慢性萎缩性胃炎患者血清和胃黏膜组织中hsamiR-122-5p 的表达及临床意义

黄小玲 林尤冠 林道壮

慢性萎缩性胃炎（CAG）是一种与幽门螺杆菌（Hp）感染密切相关的、伴胃黏膜上皮及腺体萎缩的胃部疾病。该病恶变率较低，但若患者病程较长、病情较重或存在胃癌相关高危因素，其恶变率可达50%[1-2]。胃镜和病理检查是目前诊断CAG 的主要手段[3]。然而，有研究报道胃镜检查对CAG 的检出率仅为17.7%，病理检查对CAG 的检出率为25.8%，这提示胃镜和病理检查均存在检出率较低和漏诊率较高的问题[4-5]。因此，亟待探寻更多的检测手段以准确诊断CAG。Liu 等[6]分析了CAG 与慢性非萎缩性胃炎患者血清外泌体中miRNA 表达谱的差异，发现CAG 患者血清外泌体中hsa-miR-122-5p 和hsa-miR-122-3p 的表达均上调，但hsa-miR-122-3p 的表达不稳定，这提示血清外泌体中的hsa-miR-122-5p 有潜力成为CAG 诊断的生物标志物。研究表明，hsa-miR-122-5p 与胃癌的早期病变有关，且可有效区分萎缩性胃炎与胃癌[7]。本研究通过测定CAG 患者血清和胃黏膜组织中hsa-miR-122-5p 的表达水平，探究其对CAG 的诊断价值及与患者病理特征的相关性，以期为CAG 的临床诊断和病情评估提供参考。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选 择2019 年12 月 至2021 年6 月 琼 海 市 中 医院消化内科收治的60 例CAG 患者纳入研究组，另选择同期在该院接受胃镜检查的60 名健康体检者纳入对照组。研究组中男性34 例，女性26例，年龄25～69 岁，平均年龄为（45.78±10.23）岁，平均BMI 为（22.14±1.68） kg/m2；根据胃黏膜萎缩程度划分，轻度16例，中度26例，重度18 例；根据肠上皮化生程度划分，无肠上皮化生21 例，轻度19 例，中度12 例，重度8 例；根据异型增生程度划分，无异型增生43 例，轻度10 例，中度4 例，重度3 例。对照组中男性34 人，女性26 人，年龄24～70 岁，平均年龄为（46.11±10.26）岁，平均BMI 为（22.21±1.73）kg/m2。2 组的性别、年龄、BMI 差异均无统计学意义（P均＞0.05），具有可比性。所有受试者均签署知情同意书，本研究获得医院医学伦理委员会批准。

1.2 纳入和排除标准

研究组的纳入标准：（1）年龄为18～80 岁；（2）符合《中国慢性胃炎共识意见（2012 年，上海）》[8]中的诊断标准，并经胃镜及病理检查确诊；（3）入组前未接受CAG 相关治疗；（4）意识清楚，无认知功能障碍。排除标准：（1）合并消化道溃疡；（2）合并其他系统严重疾病或恶性肿瘤；（3）有抗生素等药物滥用史；（4）妊娠期或哺乳期妇女。

对照组的纳入标准：（1）年龄为18～80 岁；（2）胃镜及病理检查均显示胃黏膜无异常。排除标准：（1）近3 个月内有抗炎药物、胃药等影响本次检验结果的治疗史；（2）其余同研究组。

1.3 样本收集和处理

血清样本：抽取受试者清晨空腹肘静脉血5 mL，1 500 r/min 离心10 min，分离血清，-80 ℃冰箱保存，待测。胃黏膜组织样本：胃镜下取受试者的胃黏膜组织，-80 ℃冰箱保存，待测。

1.4 血清和胃黏膜组织中hsa-miR-122-5p 的表达水平检测

采用实时荧光定量PCR 法测定血清和胃黏膜组织中hsa-miR-122-5p 的表达水平。采用TRIzol法（试剂盒购自上海康朗生物科技有限公司，货号KL058）提取血清和胃黏膜组织的总RNA，使用NanoDropTMOne 紫外-可见光分光光度计（购自美国Thermo Fisher 公司）测定RNA 的浓度和纯度。按照BioSciTMWitEnzy First-Strand cDNA Synthesis Kit试剂盒说明书操作，合成cDNA。应用Primer 3.0软件设计引物，引物序列见表1。PCR 反应条件：95 ℃预变性5 min；之后95 ℃变性10 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共35 个循环。以U6 作为内参，采用2-△△Ct法计算血清和胃黏膜组织中hsa-miR-122-5p 的相对表达量。

表1 引物序列

1.5 统计学方法

应用SPSS 20.0 软件对数据进行统计学分析。符合正态分布的计量资料以均数±标准差（±s）表示，2 组间比较采用独立样本t检验；多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用SNK-q检验。计数资料以例（%）表示，组间比较采用卡方检验。等级资料比较采用Mann-WhitneyU秩和检验。采用Pearson 相关系数法分析CAG 患者血清和胃黏膜组织中hsa-miR-122-5p 的表达水平与病理特征的相关性。采用ROC 曲线分析CAG 患者血清和胃黏膜组织中hsa-miR-122-5p 的表达水平对疾病的诊断效能。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2 组血清和胃黏膜组织中hsa-miR-122-5p 的表达水平比较

如图1 所示，与对照组比较，研究组血清和胃黏膜组织中hsa-miR-122-5p的表达水平均显著升高，差异均有统计学意义（P均＜0.05）。

图1 2 组血清和胃黏膜组织中hsa-miR-122-5p 的表达水平比较

2.2 血清和胃黏膜组织中hsa-miR-122-5p 的表达水平对CAG 的诊断价值分析

ROC 曲线分析结果显示，血清hsa-miR-122-5p的表达水平诊断CAG 的敏感度为77.59%，特异度为79.74%，ROC 曲线下面积（AUC）为0.687；胃黏膜组织中hsa-miR-122-5p 的表达水平诊断CAG的敏感度为71.24%，特异度为69.98%，AUC为0.623；2 项联合检测诊断CAG 的敏感度、特异度和AUC分别为79.83%、80.11%和0.695。见图2。

图2 CAG 患者血清和胃黏膜组织中hsa-miR-122-5p 的表达水平诊断CAG 的ROC 曲线

2.3 不同病理特征患者的血清和胃黏膜组织中hsa-miR-122-5p 的表达水平比较

由表2 可知，随着CAG 患者胃黏膜萎缩程度、肠上皮化生程度及异型增生程度加重，其血清和胃黏膜组织中hsa-miR-122-5p 的表达水平均显著升高，差异均有统计学意义（P均＜0.05）。

表2 不同病理特征患者的血清和胃黏膜组织中hsa-miR-122-5p 的表达水平比较

2.4 CAG 患者血清和胃黏膜组织中hsa-miR-122-5p 的表达水平与病理特征的相关性分析

Pearson 相关性分析结果显示，CAG 患者血清和胃黏膜组织中hsa-miR-122-5p 的表达水平与其胃黏膜萎缩程度、肠上皮化生程度及异型增生程度均呈显著正相关（P均＜0.05）。见表3。

表3 CAG 患者血清和胃黏膜组织中hsa-miR-122-5p 的表达水平与病理特征的相关性分析

3 讨论

CAG 为消化内科常见疾病，且被认为是一种胃癌前病变[9]。CAG 发病机制复杂，普遍认为是由多因素共同作用所致，这一特点为该病的诊断和治疗带来困难[10]。因受多种因素影响，故胃镜检查和病理检查诊断CAG 的敏感度均较低，且其均为侵入性检查，患者依从性较低[11]。因此，亟待寻求新的无创诊断方法，以提高诊断CAG 的准确率，并减轻患者痛苦。

研究显示，部分miRNA 的异常表达参与了胃黏膜损伤过程，有可能成为鉴别诊断和病理分级的重要参考指标[12]。You 等[13]在CAG 脾气虚证患者白细胞和血清中发现了一种特异性miRNA——hsa-miR-122-5p，其介导的白细胞特征和功能的基因调控可能是CAG 的重要发病机制。本研究结果发现，与健康人群比较，CAG 患者血清和胃黏膜组织中hsa-miR-122-5p 表达上调，这与以往的研究结果相符[6,13]。ROC 曲线分析结果显示，CAG 患者血清和胃黏膜组织中hsa-miR-122-5p 的表达水平诊断CAG 的AUC 分别为0.687、0.623（均＞0.5），且联合检测诊断CAG 的AUC 为0.695，这提示hsamiR-122-5p 的表达水平可为CAG 的诊断提供一定参考，且血清和胃黏膜组织联合检测有助于提高诊断准确率。因胃黏膜组织的获取需通过胃镜检查，属于有创性检查，故临床可根据实际情况进行选择。Xu 等[14]的研究发现，miR-122-5p 在胃癌组织和细胞中表达均显著下调，并可促进胃癌细胞的迁移和侵袭。Liu 等[6]的研究发现，hsa-miR-122-5p 在CAG 患者血清中表达上调，且其表达水平可随腺体萎缩程度加重而升高。本研究结果显示，随着CAG 患者胃黏膜萎缩程度、肠上皮化生程度及异型增生程度加重，其血清和胃黏膜组织中hsa-miR-122-5p 的表达水平显著升高，这提示hsa-miR-122-5p 可能参与了CAG 的发生和发展过程，并可能成为该疾病临床诊断和病情评估的重要生物标志物，其机制可能与调控血管内皮生长因子及其受体表达有关[15-16]。

综上所述，CAG 患者血清和胃黏膜组织中hsa-miR-122-5p 表达上调，其可能参与了CAG 的发生和发展过程，并有可能成为该疾病临床诊断和病情评估的新指标。临床可根据实际情况制定诊疗方案，以提高诊断CAG 的准确率。本研究尚存在不足之处，如未探讨不同中医证型CAG 患者血清和胃黏膜组织中hsa-miR-122-5p 的表达水平是否存在差异，且本研究的样本量较小，故需在今后研究中扩大样本量，进一步探讨其在疾病诊断和病情评估中的价值。