较ESCC 组织和癌旁组织中RACK1、FHL1 的表达情况。②依据实体瘤疗效评价标准评估两组患者的临床疗效[6]，包括完全缓解（complete response，CR）、部分缓解（partial response，PR）、疾病稳定（stable disease，SD）、疾病进展（progressive disease，PD），将CR+PR+SD判定为有效，PD判定为无效，比较不同临床疗效ESCC患者ESCC组织中RACK1、FHL1 的表达情况。③对所有患者进行为期1年的随访，随访时间截至2022年3月。

1.5 统计学方法

采用SPSS 22.0 软件对所有数据进行统计分析，计量资料以均数±标准差（）表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验；局部晚期ESCC 患者预后的影响因素采用多元Logistic 回归分析。以P﹤0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ESCC 组织和癌旁组织中RACK1、FHL1 表达情况的比较

ESCC 组织中RACK1、FHL1 蛋白阳性表达率均明显低于癌旁组织，差异均有统计学意义（P﹤0.01）。（表1）

表1 ESCC 组织和癌旁组织中RACK1、FHL1 表达情况的比较[n（%）]

2.2 不同临床疗效ESCC 患者ESCC 组织中RACK1、FHL1 表达情况的比较

依据实体瘤疗效评价标准，有效87 例，无效35例，有效ESCC 患者ESCC 组织中RACK1、FHL1 阳性表达率均高于无效患者，差异均有统计学意义（P﹤0.05）。（表2）

表2 不同临床疗效ESCC 患者ESCC 组织中RACK1、FHL1 表达情况的比较[n（%）]

2.3 局部晚期ESCC 患者预后的影响因素分析

至随访结束，122 例ESCC 患者中，死亡26 例，占比21.31%。单因素分析结果显示，年龄、性别、吸烟情况、病变部位均可能与局部晚期ESCC 患者的预后无关（P﹥0.05）；淋巴结转移情况、分化程度、肿瘤直径、RACK1 表达情况、FHL1 表达情况均可能与局部晚期ESCC 患者的预后有关（P﹤0.05）。多因素分析结果显示，淋巴结转移、分化程度为低分化、肿瘤直径≥5 cm、RACK1 阴性表达、FHL1 阴性表达均是局部晚期ESCC 患者预后死亡的独立危险因素（P﹤0.01）。（表3）

表3 局部晚期ESCC 患者预后的影响因素分析

3 讨论

局部晚期ESCC 的恶性程度较高，相关资料显示，局部晚期ESCC 经手术治疗后复发率较高，5年生存率较低[7]。新辅助化疗是在术前进行全身化疗，目的是为早期杀灭微小转移灶并缩小肿瘤体积，从而降低术后复发转移风险。但恶性肿瘤是不断演进与异质化的，相同临床分期给予同样的治疗可能导致预后不一致。故如何准确评估肿瘤生物学行为并据此选择治疗方案，进行疗效及预后评估有重要意义。

组织学和病理学检查是评估诊断肿瘤最客观、最常用的方法，但获取肿瘤组织需要活检，属于有创检查。随着分子生物学的不断进展，已有研究证实，RACK1、FHL1 等分子标志物在ESCC 发生发展中有重要作用[8-9]。RACK1 是定位于人5 号染色体的支架蛋白，属于RACK 家族人员之一，可通过与细胞中多种信号分子结合，参与细胞内多个信号通路的转导。研究显示，RACK1 可影响细胞周期进程、调节肿瘤细胞的增殖能力[10]。研究指出，RACK1 在口腔鳞状细胞癌、肺腺癌等恶性肿瘤中持续高表达，是影响患者预后的不良因素[11]。本研究发现，RACK1 在局部晚期ESCC 患者ESCC 组织中的阳性表达率明显低于癌旁组织，表明RACK1在局部晚期ESCC 中可能发挥抑癌基因的作用，推测RACK1 表达及作用可能具有组织特异性，其在不同肿瘤中可能发挥不同的生物学作用，这可能与RACK1 参与调节多种信号通路有关。

FHL1是FHL家族成员之一，定位于Xq26.3，长度2524 bp，由7 个外显子和6 个内含子组成。既往已有研究显示，FHL1 在肺癌、胃癌等多种恶性肿瘤中低表达，参与细胞信号转导及基因转录调控[12]。本研究中，FHL1在局部晚期ESCC患者ESCC组织中的阳性表达率明显低于癌旁组织，与王哲彦等[13]的研究结果相符。提示FHL1 可能是一种保护性蛋白，其表达下调可能抑制肿瘤细胞增殖。

本研究比较不同临床疗效局部晚期ESCC 患者ESCC 组织中RACK1、FHL1 表达情况发现，有效ESCC 患者ESCC 组织中RACK1、FHL1 阳性表达率均高于无效患者，差异均有统计学意义（P﹤0.05）。既往研究发现，淋巴结转移、肿瘤分化程度等均是影响肿瘤患者预后的危险因素[14]。本研究多因素分析结果显示，淋巴结转移、分化程度为低分化、肿瘤直径≥5 cm、RACK1 阴性表达、FHL1 阴性表达均是局部晚期ESCC 患者预后死亡的独立危险因素（P﹤0.01），但这些因素缺乏特异性。相关报道认为，RACK1、FHL1 表达下调可能促进肿瘤细胞增殖，影响患者的预后[15]。本研究中，RACK1 阴性表达、FHL1 阴性表达均是影响ESCC患者预后的独立危险因素，表明RACK1、FHL1 可作为评估局部晚期ESCC 患者化疗疗效的辅助指标之一，同时提示RACK1、FHL1 表达与局部晚期ESCC 患者预后有关，阴性表达患者预后不良的可能性更高。

综上所述，RACK1、FHL1 在局部晚期ESCC 组织中阳性表达率较低，可作为评估紫杉醇联合顺铂化疗疗效、患者预后的可靠指标。本研究不足之处在于样本量较少、随访时间较短，仍需进一步扩大样本量进行深入研究。