TGF-β1、IFN-γ及Treg 水平变化与小儿支气管哮喘及疾病严重程度的相关性研究

田斌斌 郭小凤 申永霞 李捷

（1.开封市儿童医院急诊科，河南 开封 475000；2.开封市儿童医院新生儿科，河南 开封 475000；3.开封市儿童医院内科门诊，河南 开封 475000）

支气管哮喘（BA）是指以反复发作的喘息、咳嗽、气促、胸闷为主要症状表现的小儿疾病，常在夜间或凌晨发作或加剧，主要病因包括个体过敏体质、肥胖、遗传因素等[1]。临床多表现为烦躁不安、呼吸困难，以呼气困难为主，往往不能平卧，有时喘鸣音可传至窒外；危重状态时患儿面色苍白、鼻翼扇动、口唇、指甲紫绀，甚至冷汗淋漓，面容怕恐不安，应予积极治疗[2]。该病常见并发症包括下呼吸道感染，肺部感染，水、电解质和酸碱平衡失调，气胸，纵膈气肿，呼吸衰竭和猝死等。

临床多采用雾化吸入糖皮质激素和支气管扩张剂（β2受体激动剂）的治疗方式，可有效改善不良症状，但仍有部分重度BA患儿疗效不佳[3]。研究表明，转化生长因子-β1（TGF-β1）、γ干扰素（IFN-γ）和调节性T细胞（Treg）参与支气管哮喘免疫反应与炎症反应的全过程，但目前临床对TGF-β1、IFN-γ和Treg水平评估病情程度的研究较少[4]。因此，本研究旨在分析小儿BA中TGFβ1、Treg及IFN-γ水平变化与疾病的相关性，为疾病的治疗和预后提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取本院2019年4月至2022年4月收治的小儿BA患者127例为研究对象，设为观察组。纳入标准：临床相关资料完整，耐受性较好者；患儿年龄＜6岁；全部患儿均符合《支气管哮喘控制的中国专家共识》中BA诊断标准[5]；无个人及家族过敏性疾病史；本研究经医院伦理会批准，患者及家属知情同意并签署知情同意书。排除标准：有严重造血系统疾病和传染病；合并心、肺、肝、肾等其他脏器并发症；存在认知功能障碍和心理问题；有恶性肿瘤和严重全身感染。其中女61例（48.03%），男66例（51.97%），年龄4-6岁，平均年龄5.25±0.33岁。根据BA疾病严重将观察组患儿进一步分为：轻度组43例、中度组52例及重度组32例。病情严重程度的判定标准为，轻度：症状每周发作1次以上，但每日发作次数小于1次，睡眠及活动受影响，第一秒用力呼气容积占预计值≥80%；中度：临床症状明显，睡眠及活动受影响，夜间哮喘每周发作1次以上，第一秒用力呼气容积占预计值在60%-79%；重度：哮喘频繁发作，夜间症状明显，体力活动受限，第一秒用力呼气容积占预计值＜60%以下[6]。轻、中、重组一般资料比较无差异，不具统计学意义（P＞0.05）。详见表1。

表1 轻、中、重组一般资料比较（n(%)或±SD）

表1 轻、中、重组一般资料比较（n(%)或±SD）

组别 总例数 性别 年龄(岁) 病程(月) 男 女 轻度组 43 24(55.81) 19(44.19) 4.06±0.89 1.22±1.58 中度组 52 27(51.92) 25(48.08) 3.98±1.23 1.34±1.42 重度组 32 17(53.13) 15(46.88) 4.24±0.57 1.31±1.09

另选取同期在本院行体检各项指标正常的健康儿童113例为对照组，纳入标准：临床相关资料完整，耐受性较好；年龄＜6岁；无个人及家族过敏性疾病史；无个人及家族过敏性疾病史；患者及家属知情同意并签署知情同意书；排除标准：有严重造血系统疾病和传染病；合并心、肺、肝、肾等其他脏器并发症；存在认知功能障碍和心理问题；有恶性肿瘤和严重全身感染。其中女52例（46.02%），男61例（53.98%），年龄4-5岁，平均年龄4.12±1.27岁。对照组和观察组的一般资料比较无差异，不具统计学意义（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 TGF-β1、IFN-γ水平检测

采集清晨空腹肘静脉血5 mL，以3000 r·min-1离心10 min，获得上层血清，置于-20℃冰箱内冷冻待测。采用酶联免疫法对血清TGF-β1、IFNγ水平进行检测（使用来自意大利Instrumentation Laboratory SPA的市售试剂盒，严格按照试剂盒说明书进行操作）。

1.2.2 Treg细胞含量分析

分离PBMC，RPMI1640培养基进行细胞重悬为2×109L-1，每孔依次加入佛波酯至终浓度50 µg·L-1、离子霉素至750 µg·L-1、莫能星至2 µmol·L-1后，于CO2培养箱（37℃，5% CO2）中培养5 h。以2000 r·min-1的速度离心8 min，弃上清洗涤细胞。取l×l06PBMC于流式专用试管中，标记Treg测量管，在Treg测量管中加入抗人CD4-FITC和CD25-PE单克隆抗体。于室温环境下，避光孵育30 min。离心重新悬浮细胞到200 µL。再加入10 µL PE标记的抗人Foxp3抗体，避光、4℃条件下孵育30 min，洗涤重悬，流式细胞仪（美国贝克曼库尔特CytoFLEX生产）进行分析。

对比各组血清TGF-β1、IFN-γ水平和血中Treg细胞含量；分析TGF-β1、IFN-γ及Treg水平与疾病程度的相关性。

1.3 统计学方法

采用SPSS 27.0统计学软件分析数据，计量资料采用均数±标准差（±SD）的形式表示，组间比较采用t检验；计数资料采用n（%）表示，组间比较采用卡方χ2检验；均以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 对照组和观察组的TGF-β1、IFN-γ水平和Treg细胞含量

观察组TGF-β1水平明显高于对照组，Treg细胞含量、IFN-γ水平低于对照组（P＜0.05）。详见表2。

表2 两组TGF-β1、Treg细胞含量和IFN-γ水平比较（±SD）

表2 两组TGF-β1、Treg细胞含量和IFN-γ水平比较（±SD）

注：与对照组相比，aP＜0.05。

组别 例数 TGF-β1(ng·L-1) IFN-γ(ng·L-1) Treg细胞含量(%) 对照组 113 125.38±32.18 112.34±18.68 8.55±1.92 观察组 127 287.25±33.02a 62.37±15.23a 5.86±1.77a

2.2 不同严重程度BA患者的TGF-β1、IFN-γ水平和Treg细胞含量

TGF-β1水平随着BA严重程度上升而上升，Treg细胞含量和IFN-γ水平随着BA严重程度下降而下降（P＜0.05）。见表3。

表3 不同BA严重程度患者的TGF-β1、Treg和IFN-γ水平比较（±SD）

表3 不同BA严重程度患者的TGF-β1、Treg和IFN-γ水平比较（±SD）

注：与轻度组相比，aP＜0.05；与中度组相经，bP＜0.05。

组别 n TGF-β1(ng·L-1) IFN-γ(ng·L-1) Treg细胞含量(%) 轻度组 43 168.32±30.21 105.49±18.17 7.88±1.84 中度组 52 256.24±31.48a 70.26±16.33a 6.09±1.32a 重度组 32 302.45±32.15ab 56.39±15.21ab 4.23±1.08ab

2.3 TGF-β1、IFN-γ和 Treg与疾病严重程度的相关性分析

血清TGF-β1水平与疾病严重程度呈正相关（r=0.845，P＜0.05）；Treg细胞含量与疾病严重程度呈显著负相关（r=-0.564，P＜0.05）；血清IFNγ水平与疾病严重程度呈显著负相关（r=-0.564，P＜0.05）。

3 讨论

BA是一种表现反复发作性咳嗽、喘鸣和呼吸困难，并伴有气道高反应性的可逆性、梗阻性呼吸道疾病，积极防治小儿支气管哮喘对防治成人支气管哮喘意义重大。本次研究结果显示，观察组TGF-β1水平明显高于对照组，IFN-γ水平和Treg细胞含量均低于对照组，且血清TGF-β1水平与疾病严重程度呈正相关，血清IFN-γ水平和Treg细胞含量与疾病严重程度呈显著负相关。Treg是近年发现的一种具有免疫抑制活性的CD4+T细胞亚群，与自身免疫性疾病的发生关系密切，其异常表达可导致自身免疫性疾病[7]。舒姣洁等多位学者研究中指出，Treg对于自身免疫性疾病的发生和发展都具有重要意义，对其进行深入研究将有助于了解自身免疫性疾病的发病机制，对疾病预后判断、进一步的治疗有着深远的意义[8]。IFN-γ是II型干扰素的唯一成员，可通过抗病毒、抗增殖和免疫调节功能在宿主防御中扮演关键角色[9]。能有效活化巨噬细胞、指导B细胞免疫球蛋白的合成、类型转化和分泌，在自身免疫和动脉粥样硬化症等一些炎症性疾病过程中起着重要作用[9]。综上所述，血清TGF-β1、IFN-γ及Treg水平与BA及疾病的严重程度息息相关，是诱发疾病进展的重要因素，临床可联合血清TGFβ1、IFN-γ及Treg水平对BA病情进行评估，为临床制定治疗方案提供依据。