非小细胞肺癌组织中Notch1、PTEN表达相关性及其与患者预后的关系

张媛媛，马静，何会娜，郭银，李香兰，池菲

1河北省胸科医院急诊科，石家庄 050041；2河北省胸科医院消化内科；3河北省胸科医院护理部；4河北医科大学第四医院放疗科

非小细胞肺癌（NSCLC）是肺癌最主要的发病类型，临床常见。随着分子靶向治疗、化疗等技术的发展，NSCLC的治疗效果虽有提高，但整体效果仍不理想［1-2］。NSCLC的发生发展与细胞信号转导异常、抑癌基因与促癌基因失衡、细胞周期异常关系密切［3-4］。有研究发现，缺刻基因1（Notch1）在NSCLC组织中高表达，其可能经miR-582-5p靶向调控进而影响肺肿瘤细胞的增殖及侵袭，Notch1可能在NSCLC病理发展中起促癌作用［5］。另有研究显示，第10号染色体同源缺失性磷酸酶张力蛋白基因（PTEN）在NSCLC中低表达，其可能在NSCLC发生、转移、浸润过程中发挥抑制作用［6］，且Notch1可通过调节PTEN相关通路进而影响平滑肌细胞的增殖和迁移［7］。但关于Notch1、PTEN在NSCLC中是否相关，以及二者与NSCLC患者预后的关系研究较少。基于此，本研究通过测定Notch1、PTEN在NSCLC中的表达情况，分析NSCLC组织Notch1、PTEN表达的相关性及其与患者预后的关系，以期为NSCLC患者的预后评估提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料经河北省胸科医院医学伦理委员会批准（伦理批号：201612-0206），选取2017年1月—2019年1月于我院行肿瘤根治性切除术的原发性NSCLC患者为研究对象。纳入标准：①符合原发性NSCLC诊断标准［8］；②术前未进行放化疗；③临床资料完整。④受试者及家属签署知情同意书。排除标准：①合并其他恶性肿瘤、严重脏器疾病；②有手术禁忌证；③无法配合检查及随访，依从性差。共收集符合标准的原发性NSCLC患者134例，其中男78例、女56例，年龄（59.76±10.38）岁（＜60岁52例、≥60岁82例），TNM分期Ⅰ期42例、Ⅱ～Ⅲ期92例，肿瘤大小≤3 cm 60例、＞3 cm 74例，分化程度低分化56例、中高分化78例，手术方式肺叶切除122例、单侧全肺切除12例，病理类型腺癌56例、鳞癌60例、其他18例，淋巴结转移72例、未转移62例。纳入患者在术后随访的36个月中，存活72例、死亡62例。1.2 NSCLC及癌旁组织Notch1、PTEN表达检测

采用免疫组织化学法。在NSCLC患者进行病理活检时，分别留取肿瘤组织及相应癌旁组织（距肿瘤组织＞4 cm），清洗后置入10%甲醛中制成石蜡标本切片，采用免疫组化SP法染色，严格按照试剂盒说明书进行操作。一抗为兔抗人Notch1抗体（ab245686，英 国Abcam公 司）、PTEN抗 体（ab154812，英国Abcam公司），二氨基联苯胺显色30 s，苏木素复染，利用自来水、蒸馏水清洗后，运用不同浓度乙醇脱水，封片，显微镜（Ti2，日本尼康公司）下拍照。使用阳性细胞比例及染色程度评分的乘积来评价Notch1、PTEN表达情况。阳性细胞比例＜25%为0分、25%～＜50%为1分、50%～＜75%为2分、≥75%为3分，染色程度无色为0分、淡黄色为1分、棕黄色为2分、黄褐色为3分，将阳性细胞比例评分×染色程度评分＜3评价为Notch1、PTEN表达阴性、≥3评价为Notch1、PTEN表达阳性。

1.3 统计学方法采用SPSS25.0统计软件。计量资料采用Kolmogorov-Smirnov进行正态性分析，符合正态分布的以±s表示，组间比较行t检验；计数资料以例（%）表示，数据比较行χ2检验。采用Spearman相关分析法分析NSCLC组织中Notch1与PTEN的相关性；Log-Rank检验分析NSCLC组织Notch1、PTEN蛋白表达与患者预后的关系；COX回归分析NSCLC患者预后的影响因素，取单因素COX回归分析结果P＜0.001的临床指标进一步纳入多因素COX回归分析，总结影响NSCLC患者预后的独立危险、保护因素。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 NSCLC及癌旁组织Notch1、PTEN表达比较

NSCLC组织中Notch1表达阴性42例（31.34%）、阳性92例（68.66%），PTEN表 达 阴 性100例（74.63%）、阳性34例（25.37%）；癌旁组织中Notch1表达阴性118例（88.06%）、阳性16例（11.94%），PTEN表 达 阴 性11例（8.21%）、阳 性123例（91.79%）；NSCLC组织Notch1表达阳性率高于癌旁组织，PTEN表达阳性率低于癌旁组织（P均＜0.01）。2.2 NSCLC组织Notch1与PTEN表达的相关性Spearman相关分析显示，NSCLC组织中Notch1表达与PTEN表达呈负相关（r=-0.345，P＜0.01）。

2.3 Notch1、PTEN表达阳性与阴性NSCLC患者预后比较Notch1阴性、Notch1阳性的NSCLC患者平均生存时间分别为33.10、28.51个月，Notch1阴性患者平均生存时间高于Notch1阳性患者；PTEN阴性、PTEN阳性的NSCLC患者平均生存时间分别为28.99、32.77个月，PTEN阴性患者平均生存时间低于PTEN阳性患者（P均＜0.01）。Log-Rank检验显示，Notch1阴性患者36个月累积生存率高于Notch1阳性患者，PTEN阴性患者36个月累积生存率低于PTEN阳性患者（P均＜0.01）。见图1、2。

图1 NSCLC组织Notch1表达与NSCLC患者预后的关系

图2 NSCLC组织PTEN表达与NSCLC患者预后的关系

2.4 Notch1、PTEN蛋白表达与NSCLC患者预后的关系单因素COX分析显示，TNM分期Ⅱ～Ⅲ期、淋巴结转移、Notch1阳性是影响NSCLC患者预后的危险因素，低分化程度、PTEN阳性是影响NSCLC患者预后的保护因素（P均＜0.001）；多因素COX分析显示，TNM分期Ⅱ～Ⅲ期、淋巴结转移、Notch1阳性是影响NSCLC患者预后的独立危险因素，PTEN阳性是影响NSCLC患者预后的独立保护因素（P均＜0.01）。见表1。

表1 影响NSCLC患者预后的COX回归分析结果

3 讨论

NSCLC是病死率极高的呼吸系统恶性肿瘤，手术是目前治疗NSCLC的主要手段，但具有创伤性且术后复 发 率高，致使NSCLC患者预 后 不良［9-10］。Notch信号通路是保守性较高的信号通路，与肿瘤发病进程有关，在不同情况下，分别发挥抑癌或促癌作用。Notch信号通路中关于Notch1受体的研究最多，Notch1可通过细胞间相互作用进而调控细胞增殖、生长、分化，并在调节血管生成方面起到重要作用［11-12］。研究发现，靶向沉默Notch1可能下调下游的DNA结合蛋白Hes-1，进而降低NSCLC干细胞活性，加 速细胞 凋亡［13］；另 有研究 显 示，Notch1在NSCLC患者中表达失调，Notch1阳性表达的NSCLC患者比阴性表达患者预后差，其可辅助预测NSCLC患者预后情况［14］。以上研究提示，Notch1在NSCLC中发挥癌基因作用。本研究结果显示，NSCLC组织中Notch1阳性表达率高于癌旁组织，与LIU等［5］研究趋势一致，提示Notch1可能通过调节相关信号通路促进癌细胞增殖和血管生成，影响NSCLC病理发展。

PTEN是一种肿瘤抑制基因，其可维持免疫稳态，参与胚胎发育并调控细胞分化、凋亡、黏附、迁移、增殖等过程，影响多种肿瘤发生发展［15-16］。研究显示，PTEN在NSCLC中表达下调，其可能通过促进G0/G1期阻滞及细胞凋亡进而抑制NSCLC细胞生长，可能是治疗NSCLC的潜在靶基因［17］。李晓燕等［18］研究发现，PTEN在NSCLC组织中表达缺失率较高，其与NSCLC发病进程关系密切，可作为评估NSCLC预后的标志物。以上研究提示，NSCLC发病进程可能与PTEN表达失调有关。本研究结果显示，NSCLC组织PTEN阳性表达率低于癌旁组织，与张秀义等［6］研究相符。这提示PTEN可能在NSCLC中发挥抑癌作用，测定肿瘤组织PTEN表达水平有利于判定NSCLC患者疾病严重程度，从而制定较为精准的治疗方案。

本研究发现，NSCLC患者NSCLC组织中Notch1表达与PTEN表达呈负相关，提示Notch1可能与PTEN共同影响NSCLC的发生发展过程。我们据此推测，PTEN可能作为Notch1信号通路中的下游基因，与Notch1共同影响NSCLC细胞增殖、凋亡，进而影响NSCLC发生发展，但具体机制有待深入研究。进一步对纳入患者的生存情况进行分析发现，Notch1阳性、PTEN阴性的NSCLC患者36个月累积生存率低于Notch1阴性、PTEN阳性的NSCLC患者，提示Notch1、PTEN与NSCLC患者预后有关，二者具有评估NSCLC患者预后的潜在价值，与金子等［14］及李晓燕等［18］的研究结果一致。此外，Notch1是影响NSCLC预后的独立危险因素，PTEN是影响NSCLC预后的独立保护因素，提示Notch1表达升高、PTEN表达降低均会使NSCLC患者发生不良预后的风险升高，及时测定肿瘤组织Notch1、PTEN表达有利于及早诊治和NSCLC预后的评估。

综上所述，NSCLC患者NSCLC组织中Notch1表达上调、PTEN表达下调，Notch1表达与PTEN表达呈负相关，且二者均与NSCLC患者预后关系密切，Notch1、PTEN有望作为临床评估NSCLC患者预后的辅助指标。后期需扩大样本、多角度探究Notch1、PTEN在NSCLC中的作用机制，为临床诊治NSCLC提供更有力证据。