多发性骨髓瘤患者外周血中TrxR-1表达水平与预后的相关性

李晓冉

河南省新乡市第二人民医院检验科 453003

多发性骨髓瘤(Multiple myeloma，MM)是一种B淋巴细胞介导的液系统恶性肿瘤，也为一种克隆性浆细胞恶性增殖性疾病，多发于老年人，当前在人群中的发病率逐年增加[1]。多发性骨髓瘤的病理特征是浆细胞发生恶性增殖，导致正常骨髓阻滞被恶性肿瘤细胞增生浸润，使得患者在临床上出现贫血、肾脏损害、感染、高钙血症等症状[2]。现代研究表明多发性骨髓瘤是体液免疫及细胞免疫存在缺陷的疾病，但是具体的发病机制还不明确，不过体内外各种因素在多发性骨髓瘤的发病过程中共同发挥作用[3]。随着医学技术的发展，当前已有多种治疗方法应用于多发性骨髓瘤的治疗，包括中药治疗、化疗、放疗、靶向治疗、造血干细胞移植等，但是都存在一定的不足，很难持续提高患者生存率，很多患者的中位生存时间为3～5年，为此寻找合适的预后因素是当前临床研究的重点[4]。硫氧还蛋白还原酶-1(Thioredoxin reductase-1，TrxR-1)可与硫氧还蛋白还原型烟酰腺嘌呤二核苷磷酸(Reduced form of nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH)、硫氧还蛋白过氧化物酶(thioredoxin peroxidase)共同组成硫氧还蛋白系统，为调节细胞氧化还原状态的含硒酶，在调节机体抗氧化应激防御中发挥重要作用[5]。TrxR-1的高表达与肿瘤细胞的增殖、侵袭与化疗耐药性存在相关性，可导致线粒体氧化还原环境失衡，降低血管内皮生长因子表达，从而可抑制肿瘤细胞的凋亡率，能够促进癌症的进展[6-7]。本文具体探讨了多发性骨髓瘤患者外周血中TrxR-1表达水平与预后的相关性，希望明确TrxR-1在多发性骨髓瘤发生和发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2016年2月—2021年1月在我院血液科诊治的多发性骨髓瘤患者58例作为MM组，同期选择在本院的非多发性骨髓瘤患者58例作为对照组。纳入标准：MM组经临床确诊为多发性骨髓瘤；对照组经临床确诊为造血系统无明显异常；年龄20～75岁；本次检验前未经历任何治疗；初诊患者；我院伦理委员会批准了此次研究；一般临床基线资料和病理资料完整；患者或家属签署了知情同意书。排除标准：妊娠与哺乳期妇女；电话随访失联的患者；临床标本丢失的患者；合并其他部位恶性肿瘤者。两组一般资料对比差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。在MM组中，ISS分期：Ⅰ期32例，Ⅱ期18例，Ⅲ期8例；M蛋白分型：IgA型28例，IgG型24例，轻链型6例。

表1 两组一般资料对比

1.2 外周血TrxR-1检测 抽取所有患者的空腹静脉血2～3ml，4℃静置30min，1 000r/min离心10min，取上层血清。采用德国Qiagen公司的QIAamp Viral RNA Mini Kit试剂盒提取总RNA，使用Invitrogen公司的逆转录试剂盒逆转录为cDNA后，采用qPCR扩增检测TrxR-1表达水平。取2μl cDNA进行PCR扩增，反应体系共20μl，扩增条件为：预变性：95℃，15min；变性：95℃，10s；退火/延伸：55℃，60s，共40个循环，检测TrxR-1的相对表达水平。检测引物由上海生工公司设计合成，引物序列：正链5’-TTTAAGCGGCGCTCAGTCAATTCC-3’，反链5’-GGGGCCCTAGCGGTCTGTTCCCTTAGG-3’。

1.3 预后调查 所有患者都给予含硼替佐米的综合方案进行连续治疗，电话、微信与门诊随访追踪入组多发性骨髓瘤患者的结局，随访截止时间至2021年7月1日，追踪的终点事件为患者死亡，排除非原发病所致的死亡，比如心肌梗死、车祸意外等。同时调查所有患者的一般资料、血常规指标与骨髓瘤患者的病理特征等。

1.4 统计学方法 采用Microsoft Excel和SPSS22.00软件对本研究所有数据进行分析，计量数据以均数±标准差表示，对比用t检验或方差检验，计数数据以百分比表示，对比用χ2检验，相关性分析采用Spearman分析，使用Cox回归分析检测多因素状况，检验水准为α=0.05。P<0.05时差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组外周血TrxR-1表达水平对比 MM组的外周血TrxR-1相对表达水平(2.78±0.33)高于对照组(1.04±0.14)(t=13.742，P=0.000)。

2.2 不同病理特征多发性骨髓瘤患者的外周血TrxR-1表达水平对比 不同ISS分期与M蛋白分型的多发性骨髓瘤患者外周血TrxR-1表达水平对比差异都有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 不同病理特征多发性骨髓瘤患者外周血TrxR-1表达水平对比

2.3 预后情况 所有患者随访到2021年7月1日，平均随访时间为(29.38±1.58)个月，死亡18例，死亡率为31.0%，死亡患者的外周血TrxR-1表达水平(4.19±0.22)高于生存患者(2.01±0.32)(t=14.204，P=0.000<0.05)。

2.4 相关性分析 在MM组中，Spearman分析显示外周血TrxR-1表达水平与预后死亡存在正相关性(r=0.682，P=0.000)，Cox回归分析显示外周血TrxR-1表达水平为影响多发性骨髓瘤患者预后死亡的独立危险因素(P<0.05)。见表3。

表3 多发性骨髓瘤患者外周血中TrxR-1表达水平与预后的相关性(n=58)

3 讨论

多发性骨髓瘤约占血液系统恶性肿瘤的10.0%，在我国的发病率低于西方国家与非洲国家，多发生于老年人，发病的中位年龄是65岁左右[8]。多发性骨髓瘤的主要治疗方法为化疗，主要治疗药物为硼替佐米。但是该病患者仍然是不可治愈的，患者最终将死于多发性骨髓瘤或者多发性骨髓瘤的一系列治疗并发症[9]。现代研究表明多发性骨髓瘤的临床表现差异性较大，但是其预后存在明显差异，这几种差异性可能来源于机体骨髓瘤细胞生物学、骨髓微环境等异常状况，也为早期预测患者的预后提供重要价值[10]。

TrxR-1是维持细胞内氧化还原平衡的重要因子，具有调节细胞氧化还原作用。TrxR-1在多数恶性肿瘤中呈现高表达状况，其表达程度与患者的病理特征、局部淋巴结转移存在相关性[11]。TrxR-1主要分布在细胞质，TrxR-1缺乏可导致线粒体氧化还原环境失衡，造成缺氧诱导因子1信号通路受损，能抑制自身的抗氧化作用，降低血管内皮生长因子表达，能抑制肿瘤细胞的增殖，促进肿瘤细胞的凋亡[12]。本研究显示，MM组的外周血TrxR-1相对表达水平高于对照组(P<0.05)；不同ISS分期与M蛋白分型的多发性骨髓瘤患者外周血TrxR-1表达水平对比差异都有统计学意义(P<0.05)，表明多发性骨髓瘤患者多伴随有外周血TrxR-1的高表达，且与患者的病理特征存在相关性。当前也有研究表明，TrxR-1在恶性黑色素瘤、结直肠癌、甲状腺癌中都呈现高表达，可促进肿瘤细胞增殖与侵袭[13-14]。

近年来随着免疫调节剂，蛋白酶体抑制剂在临床上的应用，多发性骨髓瘤患者的生存期有所延长，但是3年生存率一直在70.0%左右，5年生存率在50.0%左右，其中细胞遗传学异常对生存具有重要意义[15]。本研究显示，所有患者随访到2021年7月1日，平均随访时间为(29.38±1.58)个月，死亡18例，死亡率为31.0%，死亡患者的外周血TrxR-1表达水平高于生存患者(P<0.05)。TrxR-1有促癌作用，其过表达能够促进恶性肿瘤细胞的生长和转移，也可以作为判断进展期恶性肿瘤预后的指标。抑制TrxR-1表达能够诱导恶性肿瘤细胞凋亡增加。当前也有研究表明TrxR-1介导了恶性肿瘤细胞的治疗效应，可降低肿瘤细胞的放射治疗敏感性[16]。

随着医学技术的发展，多发性骨髓瘤患者的生存期有所延长，但是治愈率一直比较低，为此在临床上还需要探索新的治疗靶标与方法[17]。本研究Spearman分析显示多发性骨髓瘤外周血TrxR-1表达水平与预后死亡存在正相关性(r=0.682，P=0.000)，Cox回归分析显示外周血TrxR-1表达水平为影响多发性骨髓瘤患者预后死亡的独立危险因素(P<0.05)。从机制上分析，Trx系统是抗氧化应激的重要防御机制，参与了多发性骨髓瘤中的氧化还原与氧化应激损伤过程，检测多发性骨髓瘤中TrxR-1表达水平可作为预测预后的重要指标之一，也可反映患者的病情程度[18]。本研究也存在一定的不足，随访时间较短，纳入患者样本数量较少，相关性分析比较浅，将在后续研究中进行探讨。

综上所述，TrxR-1在多发性骨髓瘤外周血表达明显升高，其高表达促进了多发性骨髓瘤的发生、发展，可作为预测多发性骨髓瘤预后的重要指标之一。