Captiva EMR-Lipid技术结合UPLC-MS/MS快速筛查与确证鱼肉中多种农药残留

2022-10-13梁美艳钟水桥

食品安全导刊 2022年26期

梁美艳，钟水桥

（梧州市食品药品检验所，广西梧州 543000）

农药残留分析是对复杂混合物中痕量组分进行分析的技术，具有微量操作精细、灵敏度高以及特异性强的特点。目前能快速筛查与确证农药残留的检测方法主要有气质联用色谱法[1]、液质联用色谱法[2-3]和高分辨质谱法[4-5]。这3种检测方法抗干扰能力强，灵敏度、精密度、准确度都较高。液质联用技术已被广泛应用于蔬菜、水果、茶叶、肉类和中药材等产品的农药残留检测中，被检测的农药种类也越来越多[6-8]。近年来，新发展起来的Captiva EMR-Lipid固相萃取柱，通过空间位阻和亲水性的协同作用，对于C5及以上碳链化合物具有极强的选择性吸附，可以在去除干扰脂质的同时不吸附目标物，因而具有良好的净化效果。该净化技术主要用于兽药残留检测，应用于肉类中农药残留检测研究较少[9-12]。本研究以Captiva EMR-Lipid为净化手段，并用液相质谱联用仪对鱼肉中20种农药残留进行了快速筛查和定量分析。该方法的净化效果好、灵敏度高，能够满足鱼肉中多种农药筛查确证工作的需要。

1 材料与方法

1.1 材料

鱼肉，采购于当地超市。

1.2 试剂

乙腈（HPLC级），德国Merck公司；无水乙酸钠，国药集团化学试剂有限公司；EMR-Lipid（3 mL/300 mg），安捷伦科技有限公司；氧化乐果、涕灭威亚砜、多菌灵、久效磷、涕灭威砜、灭多威、噻虫嗪、杀虫脒、敌百虫、3-羟基克百威、噻虫胺、吡虫啉、乐果、氯噻啉、啶虫脒、硫环磷、涕灭威、磷胺、苯线磷亚砜和西玛津（纯度＞95.0%），德国Dr．Ehrenstorfer公司。

1.3 主要仪器设备

LC-1290/QQQ-6490液相质谱联用仪，Agilent technology；XA205DU电子分析天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；BSA3202S电子天平，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；T18 digital均质器，德国IKA；AllegraX-15R高性能通用台式离心机，美国贝克曼公司。

1.4 试验方法

1.4.1 标准溶液制备

①标准储备溶液的配制。分别精密称取20种农药标准品适量，加入少量丙酮振荡溶解后，用乙腈定容，配制成约1.0 mg·mL-1的20种农药单标储备液。②混合工作液的配制。准确量取上述储备液适量，乙腈逐级稀释，制备成浓度为37～2 032 ng·mL-1的混合标准工作液，4 ℃保存。

1.4.2 样品前处理

称取5 g试样，精确至0.01 g，于50 mL离心管中，加入10 mL 0.2%甲酸乙腈，均质5 min，加入2 g无水乙酸钠、4 g无水硫酸镁，振荡2 min，8 000 r·min-1离心5 min，取上清液2 mL过EMR-Lipid净化柱，收集洗脱液，再用2 mL乙腈淋洗，收集洗脱液，合并洗脱液，40 ℃氮吹至近干，用20%乙腈定容至2 mL，0.22 μm滤膜过滤，供LC-MS/MS测定。

1.4.3 仪器条件

（1）色谱条件。色谱柱：Agilent SB-C18（2.1×100 mm，1.8 μm）；进样量：1 μL；柱温：35 ℃；流动相：0.2%甲酸水（含5 mmol甲酸铵）（A相）和乙腈（B相）；梯度洗脱程序：0～1.50 min，20% B；1.50～8.00 min，20%→90% B；8.00～10.00 min，90% B；后运行时间：3 min；流速：0.30 mL·min-1。

（2）质谱参数。电喷雾离子源（ESI）；动态多反应检测DMRM模式；碎裂电压380 V。离子对参数见表1。

表1 测定20种农药的质谱参数条件

2 结果与分析

2.1 线性范围及定量限、检出限

试验选取阴性鱼肉作为空白基质，分别称取7份（每份5 g），按照样品前处理方法进行操作，氮吹近干后分别加入混合工作液10 μL、20 μL、40 μL、80 μL、160 μL、200 μL和400 μL，20%乙腈定容至2 mL后进行分析。结果表明，20种农药在各自范围内都具有良好的线性关系，相关系数r均大于0.995。记录各待测组分色谱峰面积，以各组分的进样浓度为横坐标（X），以各组分的峰面积为纵坐标（Y）进行回归分析，以10倍信噪比对应的浓度作为方法定量限（S/N=10），以3倍信噪比对应的浓度作为方法检出限（S/N=3），各农药的LOD及LOQ结果见表2。

2.2 回收率及精密度

在鱼肉空白样品中添加约1倍、2倍、5倍LOQ的20种农药混合标准溶液，按“1.4.2”方法进行前处理，每个浓度做3个平行样，得到方法平均回收率及精密度结果见表2。20种农药残留的平均回收率为84.0%～116.4%，RSD为0.2%～5.8%。

表2 20种农药线性范围、线性回归方程、相关系数、检出限、定量限、回收率及精密度（n=3）

2.3 讨论

2.3.1 色谱条件的优化

试验对常用流动相甲醇-水、甲醇-0.2%甲酸水、甲醇-0.2%甲酸水（含5 mmol·L-1甲酸铵）、乙腈-水、乙腈-0.2%甲酸水和乙腈-0.2%甲酸水（含5 mmol·L-1甲酸铵）等进行了考察，发现使用乙腈-0.2%甲酸水（含5 mmol·L-1甲酸铵）溶液体系时，各成分洗脱效果好、峰形对称以及灵敏度明显提高，故选择乙腈-0.2%甲酸水（含5 mmol·L-1甲酸铵）溶液作为流动相进行梯度洗脱。

2.3.2 质谱条件的优化

由于DMRM模式可以智能化地分配离子扫描时间，并且能够同时兼顾灵敏度与数据采集质量，适用于高通量、多组分化合物的分析，本试验采用动态多反应监测模式（DMRM）进行检测。

2.3.3 样品提取方法优化

样品提取液用0.2%甲酸乙腈进行均质提取，因在酸性提取环境中有利于各农药成分的稳定。试验分别考察了不同量上清液过EMR-Lipid净化柱对结果的影响。称取5 g试样，精确至0.01 g，于50 mL离心管中，加入10 mL 0.2%甲酸乙腈，均质5 min，加入2 g无水乙酸钠、4 g无水硫酸镁，振荡2 min，8 000 r·min-1离心5 min，分别取上清液2 mL、5 mL过EMR-Lipid净化柱，收集洗脱液，再用2 mL乙腈淋洗，收集洗脱液，合并洗脱液，40 ℃氮吹至近干，用20%乙腈分别定容至2 mL、5 mL。结果表明，2 mL提取液过柱后采用动态多反应监测（DMRM）进行检测，各成分回收率稳定且在允许范围内，而5 mL提取液过柱后部分成分的回收率达到150%以上，故选2 mL上清液过柱。