神经导向因子-1、信号转导及转录激活因子1在急性白血病患者中的表达及与临床特征的关系

陈晓昕，袁文华，葛唱

郑州大学第一附属医院儿童重症监护室，郑州 450052

白血病是一类造血干细胞的恶性克隆性疾病[1]。中国白血病发病率为（3～4）/10万，且男性略多于女性[2]。白血病的明确病因至今未明，许多因素被认为与白血病发生有关，病毒可能是主要因素，此外还有电离辐射、化学药物或毒物、遗传因素等[3]。按照病程和白血病细胞的成熟度进行分类，可分为急性白血病和慢性白血病。其中急性白血病以起病急、进展慢、病程可长达数年为特点，发病时骨髓中异常的原始细胞及幼稚细胞大量增殖并广泛浸润肝脏、脾脏、淋巴结等，抑制正常造血[4]。临床上急性白血病以进行性贫血、持续发热或反复感染、出血和组织器官浸润等为主要表现，骨髓和外周血中以原始细胞和早期幼稚细胞为特征[5]。神经导向因子（neuroguidance factor，Netrin）是一类高度保守的、与层粘连蛋白相关的可分泌蛋白和膜结合蛋白。有研究发现，Netrin可参与血管和淋巴管的生成，同时在肿瘤中也发挥着一定的作用[6]。神经导向因子-1（neuroguidance factor-1，Netrin-1）是Netrin家族的一员，主要位于17号染色体上，能参与肿瘤细胞的生长和侵袭[7]。信号转导及转录激活因子1（signal transduction and activator of transcription 1，STAT1）是一种信号转导的重要蛋白，其编码基因位于2号染色体上，既能参与正常生理功能，又与肿瘤的形成有着密切的联系，能引起细胞的分化和凋亡[8]。但目前对于Netrin-1、STAT1与急性白血病发生发展的关系尚不明确，急性白血病患者中Netrin-1、STAT1的相关报道较少，因此本研究探讨急性白血病患者中Netrin-1、STAT1的表达及其与临床特征的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2020年1月至2022年1月郑州大学第一附属医院收治的急性白血病患者的病历资料。纳入标准：①符合《急性白血病》[9]中的诊断标准；②年龄＜14岁；③临床资料完整。排除标准：①严重贫血，血红蛋白浓度低于60 g/L；②凝血功能障碍；③存在其他恶性肿瘤。根据纳入、排除标准，共纳入45例急性白血病患者作为疾病组。另选取40例同期健康体检人群作为对照组。两组研究对象各临床特征比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）（表1），具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准通过，所有患者均知情同意并签署知情同意书。

表1 两组研究对象的临床特征

1.2 检测方法

①采集所有研究对象静脉血4 ml，室温静置15 min，以 3000 r/min离心 15 min，取上清，置于-80℃冰箱中，等待检测。采用酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测血清中Netrin-1水平，严格按照Netrin-1 ELISA试剂盒说明步骤进行检测。②采集所有研究对象静脉血5 ml，加入肝素抗凝，以3000 r/min离心15 min，4℃下静置10 h，经过漂洗后进行标记，并在37℃下静置2 h，然后进行染色，最后采用荧光测定仪进行测定，采用蛋白质印迹（Western blot）法检测STAT1。③采集疾病组患者静脉血5 ml，检测白细胞及血小板计数。白细胞正常值为（4～10）×109/L，血小板正常值为（100～300）×109/L。

1.3 观察指标

比较两组研究对象Netrin-1、STAT1的表达水平；比较不同白细胞和血小板水平疾病组患者Netrin-1、STAT1的表达水平；比较不同Netrin-1、STAT1表达情况疾病组患者的临床特征，Netrin-1＜70 ng/ml为低表达，≥70 ng/ml为高表达，STAT1＜6.4为低表达，≥6.4为高表达。

1.4 统计学分析

采用SPSS 24.0统计软件进行数据分析，符合正态分布的计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数及率（%）表示，组间比较采用χ2检验；以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Netrin-1、STAT1水平的比较

疾病组患者Netrin-1、STAT1水平均明显高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.01）。（表2）

表2 两组研究对象Netrin-1、STAT1水平的比较（±s）

表2 两组研究对象Netrin-1、STAT1水平的比较（±s）

注：*与对照组比较，P＜0.01

组别疾病组（n=4 5）对照组（n=4 0）7 2.3 5±4.6 5*1 1.2 3±4.1 4 6.2 1±0.2 3*3.1 0±0.1 1 N e t r i n-1（n g/m l）S T A T 1

2.2 不同白细胞和血小板水平疾病组患者Netrin-1、STAT1表达水平的比较

白细胞≥50×109/L、血小板＜30×109/L疾病组患者Netrin-1表达水平明显低于白细胞＜50×109/L、血小板（30～100）×109/L患者，差异均有统计学意义（t=33.884、57.688，P＜0.01）；白细胞≥50×109/L、血小板＜30×109/L疾病组患者STAT1表达水平明显高于白细胞＜50×109/L、血小板（30～100）×109/L患者，差异均有统计学意义（t=68.381、68.299，P＜0.01）。（表3）

表3 不同白细胞和血小板水平疾病组患者Netrin-1、STAT1的表达水平

2.3 不同Netrin-1、STAT1表达情况疾病组患者临床特征的比较

Netrin-1、STAT1高表达疾病组患者贫血、出血、发热、浸润发生率均明显高于Netrin-1、STAT1低表达患者，差异均有统计学意义（P＜0.01）。（表4）

表4 不同Netrin-1、STAT1表达情况疾病组患者临床特征的比较[n（%）]

3 讨论

白血病作为造血组织的恶性肿瘤，起源于骨髓单个造血祖细胞或干细胞的恶性病变[10]。白血病在中国恶性肿瘤病死率中居男性第六位，女性第八位，但经过现代技术治疗，已有不少患者获得病情缓解，可长期生存，甚至获得治愈[11]。白血病主要特点为骨髓中白血病细胞肿瘤性增生，能侵犯人体的每个脏器，继而产生相应的临床症状[12]。急性白血病是指以起病急、贫血、发热、消瘦、肝脾及淋巴结肿大、骨痛尤其胸骨压痛、白细胞计数增高、血片中有原始细胞和幼稚细胞、骨髓增生明显等为主要表现的疾病[13]。急性白血病病情进展迅速，自然病程仅有数周至数月，一般可根据白血病细胞归属分为急性髓系白血病和急性淋巴细胞白血病两大类[14]。

Netrin-1是Netrin家族中最早在胚胎发育期的细胞和轴突迁移中被发现的，由600多个氨基酸组成，其功能结构区域有3个，可在血管内皮上进行表达，以调节炎症细胞的迁移和分泌[15]。Netrin-1的作用主要与其受体有关，具有双向作用，其受体具有吸引Netrin-1的作用。有研究表明，Netrin-1可促进血管内皮生长因子和血小板生长因子的表达，在血管生长和缺血中起到保护作用[16]。STAT1是在细胞内以单体形式存在于STAT家族中的7个成员之一，主要分布于组织与细胞内，其基因位于人2号染色体上，在小鼠基因中，存在于1号染色体上[17]。STAT1为一种由750多个氨基酸排列组成的蛋白质，分为6个功能区域，分子量为91 kD[18]。STAT1的DNA在结合区内有免疫球蛋白折叠，有317～488个氨基残基，其激活主要通过干扰素的作用。STAT1既能参与机体的抗感染功能，又能对细胞的增殖、分化及凋亡进行调节，同时对肿瘤发生发展有抑制作用[19]。激活后的STAT1可产生一些类似细胞因子，在细胞因子中具有一定的特异性，可与不同的细胞因子组成信号，转导不同的刺激。在本研究中，急性白血病患者Netrin-1、STAT1水平均明显高于非急性白血病患者，表明Netrin-1、STAT1对急性白血病患者具有一定的作用。李永婧等[20]运用ELISA法检测急性淋巴细胞白血病患儿血清Netrin-1表达水平达70 ng/ml，显示Netrin-1在患儿中存在异常表达，且不同浓度的Netrin-1对患儿的影响不同。孙琳琳等[21]研究表明，STAT1在白血病细胞的分化中产生一定的作用，且STAT1对白细胞的分化起调节作用，提示STAT1在急性白血病患者中存在异常表达。有研究发现，Netrin-1与白细胞和血小板存在一定的联系，因Netrin-1浓度的不同，白细胞和血小板的表达也不同，当白细胞水平下降时，Netrin-1表达水平会升高，同时，当患者血小板下降时，Netrin-1表达水平也会随之下降[22]。有相关文献表明，在白血病患者的外周血白细胞的检测中发现STAT1的存在，表明在白细胞中存在激活的STAT1，但在健康人群中没有检测到STAT1的激活，激活的STAT1活化炎症细胞，可分泌大量的血小板源性生长因子，当机体受损时，STAT1可调控血小板的功能，促进血小板释放[23]。本研究结果显示，当白细胞≥50×109/L、血小板＜30×109/L时，急性白血病患者Netrin-1表达水平显著降低，STAT1表达水平显著增高。Netrin-1、STAT1水平与临床特征的关系分析结果显示，Netrin-1、STAT1高表达患者贫血、出血、发热、浸润发生率均明显高于Netrin-1、STAT1低表达患者。

综上所述，急性白血病患者Netrin-1、STAT1的表达与临床特征关系密切，Netrin-1、STAT1高表达时，急性白血病患者贫血、出血、发热、浸润发生率均较高。由于本研究样本量较小，关于其在临床特征中的更多问题需要更大样本的临床研究。