复方灵芝口服液对睡眠剥夺大鼠睡眠的影响

周彦娜，薄世兴，陈 莹，黄厚今

(1 遵义医学院公共卫生学院流行病与卫生统计学教研室，贵州遵义 563000;2遵义医学院附属医院干部保健病房，贵州遵义 563000)

睡眠剥夺(sleep deprivation)指由生活事件或各种病理生理原因如药物效应、慢性疾病、精神疾病或睡眠障碍导致的睡眠减少的状态，且睡眠减少可以激发器官的一些改变，包括免疫功能、认知功能、内分泌功能等［1］。目前已有实验报道，应用丙泊酚大鼠背侧中缝核微量注射、五味子冻干粉、针刺可改善睡眠剥夺大鼠的睡眠［2-4］;药理研究表明，灵芝具有免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗衰老、抗疲劳、降血糖、降血压、消炎和镇静催眠等药理作用［5］，而关于灵芝对睡眠剥夺大鼠睡眠的改善作用目前尚未见报道。本实验旨在研究复方灵芝口服液对睡眠剥夺大鼠睡眠的影响。

1 材料及方法

1.1 主要试剂、仪器和药品

复方灵芝口服液，贵州吉仁堂药业有限公司;氯苯丙氨酸(PCPA)，美国Sigma 公司;巴比妥钠、戊巴比妥钠，上海紫一试剂厂;注射器、生理盐水若干。

1.2 实验方法

健康SPF 级雌性SD 大鼠，体重180～200g，由第三军医大学大坪医院动物中心提供，合格证号:SCXK(渝)2012-0005。光照每12h 明暗交替，自由饮食，开始实验前适应性饲养5d。随机分为5 组:空白组(B组)睡眠剥夺组(M 组)、复方灵芝口服液干预低、中、高剂量组(GL 组、GM 组、GH 组);GL 组、GM组、GH 组分别给予0.15、0.75、1.5g/(kg·bw)复方灵芝口服液灌胃，B 组及M 组给予同等体积的去离子水灌胃，每天1 次，连续灌胃至实验结束;灌胃14d 后，除B 组外，其余各组连续2d 每天腹腔注射氯苯丙氨酸［300mg/(kg·bw)］制造睡眠剥夺模型［6］，B 组给予腹腔注射同等体积的生理盐水，造模成功后进行催眠实验。

依据《保健食品检验与评价技术规范实施手册》(2003年版)［7］中关于改善睡眠保健食品的判定标准进行，采用的实验方法有直接睡眠实验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验、延长戊巴比妥钠诱导的睡眠时间实验、巴比妥钠睡眠潜伏期实验，根据预试验结果得出，戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验、延长戊巴比妥钠诱导的睡眠时间实验、巴比妥钠睡眠潜伏期实验的药物用量分别为12、25、120mg/(kg·bw)，连续3d 依次进行直接睡眠实验和戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验、延长戊巴比妥钠诱导的睡眠时间实验、巴比妥钠睡眠潜伏期实验，每天晚上9:00 开始实验。

实验数据中入睡动物数为分类变量资料，采用卡方检验;其余数据均为计量资料，以均数± 标准差(±s)表示，采用ANOVA 方差分析，统计软件选用SPSS18.0 软件，检验水准α=0.05。

2 结果与分析

2.1 戊巴比妥钠阈下剂量睡眠情况

给予复方灵芝口服液后，各组大鼠均未出现睡眠现象;根据表1 中数据可看出，随着灵芝剂量增加，各组出现睡眠现象动物数也增加，但统计学未见差异。

表1 戊巴比妥钠阈下剂量睡眠情况

2.2 延长戊巴比妥钠诱导的睡眠时间

与B 组相比，M 组大鼠的戊巴比妥钠诱导的睡眠时间均明显延长(P＜0.05);与M 组相比，GM 组和GH组较M 组大鼠的戊巴比妥钠诱导的睡眠时间明显延长(P＜0.05)，与GL 组相比，GM 组和GH 组较GL 组睡眠时间明显延长(P＜0.05)，且GM 组与GH 组相比有统计学差异(P＜0.05)(表2)。

表2 延长戊巴比妥钠诱导的睡眠时间(±s)

表2 延长戊巴比妥钠诱导的睡眠时间(±s)

注:a 与B 组相比P＜0.05，b 与M 组相比P＜0.05，b 与GL 组相比P＜0.05，c 与GM 组相比，P＜0.05。

2.3 巴比妥钠睡眠潜伏期

由表3 可见，经方差分析，F=1.133，P=0.353 ＞0.05，各组之间潜伏期无差异。

表3 巴比妥钠睡眠潜伏期(±s)

表3 巴比妥钠睡眠潜伏期(±s)

3 讨论

复方灵芝口服液的成分均选自国家公布的药食两用中药，且已有多项试验证实具有镇静催眠的功效［5，8］，是我国具有镇静催眠作用的中医药方剂中的常用药物。检测药物的镇静催眠作用评价方法是参照《保健食品检验与评价技术规范实施手册》 (2003 版)［7］进行的，包括延长戊巴比妥钠诱导的睡眠时间实验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验、巴比妥钠睡眠潜伏期实验三项实验中二项阳性，且无明显直接睡眠作用，可判定该受试样品具有改善睡眠的功能。

3.1 直接睡眠实验和戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验

实验研究发现，给予复方灵芝口服液后，各组大鼠均未出现睡眠现象，说明直接睡眠实验阴性。戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验是检测药物是否具有改善睡眠功能的重要指标之一;实验结果发现，随着灵芝剂量增加，各组出现睡眠现象动物数也增加，但统计学未见差异。

3.2 延长戊巴比妥钠诱导的睡眠时间实验

延长戊巴比妥钠诱导的睡眠时间实验是检测药物是否具有改善睡眠功能的重要指标之一，本实验结果显示，与B 组相比，M 组睡眠时间明显延长，说明睡眠剥夺状态可以增加大鼠戊巴比妥钠诱导的睡眠时间;与M 组和GL 组相比，GM 组、GH 组大鼠的睡眠时间明显延长，且GH 组较GM 组明显延长，说明给予复方灵芝口服液可明显延长睡眠剥夺大鼠戊巴比妥钠诱导的睡眠时间。

3.3 巴比妥钠睡眠潜伏期实验

巴比妥钠睡眠潜伏期实验是检测药物是否具有改善睡眠功能的重要指标之一，实验研究发现，各个组间未见差异性，即该项实验结果呈阴性。考虑原因是:(1)巴比妥钠药物的量在预试验时未确定好;(2)实验动物因为重复给予戊巴比妥钠，对此类药物产生了耐受性，需要加大剂量。总之，关于复方灵芝口服液对巴比妥钠诱导的睡眠潜伏期尚需进一步验证。

4 结论

复方灵芝口服液可延长戊巴比妥钠诱导的睡眠时间，但对增加睡眠剥夺的入睡动物数和缩短巴比妥钠诱导的潜伏期无明显作用，且无直接睡眠作用，说明复方灵芝口服液可明显延长戊巴比妥钠诱导的睡眠时间。

［1］Venancio D P，et al.Sleep Deprivation Alters Rat Ventral Prostate Morphology，Leading to Glandular Atrophy:A Microscopic Study Contrasted with the Hormonal Assays ［J］.BioMed Research International，2012，10:1-6.

［2］肖军，等.中缝背核注射丙泊酚对睡眠剥夺模型大鼠睡眠行为的影响［J］.临床麻醉学杂志，2010，7:616-618.

［3］程少冰，张毅敏，唐纯志，等.针刺对不同时段睡眠剥夺大鼠模型行为学及TNF-α 含量的影响［J］.中国老年学杂志，2012，32(1):77-79.

［4］王晓蕾，李飞，李廷利.五味子冻干粉改善睡眠剥夺果蝇睡眠作用的实验研究［J］.世界科学技术:中医药现代化，2010，3:409-412.

［5］贾薇，吴岷，张劲松，等.灵芝成分改善睡眠功能试验初探［J］.食用菌学报，2005，12(3):43-47.

［6］肖成荣，马增春，李海静，等.PCPA 失眠大鼠模型的制作及其机制［J］.毒理学杂志，2007，21(4):326-326.

［7］中华人民共和国卫生部.保健食品检验与评价技术规范［S］.北京:人民卫生出版社，2003，632-635.

［8］江海涛，等.灵芝提取物及复合制剂改善睡眠和免疫调节的研究［J］.食用菌，2009，3:64-66.