78%乙·扑·滴辛酯乳油高效液相色谱分析方法研究

郑 杨，李 岩

(黑龙江省植检植保站，黑龙江 哈尔滨 150090)

1 前言

乙草胺、扑草净是土壤封闭处理除草剂，可防除玉米、大豆等旱田一年生禾本科和阔叶杂草[1，2]。2，4-滴异辛酯是选择性苗后茎叶处理触杀型除草剂，可防治一年生或多年生阔叶杂草，是2，4-滴丁酯的替代产品[3]，与2，4-滴丁酯相比，具有挥发性小，不易漂移的优点，药害发生率低，相对更安全，在生产上有更大的推广价值[4]。

78%乙·扑·滴辛酯乳油是黑龙江梅亚种业有限公司的三元复配除草剂，封杀相结合，灭草率大大提高，速效性明显加强，可防治玉米田中绝大部分的杂草，具有杀草谱更广、用药量低的优点。

目前国内对乙草胺、扑草净和2，4-滴异辛酯的复配制剂分析方法尚未见报道。本文采用高效液相色谱法对乙草胺、扑草净和2，4-滴异辛酯进行定性和定量分析。该方法操作快速、简便、准确，分离效果好，准确度和精密度均能达到定量分析的要求，适用于农药产品含量分析。

2 试验部分

2.1 试剂和溶液 乙腈：色谱纯；水：超纯水(电阻率18.2 MΩ·cm，25℃)；冰乙酸：分析纯；扑草净：99.6%，乙草胺：99.1%，伯酰胺：99.0%；2，4-滴异辛酯：98.5%；试样：78%乙·扑·滴辛酯乳油。

2.2 仪器 高效液相色谱仪：Agilent 1260，具有二级管阵列检测器和自动进样器，色谱工作站；色谱柱：250mm×4.6mm(i.d)不锈钢柱，内装Zorbax SB-C18、5μm填充物；过滤器：滤膜孔径约0.45um。

2.3 液相色谱操作条件 流动相：乙腈：0.3%乙酸水溶液=70：30(V/V)(0～8min)，85：15(V/V)(8～23min)；流量：1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长：236nm；进样体积：5.0μL；保留时间：伯酰胺约3.6min，扑草净约4.8min，乙草胺约6.7min，2，4-滴异辛酯约18.8min。

上述液相色谱操作条件，系典型操作参数，可根据不同仪器特点，对给定的操作参数作适当调整，以期获得最佳效果。非分析物空白、标样和样品高效液相色谱图(图1、图2、图3)。

图1 非分析物空白高效液相色谱图

图2 乙草胺·扑草净·2，4-滴异辛酯标样高效液相色谱图

图3 78%乙·扑·滴辛酯乳油高效液相色谱图

2.4 测定步骤

2.4.1 标样溶液的配制 准确称取伯酰胺标样10.5mg(精确至0.2mg)，扑草净标样21.4mg(精确至0.2mg)，分别置于100mL容量瓶中，加入乙腈溶解，超声10min，恢复至室温后用乙腈稀释至刻度，摇匀备用。称取乙草胺标样60.7mg(精确至0.2mg)和2，4-滴异辛酯标样24.9mg(精确至0.2mg)，置于100mL容量瓶中，用移液管分别加入上述伯酰胺、扑草净标准溶液10mL，加入乙腈溶解，超声10min，恢复至室温后用乙腈稀释至刻度，摇匀，过滤备用。

2.4.2 试样溶液的配制 称取试样约104.4mg(精确至0.2mg)，置于100mL容量瓶中，加入乙腈溶解，超声10min，恢复至室温后用乙腈稀释至刻度，摇匀，过滤备用。

2.4.3 测定 在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，待各针相对响应值变化≤1.5%时，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进样测定。

2.4.4 计算 将测得的2针试样溶液及试样溶液前后2针标样溶液中(伯酰胺、扑草净、乙草胺、2，4-滴异辛酯)的峰面积值分别进行平均，按下式计算其质量分数：

(1)

式中：

A1—标样溶液中(伯酰胺、扑草净、乙草胺、2，4-滴异辛酯)峰面积的平均值；

A2—试样溶液中(伯酰胺、扑草净、乙草胺、2，4-滴异辛酯)峰面积的平均值；

m1—标样的质量，g；

m2—试样的质量，g；

P —标样中(伯酰胺、扑草净、乙草胺、2，4-滴异辛酯)的质量分数，%；

X—标样的稀释倍数(乙草胺和2，4-滴异辛酯为1，扑草净和伯酰胺为10)。

3 结果分析

3.1 色谱条件的选择 通过Agilent 1260高效液相色谱仪的光谱数据采集功能，获得扑草净、乙草胺、2，4-滴异辛酯的紫外吸收图(图4)。从图中看到乙草胺、扑草净、2，4-滴异辛酯的最大吸收分别在220nm、225nm和236nm附近，根据样品中各成分含量及出峰时间，为减少溶剂的干扰，兼顾较大吸收波长，将检测波长定为236nm。

图4 乙草胺、扑草净、2，4-滴异辛酯紫外吸收谱图

色谱柱选择常用的反相填料ZORBAX SB-C18柱。依据乙草胺、扑草净和2，4-滴异辛酯理化性质，选择乙腈为溶剂溶解样品，三混制剂成分复杂，选择乙腈和酸水为流动相，按不同比例在色谱柱上进行选择比较。经测定，当流速为1.0mL/min时，在乙腈：乙酸水溶液=70：30(V/V)条件下，伯酰胺、扑草净、乙草胺能有效分离，出峰时间较为合适；2，4-滴异辛酯在乙腈：乙酸水溶液=85：15(V/V)条件下，峰形对称，基线平稳，分析时间较短。

3.2 分析方法的线性相关性试验 称取扑草净标样22.8mg(精确至0.2mg)于100mL容量瓶中，用乙腈超声溶解并稀释至刻度，静止备用。称取乙草胺标样58.6mg(精确至0.2mg)、2，4-滴异辛酯标样26.4mg(精确至0.2mg)置于同一50mL容量瓶中，用移液管加入扑草净标准溶液10mL，用乙腈超声溶解并稀释至刻度，静止备用。用移液管分别移取上述标准溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL于10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度摇匀后备用。按上述条件进行测定，以进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得线性方程为y扑草净=66 732.81x+3.44，相关系数为0.999 92；y乙草胺=2 279.52x+5.24，相关系数为0.999 97；y2，4-滴异辛酯=6 401.99x-3.93，相关系数为0.999 94。扑草净、乙草胺、2，4-滴异辛酯的线性相关性试验结果(表1)，线性关系(图5、图6、图7)。

表1 分析方法的线性相关性试验结果

图7 2，4-滴异辛酯线性关系图

3.3 方法精密度的测定 在上述色谱操作条件下对同一样品平行测定5次，扑草净、乙草胺、2，4-滴异辛酯的标准偏差分别为0.02、0.09、0.11；变异系数分别为0.93%、0.17%、0.54%(表2)。

表2 分析方法的精密度试验结果

3.4 方法准确度的测定 按照配方比例要求，将除原药以外的所有填料助剂混匀，做制剂空白，按照制剂标称值在制剂空白中添加有效成分，合成5个制剂样品，在上述色谱操作条件下进行分析，测得扑草净、乙草胺、2，4-滴异辛酯的平均加标回收率分别为为99.56%、99.91%、99.83%(表3)。

表3 分析方法的准确度试验结果

3.5 方法特异性 对样品组分色谱峰进行峰纯度试验，通过工作站软件计算匹配度，扑草净、乙草胺、2，4-滴异辛酯的峰纯度因子分别为999.68、999.41、999.84，特异性符合要求。

4 结论

试验建立了高效液相色谱法检测78%乙·扑·滴辛酯乳油中有效成分的分析方法。上述试验结果表明，乙草胺、扑草净和2，4-滴异辛酯在测试浓度范围内线性关系良好，方法准确度和精密度较高，具有简便、快速的优点，是产品质量控制的有效可行的分析方法。