白带净胶囊质量标准研究

梅婕,闫海霞,傅欣彤,杜小伟△ （1.北京市药品检验研究院（北京市疫苗检验中心）;2.国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室;3.中药成分分析与生物评价北京市重点实验室 北京 102206）

白带净胶囊是现代临床外用（阴道用）中成药，具燥湿、止带、杀虫的功效。用于湿热蕴结型带下证。由白矾、滑石、雄黄、硼砂、儿茶、冰片六味中药组成。该品种现行标准混乱，两个标准分别为《卫生部药品标准》新药转正标准第四十一册颁布件（2002）国药标字Z-189号，标准号WS3-369（Z-048）-2002（Z），生产单位为A公司；国家食品药品监督管理局国家标准颁布件（2015）国药标字Z-0502号，标准号WS3-369（Z-048）-2002Z-1，生产单位为B公司。两份标准检测项目一致。检测项主要涉及显色反应、沉淀反应、冰片的薄层色谱鉴别、三氧化二砷、重金属、溶散时限检查等，并收载有滴定法测定白矾中硫酸铝钾的含量。本研究针对易挥发贵细药材冰片、儿茶等展开研究，以便较好地控制产品质量。

1 仪器、材料及样品

1.1 材料、仪器 硅胶G薄层板：MERCK-预制板TLC Silica gel 60，批号HX117107、MN-SIL G-25；批号412351、烟台化工研究所。

仪器：Agilent7890B气相色谱仪、7683B自动进样器、FID检测器、DTC-27J超声波清洗器，湖北鼎泰恒胜科技设备有限公司生产。

对照品：樟脑（批号110747-200507，纯度99%）；龙脑（批号110881-200706，纯度99.2%）；异龙脑（批号1512-200207，纯度99%）；儿茶（批号121180-200604）；来源：中国食品药品检定研究院。

试液：乙酸乙酯、甲醇、乙醇为分析纯，来源：国药集团化学试剂有限公司。水为超纯水，来源：自制。

1.2 样品 样品来自于同一企业，批号：A、B、C、D。

2 方法与结果

2.1 儿茶薄层色谱鉴别 此方法为文献已收载方法[1-2]。取本品内容物2.5g，加乙醚30ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使其溶解，作为供试品溶液。另取儿茶对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液。按处方中药味比例，配制不含儿茶的群药，按其制法制成儿茶阴性样品制剂，按照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5-10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（30∶25∶4）为展开剂展开，展距15cm，取出，晾干，喷以3%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。实验结果表明，薄层色谱斑点清晰，重现性较好，空白无干扰。薄层色谱图见图1。

图1 儿茶薄层色谱图（温度：25℃，湿度：20%）。1.儿茶阴性样品；2-4.白带净胶囊样品；5.儿茶对照药材

2.2 冰片含量及樟脑限量检查 前期阅读资料[3-7]，樟脑、龙脑和异龙脑可以在同一色谱条件下分离检测，故在此条件下进行实验研究。

2.2.1 色谱条件 采用Agilent J＆W scientific DB-NOWAX（30m×0.25mm，0.5μm 123-7033）聚乙二醇毛细管柱；柱温为130℃；分流进样，分流比6∶1；FID检测器；进样口温度220℃；检测器温度230℃。理论板数按龙脑峰计算应不低于5000，各色谱峰与其相邻色谱峰分离度均大于1.5。

2.2.2 对照品溶液的制备 取龙脑、异龙脑对照品适量，精密称定，加乙酸乙酯制成每1ml含龙脑0.6mg、含异龙脑0.3mg的混合溶液，即得。取樟脑对照品适量，精密称定，加乙酸乙酯制成每1ml含20μg的溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备 取本品内容物，混匀，研细，取0.45g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙酸乙酯25ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。

2.2.4 樟脑限量检查 本品每粒理论含冰片25mg，按照《中国药典》2020年版冰片（合成龙脑）项下规定，冰片（合成龙脑）中含樟脑（C10H16O）不得过0.50%计算，则樟脑含量理论不得超过0.13mg/粒（即0.278mg/g）。

将樟脑对照品稀释，取10.748mg，用乙酸乙酯稀释至25ml，再稀释500倍，进样1μl，注入色谱仪分析，以信噪比法测定樟脑定量限为0.86μg/ml。再取3ml，置10ml量瓶，用乙酸乙酯稀释至刻度，精密量取1μl，注入色谱仪分析，以信噪比法测定检出限为0.287μg/ml。

2.2.5 线性关系考察 取浓度为每1ml中含异龙脑247.4μg、龙脑303.2μg的混合对照品溶液、每1ml中含樟脑10.748μg的对照品溶液，分别吸取0.1μl、0.2μl、0.5μl、1μl、2μl、5μl，注入气相色谱仪，记录峰面积，以各对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。结果异龙脑、龙脑进样量分别在2.474×10-2-1.237μg、3.032×10-2-1.516μg范围内线性关系良好，回归方程分别为Y=1.848×103X+4.099×101（相关系数γ=0.9997）、Y=1.852×103X+6.350×101（相关系数γ=0.9998）；樟脑在1.075×10-3-5.374×10-2μg范围内线性关系良好，回归方程分别为Y=1.815×103X +2.493×101（相关系数γ=0.9997 ），见表1。

表1 3种对照品的回归方程和线性范围

2.2.6 精密度考察 取同一批样品，于配制后连续进样6次，测定峰面积，结果樟脑、异龙脑、龙脑三者RSD分别为0.91%、0.68%、0.65%，表明仪器精密度良好。

2.2.7 专属性考察 自配不含冰片的空白制剂，按供试品溶液同法制成空白溶液，依法测定，结果显示冰片阴性溶液在与龙脑、异龙脑、樟脑相应的位置上未见色谱峰，表明阴性无干扰，本方法测定专属性较好，色谱图见图2。

图2 龙脑对照品溶液/A、异龙脑对照品溶液/B、樟脑对照品溶液/C、龙脑异龙脑混合对照品溶液/D、无冰片样品溶液/E、白带净样品溶液/F。1-龙脑、2-异龙脑、3-樟脑

2.2.8 稳定性试验 取同一批样品，于配制后放置0小时、4小时、8小时、16小时、24小时测定峰面积，结果表明，供试品溶液在24小时内测定峰面积，结果樟脑、异龙脑、龙脑三者RSD分别为0.92%、0.87%、0.79%，峰面积基本稳定。表明供试品溶液在24小时内测定，峰面积基本稳定。

2.2.9 重复性试验 取同一批样品，按照2.2.3供试品溶液的制备，2.2.1色谱条件进行测定，樟脑、异龙脑、龙脑的平均含量分别为1.191mg·g-1、17.01mg·g-1、28.95mg·g-1，RSD 分别为0.79%、1.05%、1.02%。

2.2.10 回收率考察（准确度） 采用加样回收法，取已知含量的同一批样品（樟脑含量为1.191mg/g；异龙脑含量为17.01mg/g，龙脑含量为28.95mg/g），研细，分别取约0.45g、0.25g，0.12g，精密加入混合对照品溶液的乙酸乙酯溶液，按照2.2.3供试品溶液的制备，2.2.1色谱条件进行测定，结果见表2。

表2 龙脑、异龙脑、樟脑回收率测定结果

2.2.11 本品冰片投料量为25mg/粒，根据上述测定结果，结合《中国药典》2020年版规定，龙脑含量不得少于55.0%。以投料理论值的80.0%-120.0%制定本品冰片含量限度，故暂定本品每粒含冰片以龙脑（C10H18O）和异龙脑（C10H18O）的总量计，应为20-30mg；且龙脑（C10H18O）含量应为11-16.5mg。

3 讨论

3.1 提取溶剂的选择 试验考察乙醚、乙醇、乙酸乙酯作为溶剂，结果表明乙醇在提取异龙脑时，与乙酸乙酯和乙醚提取效果有明显差异，乙酸乙酯和乙醚提取三种成分效果相近，但考虑到操作性及乙醚的安全性，故选择乙酸乙酯作为测定样品的提取溶剂。

3.2 提取方法及提取时间的选择 试验考察提取方法分别采用加热回流提取20分钟，超声提取10分钟、15分钟、20分钟、30分钟、40分钟。结果表明超声处理20分钟即可将三种成分提取完全，故选择超声处理20分钟作为测定样品的提取方法。

3.3 中国药典2020版一部中对儿茶的薄层鉴别中，选用的为纤维素板，在日常检验中使用频率不高，故在制定此标准时选择了使用更普遍的硅胶G板，在重现性考察、专属性考察和加速试验中结果均良好。

3.4 由于冰片易挥发，在供试品取样过程中应快速，避免高温，减少取样过程中因为人为原因造成的误差。

3.5 樟脑是冰片合成过程中的产物，文献报道樟脑具有毒性，表现在对卵巢、睾丸、神经、肝脏、心脏及胎儿和孕妇中，对肾脏泌尿系统有潜在毒性和较小遗传毒性[8]。白带净胶囊为阴道妇科用药，故更需要对樟脑含量进行严格限制。