超高效液相色谱串联质谱检测畜禽肉和鲜蛋中磺胺类药物残留研究

向 俊，唐万里，胡玲俐，陈同强，荆辉华

（湖南省食品质量监督检验研究院，湖南长沙 410111）

磺胺类药物因其效果好、毒性低、价格便宜，在兽医临床与畜牧业中得到大量应用。此类药物的半衰期较长，人类经各种渠道摄入后均会在体内逐渐蓄积，威胁人类健康。我国要求此类药物在禽肉中的允许标准为100 µg·kg-1，鲜蛋中不得检出[1]。本文采用高灵敏度、高通量的超高效液相色谱-质谱联用测定方式，对禽肉及鲜蛋中残存的磺胺类药物进行更准确的研究分析。

1 材料与方法

1.1 材料与设备

1.1.1 材料与试剂

10 种磺胺类标准品，纯度≥99%；乙腈，色谱纯；正己烷，色谱纯；乙酸乙酯，分析纯；正丙醇，分析纯。

1.1.2 仪器设备

液相系统：SHIMADZU Nexera X2；质谱系统：AB SCIEX QTRAP®4500。

1.2 方法

1.2.1 标准溶液的配制

逐一取以上标准品各10 mg，将其放到100 mL容量瓶内，选择乙腈进行溶解，然后定容到相应刻度，摇匀，制备出100 µg·mL-1的储备液，将其放置在冰箱存储，温度设为4 。用乙腈来稀释标准储备液，使其成为实验所需的浓度，待用。

1.2.2 液相条件

色谱柱：Hypersil GOLD（100mm×2.1 mm，3 µm）；流动相：A 为0.1%甲酸，5 mmol·L-1乙酸铵水溶液，B 为甲醇溶液；柱温：35 ；样品温度：15 ；进样量：5 µL。洗脱梯度为0 ～2.0 min，5% B；2.0 ～4.0 min，5% B 15% B；4.0 ～5.0 min，15% B；5.0 ～8.0 min，15% B 40% B；8.0 ～10.0 min，40% B 95% B；10.0 ～16.0 min，95% B；16.0 ～16.5 min，95% B 5% B；16.5 ～20.0 min，5% B。

1.2.3 质谱条件

系统：AB SCIEX QTRAP®4500；离子源：ESI+；采集方式：MRM；离子化电压：5.5 kV；离子源温度：450 °C；喷雾气40 psi；辅助加热气40 psi；气帘气25 psi。

1.2.4 样品处理

取2 g 样品，将其放到玻璃研钵内，然后取约6 g（需精确到0.01 g）C18填料加到试验样品中，通过玻璃杵小心研磨，让填料与样品能均匀混合。取50 mL具塞螺旋盖聚四氟乙烯离心管用于装上述混合物，然后按100 ∶3 的比例制成乙腈-水溶液，取25 mL此溶液加入上述离心管内，采用涡旋振荡60 s，再将离心管置于家用微波炉内，在光波模式下进行微波照射30 s，用3 000 r·min-1进行离心300 s，再把乙腈层转移至100 mL 的棕色分液漏斗内。对于离心后的沉淀，重新添加乙腈25 mL，再摇匀，在微波辅助下提取30 s，按3 000 r·min-1进行离心处理300 s，再将乙腈提取液进行合并，等待净化。取25 mL 乙腈饱和正己烷溶液加入提取液内，振荡处理300 s，再把底层的乙腈溶液转移至150 mL 棕色鸡心瓶内，并添加正丙醇10 mL，借助旋转蒸发仪在45 的水浴内进行减压蒸发处理，直到快干，通过氮气流将其吹干[2]。取1 mL 提前制备的1 ∶1 乙腈-水溶液，将其加入后运用超声溶解残渣30 s，把溶解液转移到10 mL 棕色离心管内，加入乙腈饱和的正己烷0.5 mL，涡旋处理120 s，按3 000 r·min-1进行离心300 s，去除正己烷溶液，将底层乙腈-水溶液用0.22 µm 微孔滤膜过滤后待用，供超高效液相色谱串联质谱测定。

2 结果与分析

2.1 色谱条件优化

2.1.1 质谱条件

将磺胺药物都逐一制作为标准溶液，浓度为100 µg·L-1，无需通过色谱柱，直接选择质谱进样，选择ESI+离子化模式，开展母离子与子离子扫描，对二级碎片离子数据进行优化，得到定性离子以及定量离子最合理的质谱条件（表1）[3-4]。

表1 10 种磺胺类药物质谱参数

2.1.2 液相条件

本次研究中就甲醇-水、甲醇-0.1%甲酸水、甲醇-0.1%甲酸，5 mmol·L-1乙酸铵水对各化合物的色谱峰及离子化的影响进行了分析比较。结果显示，磺胺类药物结构中包括氨基，表现为弱碱特性，在ESI+离子化条件下磺胺类化合物在碱性或中性的流动相体系中形成的色谱峰形不好，但将相关比例的甲酸添加到流动相中可大幅提升离子化效率，特别是添加少量的乙酸铵可兼顾到不同极性磺胺类药物的离子化速度[5]。因此，确定流动相为甲醇-0.1%甲酸，5 mmol·L-1乙酸铵水，磺胺类药物的峰形理想，也较高。

2.2 线性范围及方法的检出限

对1.2.1项下磺胺类标准溶液逐一精准量取少量，再将空白禽肉与空白鲜蛋基质作为溶剂，空白禽肉选择鸡肉为代表，稀释制备成系列浓度为10.0 ng·mL-1、20.0 ng·mL-1、50.0 ng·mL-1、100.0 ng·mL-1、200.0 ng·mL-1和500.0 ng·mL-1的相关标准溶液，根据以上色谱条件进行研究，横纵坐标分别是浓度与峰面积，开展线性回归，得各磺胺类药物线性回归方程，结果见表2，这些药物在10.0 ～500.0 ng·mL-1线性关系良好，相关系数均大于0.99。根据信噪比S/N=10 得出这些药物的定量限为50 µg·kg-1。

表2 10 种磺胺类药物的线性方程、相关系数、线性范围及定量限

2.3 回收率及精密度

称取空白畜禽肉（以鸡肉为代表）和鲜蛋样品各5.0 g，添加3 种不同浓度（20 µg·kg-1、100 µg·kg-1、200 µg·kg-1)的10 种磺胺类药物，每个浓度6 份，按1.2.4 项下进行前处理，进样分析，得出这些药物回收率以及精密度，结果见表3。10 种磺胺类药物在畜禽肉和鲜蛋中的回收率分别为80.1%～96.4%和79.6% ～98.7%，RSD 分 别 为3.3% ～9.2% 和2.4%～9.0%，表明本方法回收率和精密度良好，可满足试样的分析要求。

表3 10 种磺胺类药物在畜禽肉和鲜蛋中的回收率及精密度（单位：%）

3 结论

综上，运用液相色谱-串联质谱法快速检测畜禽肉和鲜蛋中残存多磺胺类药物的方法，精密度好、准确度高，回收率好，可对畜禽肉和鲜蛋中的磺胺类药物残留进行定性和定量分析，满足对大批量多磺胺类药物残留检测的需求。