IL-17、IL-23 及Eotaxin-2 水平检测在大疱性类天疱疮病情评估中的应用

杨贝贝 郑小菊 韩义明

大疱性类天疱疮属于自身免疫性皮肤病，在65 岁以上的老年人中高发，部分年轻人及儿童也可发病，影响患者生活质量［1］。白细胞介素-17（Interleukin -17，IL-17）及白细胞介素-23（Interleukin-23，IL-23）均由CD4+T 淋巴细胞亚群中的Th17细胞分泌而来［2］。已有较多研究发现IL-17、IL-23在类风湿性关节炎、过敏性鼻炎、银屑病等慢性炎症疾病中呈异常表达状态［3］。近年来有研究发现，IL-17、IL-23 可能在大疱性类天疱疮的发病过程中发挥至关重要的作用，可能通过多种激酶途径，促进炎症细胞释放，引发炎症反应，加重病情［4］。嗜酸性粒细胞趋化因子（Eotaxin-2）是CC型趋化因子家族的成员，是目前发现的具有超强嗜酸性粒细胞趋化活性作用的因子，其与支气管哮喘、变应性鼻炎等疾病的发生密切相关［5］，但Eotaxin-2 与大疱性类天疱疮的关系研究较为缺乏。本研究旨在探讨IL-17、IL-23 及Eotaxin-2 水平检测在大疱性类天疱疮病情评估中的应用，现将研究报告整理如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2014 年3 月至2020 年3 月于信阳职业技术学院附属医院进行治疗的大疱性类天疱疮患者的临床资料。纳入标准：①存在皮肤红斑、水疱、疱壁厚、不易破等临床症状，均经病理组织检查证实为大疱性类天疱疮［6］；②纳入研究前一个月内无大剂量糖皮质激素和/或免疫抑制剂治疗史。排除标准：①合并嗜酸性粒细胞增多症、哮喘、荨麻疹者；②患有寄生虫病、湿疹、特异性皮炎的患者；③合并肿瘤、血液病或相关性皮肤病者。

本研究最终纳入104 例患者，设为观察组：其中男49 例，女55 例；年龄32～85 岁，平均年龄（73.83±9.54）岁。选取同期在本院进行健康体检的健康者110 名设为对照组，男52 名，女58 名；年龄35～87 岁，平均年龄（74.25±9.84）岁。两组一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05）。本研究经本院医学伦理委员会批准，患者已签署知情同意书。

1.2 方法

观察组于入院后次日采集空腹肘前静脉血5 mL，对照组于体检当日采集空腹肘前静脉血5 mL，将标本放入4℃冰箱内进行凝血反应0.5 h，以3 000 r/min 离心15 min（r=10 cm），提取上层血清冻存于-80℃冰箱待测。统一将冻存样品取出，预先置入4℃冰箱缓慢融化12 h，测试前0. 5 h 再将其与试剂盒一同放入室温环境进行温度平衡。IL-17、IL-23 及Eotaxin-2 水平测试均应用酶联免疫吸附法进行检测。试剂盒购自贝克曼库尔特商务（中国）有限公司。具体操作步骤参见试剂盒说明书。

1.3 观察指标

比较各组间IL-17、IL-23 及Eotaxin-2 水平，并分析IL-17、IL-23、Eotaxin-2 水平与临床严重程度评分（Autoimmune bullous skin disorder intensity score，ABSIS）［7］的相关性。由1 名皮肤科医师对ABSIS 评分进行评定：0～1 分，基本无活动；2～3分，轻度活动；4～5 分，中度活动；6～7 分，重度活动。根据ABSIS 评分将观察组分为轻度40 例、中度例33 例、重度31 例。通过ROC 曲线分析IL-17、IL-23、Eotaxin-2 及三者联合检测对大疱性类天疱的诊断价值。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0 统计软件进行统计分析，计量资料采用（±s）表示，组间比较采用t检验，多组间比较采用F检验；采用Pearson 直线相关分析IL-17、IL-23、Eotaxin-2 水平与ABSIS 评分的相关性；绘制ROC 曲线，计算AUC，分析IL-17、IL-23、Eotaxin-2 及三者联合检测对大疱性类天疱的诊断价值；以P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组IL-17、IL-23、Eotaxin-2 水平比较

观察组IL-17、IL-23、Eotaxin-2 水平均显著高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组IL-17、IL-23、Eotaxin-2水平比较［（±s），（pg/mL）］Table 1 Comparison of the levels of IL-17，IL-23 and Eotaxin-2 between the two groups［（±s），（pg/mL）］

表1 两组IL-17、IL-23、Eotaxin-2水平比较［（±s），（pg/mL）］Table 1 Comparison of the levels of IL-17，IL-23 and Eotaxin-2 between the two groups［（±s），（pg/mL）］

组别观察组对照组t 值P 值n 104 110 IL-17 139.32±25.89 23.67±3.10 46.505＜0.001 IL-23 55.89±4.61 31.54±2.36 48.842＜0.001 Eotaxin-2 288.01±56.52 26.45±5.24 48.324＜0.001

2.2 不同病情严重程度的患者IL-17、IL-23、Eotaxin-2 水平比较

3 组IL-17、IL-23、Eotaxin-2 水平比较：轻度组＜中度组＜重度组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 不同病情严重程度的患者IL-17、IL-23、Eotaxin-2水平比较［（±s），（pg/mL）］Table 2 Comparison of IL-17，IL-23 and Eotaxin-2 levels in patients with different disease severity［（±s），（pg/mL）］

表2 不同病情严重程度的患者IL-17、IL-23、Eotaxin-2水平比较［（±s），（pg/mL）］Table 2 Comparison of IL-17，IL-23 and Eotaxin-2 levels in patients with different disease severity［（±s），（pg/mL）］

注：与轻度组比较，aP＜0.05；与中度组比较，bP＜0.05。

组别轻度组中度组重度组F 值P 值n 40 33 31 IL-17 122.45±19.34 146.69±23.69a 153.24±36.68ab 13.290＜0.001 IL-23 48.41±3.45 52.25±5.07a 69.45±5.62ab 189.300＜0.001 Eotaxin-2 272.48±51.23 287.74±55.69a 308.34±64.23ab 3.490 0.034

2.3 IL-17、IL-23、Eotaxin-2 水平与ABSIS 评分的相关性

经Peɑrson直线相关分析显示：IL-17、IL-23、Eotaxin-2 水平与ABSIS 评分均呈正相关（R=0.758，P=0.021；R=0.569，P=0.005；R=0.727，P=0.013）。见图1。

图1 IL-17、IL-23、Eotaxin-2 水平与ABSIS 评分的相关性分析Figure 1 Correlation analysis of IL-17，IL-23，Eotaxin-2 levels and ABSIS score

2.4 联合IL-17、IL-23、Eotaxin-2 检测对大疱性类天疱的诊断价值

联合IL-17、IL-23、Eotaxin-2 灵敏度（0.923）、特异度（0.943）、AUC（0.998）均高于单一指标检测（P＜0.05）。见表3、图2。

表3 联合IL-17、IL-23、Eotaxin-2 检测对大疱性类天疱的诊断价值分析Table 3 Analysis of the diagnostic value of combined IL-17，IL-23 and Eotaxin-2 detection for bullous pemphigoid

图2 预测价值Figure 2 Predictive value

3 讨论

大疱性类天疱疮病理表现为表皮下水疱，可伴有多种炎性细胞浸润，患者常伴有不同程度的皮肤瘙痒。对大疱性类天疱疮患者实施有效的、早期的治疗，控制患者病情，促进预后意义重大。目前，大疱性类天疱疮发病机制尚未明确，但有学者发现多种细胞因子及嗜酸性粒细胞与免疫性疾病之间的关系错综复杂，T 细胞介导的免疫学说参与大疱性类天疱疮的发病机制已被证实［8］。IL-17是Th17 细胞中最重要的细胞因子之一，大多数为CD4+T 细胞分泌，但部分IL-17 也可由嗜中性粒细胞等多数固有免疫细胞产生，其表达于肝肾、成骨细胞等多种组织中［9］。本研究发现，大疱性类天疱疮患者血清中IL-17 表达水平较高，且随着患者病情的加重IL-17 水平逐渐升高，考虑原因为：随着病情的发展，机体Th 免疫系统逐渐活跃，其中Th2 细胞活化、嗜酸性粒细胞聚集，促进慢性炎症的发生，从而导致IL-17 水平升高，最终促使皮损中水疱形成。

国外研究发现，IL-23 具有独特的免疫调节作用，可诱导幼稚CD4+T 细胞新型Th 细胞分化，通过不同T 细胞亚群发挥作用，产生大量促炎因子IL-17，同时可通过促进多种炎症介质的分泌和释放而参与炎症损伤［10-11］。既往研究显示，IL-23 在急性感染早期机体细胞与微生物接触几小时内便产生，细胞因子迅速聚集于感染病灶以控制感染，若IL-23 免疫调节功能异常，会破坏大疱性类天疱疮患者免疫耐受功能，加重病情［12-13］。本研究中，大疱性类天疱疮患者血清IL-23 水平较对照组明显升高，且因病情程度不同，轻度组、中度组、重度组之间表达存在明显差异，由此认为，IL-23 介导的免疫通路可能参与了大疱性类天疱疮致病过程，且与疾病活动性关系密切。

程秀芳等［14］报道，Eotaxin-2 能促进嗜酸性粒细胞与内皮细胞黏附，Eotaxin-2 表达水平上调会使嗜酸性粒细胞快速在炎症部位聚集，且文章中进一步分析Eotaxin-2 与患者病情轻重的关系发现：Eotaxin-2 与疾病早期活动密切相关。而本文研究数据结果显示：观察组Eotaxin-2 水平显著高于对照组，且观察组中轻度组＜中度组＜重度组，进一步证实了上述程秀芳等学者的研究观点。提示Eotaxin-2 可作为标志性实验室指标来监测大疱性类天疱疮患者病情变化，指导临床治疗，以改善患者生活质量。ABSIS 评分是评价大疱性皮肤疾病病情严重程度的有力工具［15］。本文研究结果发现，IL-17、IL-23、Eotaxin-2 水平与ABSIS评分呈正相关，证实三者表达水平可反应大疱性类天疱疮病情的严重程度。进一步ROC 曲线结果 显 示：联 合IL-17、IL-23、Eotaxin-2 灵 敏 度（0.923）、特异度（0.943）、AUC（0.998）均高于单一指标检测，表明加强三项指标联合检测能有效诊断大疱性类天疱疮。

综上所述，IL-17、IL-23 及Eotaxin-2 大疱性类天疱疮发生、发展的关系密切，三者联合检测可为临床诊断该疾病、判断病情、评估预后提供更好的理论依据。