生物检材中氯胺酮及其代谢物的分析研究进展

游双银，马赛歌，王小怡，李梦阳

（河南金剑司法鉴定中心，河南洛阳 471000）

近年来，我国社会发展过程中，经常会出现氯胺酮滥用的问题，导致社会治安以及经济建设受到了一定影响。毒品滥用的行为也越来越趋向于年轻化以及男女平均化。根据相关研究发现，毒品滥用中氯胺酮的比例高达20%，短期内使用氯胺酮会导致语言系统混乱，引发人类幻觉，长期服用会造成记忆力减退和认知能力障碍等问题产生，造成心肺功能损害。现阶段，缺乏对氯胺酮免疫测定的有效方式，因此快速准确的检测方法，是我国发展建设之中所需要关注的重点内容。在氯胺酮及其代谢物的检测过程中，存在着多种多样的检测技术，本文对氯胺酮检测方式的优点以及弊端进行了分析，希望能够为相关工作者提供一些建议和帮助。

1 氯胺酮

氯胺酮又被称为消旋2环己酮，是苯环己哌啶衍生物，是一种非巴比妥类静脉全麻药，在医疗上主要应用于术前肌肉放松以及全身麻醉和麻醉辅助之中。在氯胺酮临床应用过程中，患者会出现恶心，情绪焦躁以及幻觉等副作用，长期使用会导致患者出现精神依赖。盐酸氯氨酮是白色结晶粉末，可以溶于水，在乙醇中也能够出现微微溶解的情况。氯胺酮是N-甲基-D 天门冬氨酸受体拮抗剂，因此常用于癫痫病的治疗，氯胺酮有两种旋光异构体，商业产品是两者的混合物。根据实验研究显示，右旋氯胺酮的麻醉力度是左旋利安铜的四倍，并发症产生的几率相较于左旋氯氨铜和消旋氯胺酮来说更低。

2 检材的采取和预处理

2.1 检材的采取

在氯胺酮进入人体之后，肝脏会产生代谢为去氯钾、氯胺酮、脱氢去甲氯胺酮和其他代谢物，进一步羟基化，形成葡萄糖酸结合物，90%会从肾脏排出，5%会从粪便排出，4%会随尿液排出。基于此，血液以及尿液生物检材中，检测到去甲氯胺酮、脱氢去甲氯胺酮同样也可以当作患者吸食氯胺酮的有效证据。在血液采集过程中，需要避免污染以及变质问题的产生，尿样采取需要保证不会被水稀释或者掺假。

人体的唾液、汗液、指甲、呕吐物和其他组织器官等，都可以用于氯胺酮以及代谢物的检测之中。根据实验过程发现，较为常见的检材是血液以及尿液，这两者萃取的效果最好。这种萃取方式以及检材方式，一般被用于近期吸毒者的检测之中，能够有效检测出是否存在毒品滥用的行为，如果尿样分析出现超时的问题，就可以利用毛发进行检测。现阶段，国内外毒物分析工作者对于毛发分析的工作十分重视，并将其应用到法庭检测的判断之中。和传统的生物检材相比，毛发的收集较为便利，并且不会侵犯受检人员的隐私，能够有效避免作假、监测时间过长的问题产生，有利于检材稳定性，保存起来也较为容易。

2.2 检材的预处理

利用离心的方式取血样的上清液，可以用于滥用物质的提取以及检测之中。对于尿样的预处理需要经过酸碱酶解，利用游离出滥用物质的原型物或者代谢物等，使用液相色谱质谱联用技术对尿液中的氯胺酮和其代谢物进行判断，先将样品通过口径0.22μm 的聚偏氟乙烯滤膜过滤，然后使用大气压化学电离质谱以及电喷雾质谱的方式进行评判，根据结果分析显示，APCI 的离子化效率高于氯胺酮、去甲氯胺酮。检测限度为0.50、0.95、0.48以及0.33ng/mL。使用高效液相色谱法对血浆中的氯胺酮和丁派卡因含量进行检测，将0.5的血浆使用反向萃取技术进行有效提取，这种萃取方式较为简便以及快速。使用色气相色谱质谱联用技术对全血中氯胺酮的含量进行检测，限度为0.05μg/mL，在0.1～5.0μg/mL 呈现出良好的线性关系。这种方法已经被广泛用于毒品以及临床分析过程之中。

在对毛发、指甲以及肝脏等检材进行收集之后，需要进行洗涤以及消化等预处理工作，进行提取，针对无法及时检测的样本，需要保存在温度为-10℃以下的冰箱之中，唾液样品需要放入低温冰箱中过夜，让其蛋白失去黏性，利用离心的方式求取上清液进行检测。

在消化前，需要使用洗涤剂以及超声波对头发进行处理，这样能够有效去除头发表面的油脂、汗液和吸附其中的滥用物质。常用的洗涤剂有0.05%二氯甲烷或者0.1%十二烷基磺酸钠溶液、甲醇等，针对毛发洗涤、水解和提取时需进行比较，0.1%的十二烷基磺酸钠、0.1%洗洁精、蒸馏水、丙酮洗涤能够有效对焊液产生的污染进行去除，洗涤之后的毛发需要加入0.1mol/L 的HCI，在15度水域中过夜水解后进行提取，使用GC-MS 检测脑中的氯胺酮含量，将用乙烷和乙醚进行萃取，能够得到100%的回收率，检出量为10ng。

3 样本的提取

3.1 液-液萃取（LLE）和液相微萃取（LPME）

在毒品实验室中，较为常用的提取分离方法为液-液萃取法，此种方法具有操作简单、重复性较好的优势，因此一般被用于毒品的提取之中，样品中加入内标并且进行简化，尿样中加入少量的NACl 固体让其进行饱和，能够有效减少溶质在水中的溶解速度，进一步提升提取的效率。乙酸乙酯一般被用为提取剂，使用的液-液萃取方法能够将有机层挥发制干，残渣在盐酸中融入用正己烷萃取，这样能够有效避免基质的影响，并且获得较高的回收率，一般来说回收率能够高达95%。但是任何事情都存在一定的两面性，如果使用乙醚、氯仿等非极性有机溶剂萃取生物样品，以及其他复杂样品中微量毒品时，会导致一些内源性组分，比如蛋白质、脂肪、组胺类将共萃入有机相，对样品中微量毒品检验的效果产生一定的影响。此外此种方式较为容易乳化，导致提取时间过长，影响目标提取物的提取效果。除此之外，LLE 所用有机溶性毒性较大，对检验人员的身体健康会造成一定的威胁，因此现阶段逐步减少了对比方法的应用。

LPME 是将一定长度的中空纤维膜的一端插在微量进样器针头上，将膜的另一端进行封闭，在萃取前将中空纤维膜接入到作为接受项取剂的有机溶液之中，让有机溶液能够被固定在中空纤维膜的微孔之中。在LPME 中代取物能够利用中空纤维微孔不溶于水的有机接受项，而进入到注射器之中。实现了液-液-液三相微萃取以及高效液相色谱联用技术测定尿样中的安非他明以及氯胺酮的方法，对萃取时间，料液、pH 和搅拌速度的影响进行了充分分析，并最终得到了萃取溶液是300μL 甲苯尿液，pH 是1.0μL的0.1mol/LHCl，搅拌速度在600r/min，萃取时间在10min 左右的条件。在该条件之中，氯胺酮的线性范围在0.01～5μg/mL。对比标准差来看偏差。不高于2%监测均线是5ng/mL，实验室使用一次液-液-液三项微萃取对尿液进行处理，能够有效消除其中的干扰成分，对安非他明以及氯胺酮进行分析，并且有机溶液消耗较少、萃取效率较高、提升了该方式的灵敏性。

3.2 固相萃取（SPE）

SPE 是指利用溶剂和固定相之间对被萃取化合物的选择性和分析系数性的差距，促进目标化合物从检材混合中分离出来的提取技术，并且广泛用于毒品提取以及净化之中，与LLE 不同的是SPE 的选择性较强，并且使用的溶剂量较少，不会出现乳化的问题，能够进行批量化的处理，一般会用于大量样品的分析以及测定之中。用SPE-LC-MS 结合数据分析的处理系统，对尿液大批量毒品进行半定量分析鉴定，样品使用SPE C18自动固相萃取，然后进行测定，10min之后数据库能够自动储存结果并且给出报告。该实验对分析结果精准性提升有重要的促进意义，并且减少了数据处理需要耗费的时间和数据之间产生的错误问题，适合工作量较大的实验室毒品检测以及常规检测，GS 法快速对尿样中存在的氯胺酮和其代谢物进行检测，萃取率高达95%，并且具有灵敏度、准确性较高的特征，使用SPE 柱对尿样进行检测，然后用阳离子化学电离气质色谱法对尿液中的氯胺酮以及去甲氯胺酮含量进行衡量，浓度在86、430、18、16/ml时，二者的回收率在53～79以及45～14之间，检出限在25ng/ml。一般来说，国外，监测技术大多是固相萃取以及自动固相萃取技术，具有疏水官能团和交换官能团的混合性，SPE 柱固相萃取肝中的吗啡回收率可以高达90%，对尿液中的氯胺酮以及去甲氯胺酮进行萃取，回收率在70%左右。

3.3 固相微萃取（SPME）和顶空固相微萃取（HSSPME）

在一定温度中，将萃取纤维头放置在密闭容器中的样品上方，一定时间后直接进行取样，这种方式能够有效检测挥发性物质，并且速度较快，杂质较少。毛发中亲脂性毒品比如尼古丁、甲基苯丙胺衍生物以及氯胺酮等检测方法，能够对在毛发中的可卡因、氯胺酮以及毒品，能够有效进行检测。固相微萃取色相色谱法结合氮磷检测器，可快速对尿样中的氯胺酮进行检测。使用聚二甲基硅氧烷SPME 萃取头顶空萃取10min，尿液之中加入1.0μg 氯胺酮，平均回收率在102.6%，检测限在1.13mg/mL，具有操作简单并且速度较快的特征。

3.4 微波辅助萃取（MAE）

微波辅助萃取是一种新型的高效分离技术，利用微波热效应的原理实现对样品的有机溶解进行加热，能够让目标组分从样品中进行分离。和传统的提取技术相比，该项技术萃取的速度较快，并且消耗的成本较低，不会出现污染问题，样品萃取净化技术发展速度以及现代化技术设备不断更新升级的过程之中，利用MAE 方式进行检测，可对尿样中的毒品进行有效提取。

4 检测方法

4.1 薄层色谱分析法（TLC）

薄层色谱分析法是法庭之中检测毒物的有效定性分析方法，能够将可疑的毒品或者提取净化的检材，在TLC 板上进行点样，并且将标准品作为对照展开显色之后，将测定被检物的Rf 值和标准样品进行比对，能够实现定性分析的需要。该技术一般应用在血清、血液、尿液、可疑药物粉末以及药片中未知药物的检测。TLC 对氯胺酮和其代谢含量进行检测，能够得到254ng/mL 的精准检测结果。但是薄层色谱操作起来较为困难，需要消耗的时间也较长。因此一般被用于法庭毒物检测之中。

4.2 气相色谱法（GC）和气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）

GC 分离效果较好，灵敏度较高，分析速度也很快，可以和电子捕获检测器火焰离子化验检测器和MS 等多种检测器综合运用，但是一般来说，GC 的监测方法应用于具有较强的热稳定性能以及挥发速度较快的特征，物质监测过程中，大多数物品的监测可以使用气相-色谱法进行监测。GC-MS 是一种较为成熟的定型技术，一般使用免疫法对阳性结果样品进行分析。一般应用于个别急性大的毒品利用衍生化处理，也可以使用气相色谱进行分析。氯胺酮GC 或者MS 进行检测时，色谱行为检测的程度较差，柱后衍生对其色气相色谱行为提升有重要的帮助性作用。

4.3 高效液相色谱法（HPLC）

高效液相色谱一般用于热稳定性较差，挥发能力较差并且分子量较大的毒品分离检测过程中，但是却由于缺乏高灵敏度的通用型检测器，因此在实验过程中会消耗数量较多的有机溶液，针对分子质量在2 000以上的物质之中，检测效率降低，分离速度也较慢。

5 结束语

现阶段我国法治建设在不断完善发展的过程之中，在此背景下，想要改善现阶段存在的贩毒问题，提升我国环境建设以及社会建设质量，就需要加强毒品工作的重视。这一时期，我国发展的进程之中对微量毒品的监测生物检材提取分离检验的要求较高，在净化提取过程之中，液-液萃取存在一系列的弊端，因此使用效率不断下降。在提取净化过程之中，较为常见的应用方式是固相萃取，顶空固相微萃取的使用较为简单并且便捷，所需样品数量较少，不用进行衍生化，因此毒品分析过程之中也该项技术成为了应用较广的技术。微波辅助萃取技术，是近两年较为常见的检测技术，具有检测速度快、提取效率高的特征，在检测方法上，气相色谱以及液相色谱的检测结果精准度最高，一般与质谱进行联用。应加强对于灵敏度较高、特异性较好的产品的深入分析研究，并且使其进行快速检测，并且促进其向自动化分析的方向所转变，为我国毒品检测发挥一定的帮助。