动物安乐死几种方法的比较研究

张馨丹，郑春美，隋 璐，马志强

1.延吉市依兰镇综合服务中心，吉林延吉 133000；2.延吉市农业综合行政执法大队，吉林延吉133000；3.延吉市农业技术推广中心，吉林延吉 133000；4.延吉市畜牧站，吉林延吉 133000

动物安乐死的方法分为两大类，化学性方法与物理性方法，其中化学方法又分为吸入性药剂方法和非吸入性药剂方法。安乐死时最好先抑制动物的中枢神经而使其失去知觉，解除疼痛感。因此，首选为食用过量的化学性麻醉药剂。动物一旦被施予深度麻醉，之后使用的安乐死方法选择性较多，也较人道。如因科学研究所需无法使用麻醉剂，则使用物理性安乐死方法。

吸入性药剂：常见药物如一氧化碳、二氧化碳、乙醚、氮气等麻醉药剂，通常借助气麻机或可透视的密闭容器对体重低于7 kg 的小型哺乳动物与鸟类实施安乐死。大部分的吸入性药剂对人体有害，因此需在通风良好场所执行。

非吸入性药剂：非吸入性药剂多数为注射性药物，此类药剂有多种投药方法，但静脉注射是最佳选择。巴比妥盐及其衍生物戊巴比妥钠目前广泛应用于大部分动物的安乐死。

物理性方法：包括颈椎脱臼、断头、放血、枪击、电击等方法。

本次试验通过采用非吸入性药剂方法，观察动物使用不同药剂进行安乐死后的表现，选择相对较好的药物方法，从而为基层工作者提供一定的理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验动物

由农学院基础兽医实验室提供的试验小鼠15只，延吉市兴安大集购买的2 月龄仔兔6 只。

1.1.2 试验药品

盐酸氯氨酮注射液、10%KCl 注射液、3%戊巴比妥钠注射液、饱和硫酸镁注射液、生理盐水、75%酒精棉球。

1.1.3 试验器材

1 mL 注射器20 个、5 mL 注射器10 个、动物保定架、打毛剪、镊子。

1.2 试验方法

将实验小鼠随机分为3 组,每组5 只，实验仔兔随机分为3 组,每组2 只。

1.2.1 KCl-氯氨酮法

1.2.1.1 小鼠试验。由于注射KCl 注射液会使钾离子浓度突然升高而使动物感到不适，出现抽搐、挣扎等现象，因而需将试验动物进行预麻醉：保定好小鼠，用酒精棉球擦拭小鼠尾部，使用1 mL 注射器抽取1%盐酸氯氨酮注射液以5 mL/kg 对试验小鼠进行尾静脉注射。待充分麻醉后再用1 mL 注射液抽取10%的KCl 注射液以150 mg/kg 快速尾静脉注射，药品注入后，立即将小鼠从保定架内取出，对小鼠进行观察记录。

1.2.1.2 仔兔试验。同样先将试验仔兔进行预麻醉：保定好试验仔兔，对仔兔的耳缘静脉处进行剪毛，再用酒精棉球擦拭试验仔兔耳缘静脉处，使用1 mL注射器抽取盐酸氯氨酮注射液5 mL/kg 对试验仔兔进行耳缘静脉注射。充分麻醉后再用5 mL 注射液抽取10%的KCl 注射液以150 mg/kg 快速对试验仔兔进行耳缘静脉注射，药品注入后，立即将试验仔兔从保定架内取出，对试验仔兔进行观察并记录。

1.2.2 戊巴比妥钠法

1.2.2.1 小鼠试验。保定好小鼠，用酒精棉球擦拭小鼠尾部，使用1 mL 注射器抽取以100 mg/kg 戊巴比妥钠配制成的3%戊巴比妥钠药液，对试验小鼠进行尾静脉注射（戊巴比妥钠药液配比为1%～3%，为使试验效果明显，本试验使用3%戊巴比妥钠药液），药品注入后，立即将小鼠从保定架中取出，对小鼠进行观察并记录。

1.2.2.2 仔兔试验。使用保定架对试验用仔兔进行保定，对仔兔的耳缘静脉处进行剪毛，再用酒精棉球擦拭试验仔兔耳缘静脉处，使用5 mL 注射器抽取以100 mg/kg 戊巴比妥钠配制成的3%戊巴比妥钠药液对试验仔兔进行耳缘静脉注射（戊巴比妥钠药液配比为1%～3%，为使试验效果明显，本试验使用3%戊巴比妥钠药液），药品注入后，立即将试验仔兔从保定架中取出，进行观察并记录。

1.2.3 饱和硫酸镁法

1.2.3.1 小鼠试验。保定好小鼠，用酒精棉球擦拭小鼠尾部，使用1 mL 注射器抽取饱和硫酸镁注射液以150 mg/kg 快速尾静脉注射，药品注入后，立即将 小鼠从保定架中取出，对小鼠进行观察并记录。

1.2.3.2 仔兔试验。保定好仔兔，对仔兔的耳缘静脉处进行剪毛，再用酒精棉球擦拭仔兔的耳缘静脉，使用5 mL 注射器抽取饱和硫酸镁注射液150 mg/kg快速耳缘静脉注射，药品注入后，立即将小鼠从保定架中放开，对仔兔进行观察并记录。

2 结果

2.1 KCl-氯氨酮方法

注射盐酸氯氨酮注射液30 s 后，试验小鼠进入外科麻醉期，此时小鼠由兴奋转为安静，意识消失，痛觉消失，呼吸变慢，瞳孔缩小，注射KCl 注射液10 min 后，小鼠抽搐并停止呼吸但仍有心跳。11 min 后小鼠心跳停止，小鼠死亡。

而仔兔注射盐酸氯氨酮注射液50 s 后，试验仔兔进入外科麻醉期，此时仔兔变得安静，进入麻醉期，意识消失，痛觉消失，呼吸由不规则变为规则，角膜充血，注射KCl 注射液15 min 后，仔兔抽搐并停止呼吸但仍有心跳，18 min 后心跳停止，死亡。

2.2 戊巴比妥钠法

向小鼠尾静脉注入3%戊巴比妥钠药液，3 s 后小鼠在睡眠中停止呼吸与心跳，小鼠死亡。过程中没有出现抽搐、歪头、挣扎等不适症状。

而向仔兔耳缘静脉正确注入3%戊巴比妥钠药液，10 s 后仔兔在睡眠中停止呼吸与心跳，死亡。药品注射后没有出现抽搐、歪头、挣扎、鸣叫等不适症状。

2.3 饱和硫酸镁法

向小鼠尾静脉注入饱和硫酸镁注射液，5 s 后小鼠呼吸和心跳停止并死亡。注射药品后出现轻微的抽搐、挣扎、歪头等症状。

向仔兔耳缘静脉正确注入饱和硫酸镁注射液，20 s 后仔兔呼吸和心跳停止、死亡。过程中伴随着轻微的抽搐、歪头、挣扎现象，无明显不适。

3 讨论

3.1 对试验结果的分析

试验中试验小鼠与仔兔的快速死亡可能与试验动物的种类与给药途径有关。本试验所选试验动物的体积相对较小，较于其它动物药物的作用时间较短。试验中对试验动物均采取静脉注射，药物直接进入血液循环，且试验所使用的药品剂量均为大剂量，因而导致试验动物的快速死亡。

试验中戊巴比妥钠方法使动物的死亡最平稳且时间最短，这可能是与试验材料的选取有关。本试验只选用了小鼠与仔兔，一定程度上影响试验结果。也可能与戊巴比妥钠常用于处死鼠和兔、不同动物的麻醉特点不同有关。试验中KCl 注射液对动物刺激较大，可能是KCl 直接作用于动物神经系统，造成动物呼吸抑制(暂停)后才失去意识,因此动物在无法转动后亦遭受一段时间的痛苦和压迫，预先麻醉能减缓动物的痛苦。

3.2 本试验的临床意义

通过本次试验研究，可以清楚地比较出多种安乐死方法中效果相对较好的一种。为避免动物实施安乐死时产生痛苦做出贡献，本次试验中各种药剂作用试验动物产生的效果可以为相关研究提供数据，对动物安乐死方法的研究具有重要意义。

3.3 试验动物的死亡时期

动物因麻醉而死亡的时期分为四期：镇痛期、兴奋期、外科麻醉期、延髓麻痹期。临床一般在外科麻醉期进行手术。第一期-镇痛期（随意运动期）：动物静卧，定向力消失，意识模糊，痛觉迟钝，呼吸正常，眼球位置不固定，瞳孔无变化，角膜反射存在，骨骼肌张力正常，此期大约持续7 min；第二期-兴奋期（不随意运动期）：动物不随意运动性兴奋，意识模糊，几乎全部消失，痛觉几乎全部消失，呼吸加深，极不规则，眼球震颤，瞳孔散大，角膜反射仍然存在，骨骼肌张力收缩，有明显的吞咽动作随后呕吐，此期大约持续5 min；第三期-外科麻醉期：动物由兴奋转为安静，意识消失，痛觉消失，呼吸变慢，由不规则变为规则，眼球由震颤到固定，瞳孔缩小，角膜反射仍然存在，骨骼肌张力松弛，舌头伸出口外，此期大约持续8 min；第四期-死亡时期：在这一期动物因深度麻醉而死亡。对动物实施安乐死时，预先对动物进行麻醉应在第三期进行，在第四期进行动物的安乐死。

3.4 试验中使用的方法

本试验只对非吸入性药剂方法进行研究比较，物理方法（颈椎脱臼,断头,放血,枪击,电击等）与吸入性药剂法（常见药物如乙醚、氮气、一氧化碳、二氧化碳等麻醉药剂）这里未做研究，有待进一步探讨解决。

该方法要求操作人员须具有熟练的动物静脉注射技术，这样会将动物死亡的痛苦减少到最低，因而动物安乐死需要由专业人员进行。

3.5 试验人员及环境

通过试验感受到在对动物实施安乐死的过程中，人员需温柔稳固的保定动物,这样能安抚即将实施安乐死的动物。在每次实施安乐死后若未彻底清洗残留的血迹和气味，会使等待实施安乐死的动物精神紧张，焦躁不安，没有残留气味的设备和清新的空气会给即将实施安乐死的动物带来积极地影响。