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气相色谱-三重四极杆质谱法快速检验爆炸案件中苦味酸

2023-01-05万一夫杨瑞琴张冠男徐若沦

分析测试学报 2022年12期
关键词:甲酯甲酸炸药

万一夫,杨瑞琴*,张冠男,徐若沦

(1.中国人民公安大学 侦查学院,北京 100038;2.公安部物证鉴定中心,北京 100038;3.广东省毒品实验技术中心,广东 广州 510230)

气相色谱-质谱(GC-MS)是法庭科学领域中最常用的检验技术之一,被广泛应用于爆炸物、毒品、毒物、农残等物质的检验[1-9]。该技术包含多种电离源形式,其中,电子轰击电离源(EI)或化学电离源(CI)可用于检测有机炸药[10]。EI模式下产物离子的碎片化程度高,种类丰富[11];CI模式下色谱峰种类较少,背景噪声小,对梯恩梯(TNT)的检出限可达190 pg[12]。在多反应监测(MRM)扫描模式下,气相色谱-三重四极杆质谱(GC-TQMS)通过选择多对特定的母离子和子离子进行检测,可减少其他碎片离子的干扰。GC-TQMS结合了气相色谱优秀的分离能力和质谱技术强大的定性能力,灵敏度高,受基质干扰小,普适性强,分析速度快,与现场复杂环境下痕量有机炸药残留物检验分析的需求高度契合。

苦味酸(TNP)又称黄色炸药,猛度为103%TNT,在第一次世界大战前被用作弹头装药,是军用炸药中的常见成分[13-14]。TNP在当今社会中应用十分广泛,在农业领域可用作杀菌剂,在医疗领域可用于动物标记等[15]。然而,TNP是一种十分危险的硝基芳香族有机化合物,爆炸威力大,且具有强烈的肝毒性和血毒性[16-17]。由于含有酚羟基,TNP易溶于水,极易污染环境,因此建立TNP的高灵敏检测方法十分必要。

目前TNP的检测方法包括荧光分析法[18]、液相色谱-质谱法[19]、伏安法[20]、拉曼光谱法等[21],相比于其他方法,GC-MS是公安基层刑事技术部门列装度最高的设备,利用率高,是检测TNP的有力手段。但TNP的极性强、沸点高,常规的GC-MS法难以直接检测[22],因此需借助衍生化方法。以往研究中,次氯酸钠衍生化法最为常用,其原理是次氯酸钠在水溶液中水解生成次氯酸,随后将苦味酸氧化生成氯化苦[23]。但次氯酸的氧化性较强,可与多种硝基酚类、甲基酚类化合物反应生成氯化苦[24]。Merlet等[25]研究发现硝基甲烷、甘氨酸、腐殖酸均可与次氯酸反应生成氯化苦,此类杂质产生的副反应可能导致假阳性结果。因此,需要建立更准确定性苦味酸的方法。

较为理想的衍生化路径是:保留苦味酸主体结构,同时提升检验灵敏度,从而避免其他硝基酚类化合物和常见有机炸药的干扰。根据文献报道,烷基原碳酸酯与苯酚反应会生成苯基烷基醚,该反应的产率和反应物的化学结构有关,当酚羟基邻位或对位存在给电子基团(如烷基)时,由于屏蔽效应,产率下降;存在吸电子基团(如硝基)时,产率增至80%~90%,而TNP酚羟基的邻位和对位均有强吸电子能力的硝基,为建立新的TNP衍生方法提供了思路[26]。原甲酸三甲酯(TMOF)是一种烷基原碳酸酯,常用作有机反应的脱水剂,能溶于乙醇、乙醚等有机溶剂。同时,TMOF具有良好的反应活性,是一种重要的有机合成中间体,可用于还原芳烃卤代物[27];与醛、β酮酯等反应生成缩醛和缩酮[28-29],可用于药品、染料和香料等的合成[30],该类物质能与酚类在温和条件下反应生成芳基烷基醚,产率可达80%以上[31]。本文选用活性较高、价格低廉的TMOF对TNP进行衍生,得到的衍生产物2,4,6-三硝基苯甲醚(TNA)在GC-MS检测中具有较高的响应,据此建立了快速检验爆炸案件中苦味酸的GC-TQMS方法。

1 实验部分

1.1 试剂与仪器

甲醇、丙酮、乙腈(色谱纯,Supelco公司);甲苯、乙醚、吡啶(分析纯,上海国药集团化学试剂有限公司);原甲酸三甲酯(纯度98%,Aladdin公司);TNP、TNT、地恩梯(DNT)、黑索金(RDX)、特屈儿(CE)标准溶液(1 000 μg/mL,AccuStandard公司);泥土取自某公园,风干干燥后过60目筛备用。

Agilent 7890A-7010 GC-TQMS气质联用系统,配备CI源和EI源,HP-5MS(8 m×0.25 mm×0.25 μm)、HP-5MS(5 m×0.25 mm×0.10 μm)色谱柱;Gerstel MPS自动进样器(Gerstel公司);ML204T/02分析天平(Mettler Toledo公司);移液枪(Eppendorf公司);有机微孔滤膜(0.22 μm);SB25-12DTD型超声波清洗器(宁波新芝公司);DHG-9245A型电热鼓风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司);DZF-6032真空干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司)。

1.2 工作液及衍生方法

工作液:用甲醇将TNP标准溶液稀释至10 μg/mL,用于衍生化条件优化,并继续逐级稀释,用于实验和方法评价;用甲醇将TNP、TNT、DNT、RDX、CE的标准溶液混合配制为10 μg/mL的混标工作液,用于提取回收实验。

衍生方法:取苦味酸待测液1 mL,用真空干燥箱处理后加入100 μL TMOF,超声振荡溶解2 min后密封,加热至95℃,保持70 min后取出样品冷却,加入1 mL甲醇振荡溶解,取1 μL上清液进样。

1.3 仪器条件

EI模式:采用HP-5MS毛细管色谱柱(5 m×0.25 mm×0.10 μm),恒压:75.84 kPa;进样口温度:240℃,初始温度为80℃,保持1 min,以20℃/min升至250℃,保持0.5 min;不分流进样,进样量:1 μL;传输线温度:230℃;电离能量:70 eV;离子源温度:230℃;载气为高纯氦气,碰撞气为氮气,质量数扫描范围35~400 amu,溶剂延迟1 min。

负化学电离(NCI)模式:采用HP-5MS毛细管色谱柱(8 m×0.25 mm×0.25 μm,自行切割),恒流:1.2 mL/min;进样口温度:220℃,初始温度为50℃,保持1 min,以20℃/min升至250℃,保持2 min;不分流进样,进样量:1 μL;传输线温度:230℃,离子源温度:150℃,载气为高纯氦气,反应气为甲烷,质量数扫描范围35~400 amu,溶剂延迟3 min。

1.4 回收率实验

取公园中泥土,干燥后过60目筛备用。采用外标法,进行5组平行对照实验,实验组每份取泥土2 g,添加1 mL质量浓度为10 μg/mL的混标工作液,自然挥干5 min。加入20 mL丙酮,振荡提取约30 s,静置2 min,提取液沿玻璃棒引流至滤纸漏斗中,用50 mL烧杯收集滤液,自然挥干至1 mL左右,过有机滤膜,取100 μL滤液于进样瓶的内衬管中按照“1.2”方法进行衍生。对照组为“1.2”制备的混标工作液。

2 结果与讨论

2.1 衍生化反应原理

在加热条件下,TNP与TMOF发生甲基化反应,生成2,4,6-三硝基苯甲醚、甲醇和甲酸甲酯,反应后得到淡黄色溶液。

图1显示了苦味酸的衍生化反应机理。反应过程中,原甲酸三甲酯与苦味酸发生亲核取代反应,脱去1个甲醇分子形成中间体A,由于碳原子同时连接1个芳氧基和2个甲氧基,中间体A结构不稳定,在加热条件下A很容易脱去1个甲酸甲酯分子。Smith[26]认为这主要是芳氧基引起,另外,由于芳氧基共振,中间体A很可能发生如图1所示的电子转移。中间体A脱去甲酸甲酯分子会产生芳氧基自由基、甲基自由基,二者结合生成TNA。此外,芳氧基苯环上对位和邻位的3个硝基使芳氧基的吸电子诱导效应增强,使得中间体A更容易分解,产率提高。

图1 原甲酸三甲酯与苦味酸的衍生反应机理Fig.1 Reaction mechanism for derivatization of TNP by TMOF

2.2 产物的确证

EI源是GC-MS最常用的电离源,由于能量较高,检测有机炸药时很难得到分子离子;CI是一种软电离方法,图谱噪声小、分子离子丰度高。苦味酸含有多个硝基,吸电子能力较强,因此在NCI模式下的响应效果优于正化学电离(PCI)模式。为得到更好的分析效果,分别采用EI模式和NCI模式,通过保留时间和MRM离子对分析10 mg/L TNP的衍生产物TNA。

EI模式下TNA的谱图见图2,保留时间为2.76 min。质谱图中丰度较大的离子峰包括m/z243、213、166、105、75和62,m/z243来自[TNA]+(分子离子峰),该峰说明TNA的结构较稳定[11];m/z213来自[M-CH2O]+和[NO3]+;m/z166可能是[M-CH2O]+继续脱去NO2的产物;m/z105来自[M-3NO2]+;m/z75和m/z62分别为[M-CH2O-3NO2]+和[NO3]+。选取丰度较高的离子[TNA]+和[M-CH2O]+作为母离子采集二级质谱,得到丰度较高的特征碎片离子m/z213[M-CH2O]+、166[M-CH2O-NO2]+和62[NO3]+。

图2 EI模式下TNP衍生产物TNA的总离子流图(A)和质谱图(B)Fig.2 Total ion chromatogram(A)and mass spectrum(B)of TNP-derived product TNA in EI mode

NCI模式下TNA的谱图见图3,保留时间为4.98 min。质谱图中TNA的碎片离子较少,无法获得分子离子峰,丰度较高的离子峰为m/z228、213,其中m/z228来自[M-CH3]-;m/z213为[M-CH2O]-。选取m/z228作为母离子采集二级质谱,得到丰度较高的产物离子m/z198、m/z182,其中m/z198为m/z228继续脱去NO的产物[M-CH3-NO]-,m/z182则为m/z228继续脱去NO2的产物[M-CH3-NO2]-。

图3 NCI模式下TNP衍生产物TNA的总离子流图(A)和质谱图(B)Fig.3 Total ion chromatogram(A)and mass spectrum(B)of TNP-derived product TNA in NCI mode

2.3 衍生化条件的优化

原甲酸三甲酯接触水会发生反应,生成甲醇和甲酸甲酯,因此样品采用丙酮等溶剂进行提取。此外,原甲酸三甲酯易挥发,加热时,为避免其提前挥发导致衍生化反应无法进行,反应要在密闭条件下进行。

将TNP分别用甲醇、甲苯、乙腈、乙醚、丙酮和吡啶溶解后加入TMOF进行衍生,比较了不同溶剂的实验效果。结果表明,以甲醇作溶剂时TNA的响应最好,吡啶作溶剂时TNA的响应最差。

比较了苦味酸甲醇溶液和苦味酸固体的反应效果。实验表明,衍生化前对苦味酸进行干燥处理可大幅提高衍生化产率,这是因为直接加入TMOF一方面会使反应浓度降低,反应速率下降,另一方面,溶剂和TMOF会产生短暂的分层,苦味酸从溶剂相转移至TMOF(反应相)的过程减缓了反应速度。由于TNA的热稳定性强,烘干无明显影响,因此衍生前先对样品进行干燥处理。

进一步对反应时间、反应温度及TMOF体积进行了优化(图4)。结果表明,当反应时间为120 min时,TNA的信号强度达到最大,但只比70 min时高不到5%;当反应时间超过120 min,TNA的信号强度随反应时间的增加而快速下降,这是因为产物TNA在长时间加热过程中随溶剂挥发所致。综合考虑时间成本和实验效果,选择反应时间为70 min。当反应温度为95℃时,衍生产物的相对信号强度最高,因此选择95℃为实验温度。此外,原甲酸三甲酯的沸点约104℃,实验中应防止温度过高导致液体暴沸。

图4 不同反应时间(A)、反应温度(B)、TMOF体积(C)下衍生产物的信号强度Fig.4 Signal intensities of derivatives under different reaction times(A),reaction temperatures(B)and volumes of TMOF(C)

在100~1 000 μL范围内,随着TMOF的加入量增加,TNA的信号强度降低,产率下降。这是因为在该范围内,产率和反应物的浓度成正比,因此进行衍生化反应时,TMOF的用量应尽可能减少。TMOF加入量进一步减少至50 μL时,产率反而下降,这是因为TMOF提前全部受热挥发导致反应不完全,因此TMOF加入量选择100 μL。

综上所述,最优衍生化条件为:将苦味酸待测液敞口置于真空干燥箱内烘干,加入100 μL原甲酸三甲酯,超声振荡溶解2 min。密封,放入烘箱加热至95℃,保持70 min,取出冷却,取1 μL上清液进样。

2.4 线性关系、检出限与定量下限

配制1~10 μg/mL的TNA单标溶液,绘制响应曲线以确定方法的线性范围,以信噪比S/N=3和S/N=10分别确定方法的检出限(LOD)和定量下限(LOQ),结果见表1。实验表明,仪器在EI模式下对TNA的灵敏度高于NCI模式,EI模式下的线性范围为5~1 000 μg/L,检出限和定量下限分别为1.33、4.78 μg/L,完全满足一般检测需要。

表1 GC-EI/TQMS和GC-NCI/TQMS的线性范围、相关系数、检出限及定量下限Table 1 Linear ranges,correlation coefficients,LODs and LOQs of GC-EI/TQMS and GC-NCI/TQMS

2.5 方法通用性

将本方法用于爆炸案件中有机炸药的检验,并对常见硝基芳香族有机炸药的影响进行了考察。分别配制10 μg/mL的TNT、DNT、CE、TNP单标甲醇溶液、100 μg/mL RDX的单标甲醇溶液,以及100 μg/mL的5种有机炸药的甲醇混标溶液(100 μg/mL),用“2.3”方法分别对单标溶液与混合标准溶液进行衍生处理后,取1 μL直接进样。实验采用EI源对5种有机炸药进行GC-TQMS检测,MRM所选离子对信息见表2。

表2 EI模式下5种有机炸药的MRM离子对及碰撞能量Table 2 Precursor and related product ions for analysis of 5 organic explosives in EI mode

实验表明,该方法下5种有机炸药的MRM特征峰基本不受影响,分离效果良好。对色谱峰进一步观察发现,在对照组和实验组中,TNT的保留时间分别为2.37、2.42 min;DNT的保留时间分别为1.29、1.33 min;RDX的保留时间分别为3.28、3.35 min;CE的保留时间分别为4.17、4.15 min;TNP衍生产物TNA的保留时间分别为2.82、2.84 min,说明该方法也可检测混合物中的TNP、TNT、DNT、RDX和CE。

2.6 实际应用

爆炸案件现场物证种类多样、分布复杂,爆炸泥土作为最常见的爆炸现场残留物,常作为司法鉴定领域判断炸药种类的重要依据。为考察泥土载体杂质的干扰,确定本方法的实战效能,对模拟爆炸实验残留泥土中的有机炸药成分进行了检验。按照“1.4”方法对模拟爆炸残留泥土进行提取回收实验,按照“1.3”中EI模式的条件将提取液和对照品分别检测,以实验组和对照组的色谱峰面积之比确定回收率,实验重复5次。结果显示,5次实验中均检出TNP,平均回收率为84.0%,相对标准偏差(RSD)为4.6%。以第3次实验为例,实验组样品的总离子流图如图5,可见该方法对复杂组分中TNP的检测灵敏度高、特异性强。

图5 爆炸泥土中TNA的总离子流图Fig.5 TIC for TNA in soil samples from simulating explosion

3 结论

本文基于TMOF甲基化衍生法,建立了苦味酸的气相色谱-三重四极杆质谱高灵敏检验方法,在EI模式下对苦味酸的检出限达1.33 μg/L,高于NCI模式(5.02 μg/L),能够满足爆炸案件残留物的检验需求。采用灵敏度更高的EI模式,在该方法的基础上采用浸泡浓缩提取方法,可检出泥土样品中混合炸药的TNP组分,其平均回收率达84.0%。本方法对TNP具有良好的选择性,不受4种常见硝基芳香族有机炸药的影响,具有推广应用价值。

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