食管鳞癌组织中LAT-1、RON蛋白的表达与病理学特征的关系

刘晓丽 宋伟伟 吴梅珍

（莆田学院附属医院病理科，福建 莆田 350000）

食管癌是来源于食管上皮细胞的恶性肿瘤，我国食管癌的患病率和死亡率占全球55%左右；该病常用治疗方法包括手术治疗、内镜下切除术、放化疗等[1]。人体内的许多原癌基因可以成为肿瘤的治疗靶点（EGFR、HER-2等），针对这些基因突变可以使用生物靶向药物进行治疗，故对原癌基因与食管鳞癌的关系进行深入研究，有助于食管鳞癌的诊断、治疗和预后[1]。

L型氨基酸转运载体-1（Large neutral amino acid transporter-1 ，LAT-1）是钠离子非依赖型、主要转运大分子的中性氨基酸，是非糖基化的膜蛋白质，在大脑、肝脏、骨髓等组织和癌细胞中大量表达[2]。受体酪氨酸激酶（Receptor Tyrosine Kinase，RTK）又称为巨噬细胞刺激蛋白受体（Recepteur d’origine nanta，RON），它是MET原癌基因家族的一员，其唯一配体是巨噬细胞刺激蛋白（Macrophage Stimulation Protein，MSP），主要表达于上皮组织，在传递细胞内和细胞外信号方面发挥生物学作用[3]。

研究表明，RON的异常表达是导致胃肠道上皮细胞恶变的致病因素[3]。因此，本文主要探究食管鳞癌组织中LAT-1、RON蛋白的表达与病理学特征的关系，为临床提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2020年7月至2022年7月本院收治的食管鳞癌患者113例为研究对象。

纳入标准：一般资料完整；所有病例经病理确诊；符合食管鳞癌诊断标准[4]；本研究获得医学伦理委员会同意批准；患者同意参加本研究；排除标准：有严重造血系统疾病和传染病者；合并心、肺、肝、肾等其他脏器并发症者；合并恶性肿瘤和全身感染者；存在认知功能障碍和心理问题者。

113例食管鳞癌患者中，女55例，男58例，年龄42-75岁，平均年龄56.25±8.23岁；疾病程度：轻度非典型增生35例，中度非典型增生37例，重度非典型增生41例；组织分化程度：低分化49例，高分化64例；临床分期：I期22例，II期42例，III期44例，IV期5例；有淋巴结转移67例，无淋巴结转移46例。

1.2 方法

1.2.1 LAT-1、RON表达的检测

均采用免疫组织化学染色法对LAT-1、RON表达进行检测。选取经HE染色证实的癌旁正常组织和食管鳞癌组织的石蜡块。蜡块标本行5 μ m连续切片，60℃烤片4 h，切片脱蜡和水化，加0.01 mol·L-1枸橼酸缓冲液（pH6.4）于高压锅中，加热至喷气，持续两min，室温冷却后，蒸馏水冲洗，PBS溶液浸洗3次，每次5 min，用新鲜配置的3% 双氧水室温处理15 min，PBS溶液浸洗3次，每次5 min，室温封闭30 min，甩去多余液体，并用吸水纸吸干，滴加兔抗人LAT-1、RON多克

1.2.2 LAT-1、RON阳性表达的判定 隆抗体，覆盖全部标本，将切片放入湿盒中孵育，PBS溶液浸洗3次，每次5 min，滴加Envision试剂，覆盖全部标本，37℃保温箱内孵育1 h，PBS溶液浸洗3次，每次5 min，室温下显色，复染，充分水洗，脱水透明，重型快干胶封片，在高倍显微镜下，PBS代替一抗作为阴性对照，阳性对照采用试剂公司提供的阳性切片（试剂盒均购自上海莼试生物技术有限公司，操作步骤按试剂盒说明书进行）。

阳性表达定位于细胞核和细胞质，在肿瘤细胞的细胞质和细胞膜上可见棕黄或棕褐色颗粒。100×光镜下取肿瘤实质区，400×光镜下随机取5个视野。

按照据染色强度评分：阴性=0，弱阳性=1，中等阳性=2，强阳性=3。染色阳性细胞数分为：≤10%（阴性=0），11%-30%（弱阳性=1），31%-50%（中等阳性=2），＞50% （强阳性=3）。当两者分数之和≥3时判定LAT-1、RON为阳性。

1.3 观察指标

（1）对比食管鳞癌组织与癌旁组织间LAT-1、RON蛋白表达水平；（2）对比不同临床特征食管鳞癌组织间LAT-1、RON蛋白表达情况；（3）分析食管鳞癌组织中LAT-1、RON蛋白表达的相关性。

1.4 统计学方法

采用SPSS 28.0统计学软件分析数据，n（%）表示，χ2检验；相关性采用Spearnan秩相关性分析；以α=0.05为检验水准。

2 结果

2.1 食管鳞癌组织与癌旁组织的LAT-1、RON蛋白表达水平对比

LAT-1在癌旁组织中无阳性表达，但在食管鳞癌组织中有阳性表达；且食管鳞癌组织LAT-1、RON蛋白阳性率均显著高于癌旁正常组织（P＜0.05）。见表1。

2.2 不同临床特征食管鳞癌组织间LAT-1、RON蛋白表达情况

食管鳞癌组织中LAT-1、RON蛋白表达在不同分化程度、临床TNM分期及淋巴结转移中表达均有差异（P＜0.05）。见表2。

表2 不同临床特征LAT-1、RON蛋白表达情况比较[n(%)]

2.3 食管鳞癌组织中LAT-1、RON蛋白表达相关性

Spearman相关分析结果显示，在食管鳞癌组织中，LAT-1与RON蛋白表达呈正相关，随着LAT-1水平上调，RON水平也与之一起上调（r=0.364，P＜0.05）。见表3。

表3 食管鳞癌组织中LAT-1、RON蛋白表达相关性

3 讨论

食管癌是常见的消化系统肿瘤之一，其发生是一个涉及多个基因异常表达的多因素、多阶段、复杂的生物学过程[1]。原癌基因可以成为肿瘤的治疗靶点，故对原癌基因与食管鳞癌的关系进行深入研究，有助于食管鳞癌诊断、治疗和预后[1]。

L型氨基酸转运载体-1（LAT-1）是非糖基化的膜蛋白质，在大脑、肝脏、骨髓等组织和癌细胞中大量表达[2,5]。巨噬细胞刺激蛋白受体（RON）是MET原癌基因家族的一员，其唯一配体是巨噬细胞刺激蛋白（Macrophage Stimulation Protein，MSP），在传递细胞内和细胞外信号方面发挥生物学作用[3]。有研究表明，RON的异常表达是导致胃肠道上皮细胞恶变的致病因素[6]。

本次研究结果中LAT-1在癌旁组织中无阳性表达，但在食管鳞癌组织中有阳性表达；且食管鳞癌组织LAT-1、RON蛋白阳性率均显著高于癌旁正常组织。提示LAT-1、RON蛋白的异常表达在食管鳞癌恶性转变的过程中起着重要作用。另一方面，食管鳞癌组织中LAT-1、RON蛋白表达在不同分化程度、临床TNM分期及淋巴结转移中表达均有差异。说明LAT-1、RON蛋白的异常表达与食管鳞癌临床病理特征显著相关。有研究表明，LAT-1在肿瘤细胞中大量表达，可能是其提供给这些细胞快速增殖所需要的必需氨基酸，对恶性肿瘤的不断增殖起着重要作用[7]。因此，我们猜测LAT-1的高表达可能是导致肿瘤细胞快速生长的原因之一。已有研究证实，RON在人类上皮性肿瘤中，如胃腺癌、食管鳞癌、头颈部鳞癌及乳腺癌等，有不同程度的高表达，表达的阳性率波动于32%-58%之间，这取决于具体的肿瘤类型[8]。本次研究显示，Spearman轶相关分析结果显示在食管鳞癌组织中，LAT-1与RON蛋白表达呈正相关。提示LAT-1、RON蛋白表达水平的升高可显著增加食管鳞癌的增殖能力，进一步促进了细胞增殖与分化、抑制凋亡，从而加速了食管鳞癌的发展进程，LAT-1、RON蛋白具有作为食管鳞癌治疗特异性靶点的潜力，在食管鳞癌早期诊断、筛选癌前高危个体等方面具有重要的临床价值。

综上所述，LAT-1、RON蛋白与食管鳞癌临床病理特征显著相关，并能作为一种新的预后判断指标和治疗靶点，为临床病情诊断及预后评估提供参考。