升阳益胃汤对慢性胃炎小鼠胃组织病理变化及血清IL-2、IL-6的影响

周永麒，周文龙，钱诗维，周佳欣，孙祝美，郭春荣，郑小宇，董 璐，陈 丹

(上海中医药大学教学实验中心·上海 201203)

升阳益胃汤来源于李东垣《脾胃论》，适用于脾胃虚弱、阳气不升、湿郁之胃痞病。该方具有健脾益气、升阳祛湿的功效，临床使用升阳益胃汤治疗慢性胃炎具有较好的疗效[1]。实验研究也发现，该方对慢性胃炎大鼠Bcl-2、Bax等蛋白具有调节作用，从而对胃炎具有治疗作用[2]。本项目拟在以往研究的基础上，通过复制小鼠慢性胃炎模型，运用升阳益胃汤干预，观察小鼠胃组织病理变化，ELISA检测血清IL-2、IL-6水平，为该方治疗慢性胃炎提供基础实验依据。

1 材料

1.1 动物 健康雄性ICR小鼠40只，9周龄，体质量20～25 g，由上海中医药大学动物实验中心提供，实验动物许可证号：SYXK(沪)2020-0009，饲养于屏障环境中，温度控制在20～26 ℃，相对湿度控制在40%～70%。

1.2 药物与试剂 升阳益胃汤(黄芪30 g，半夏9 g，党参10 g，炙甘草10 g，独活10 g，防风10 g，白芍30 g，羌活10 g，橘皮12 g，茯苓30 g，柴胡10 g，泽泻10 g，炒白术10 g，黄连6 g)，将中药加水浸泡1 h，头煎加水为总药量的10倍，二煎加水为总药量的4倍，取汁去渣，合并两次药汁，蒸发浓缩至含生药1 g/mL，备用。 小鼠IL-2 ELISA试剂盒：博士德生物公司，货号EK0399；小鼠IL-6 ELISA试剂盒：博士德生物公司，货号EK/0411；2%水杨酸钠：国药集团有限公司；氢氧化铝：国药集团有限公司。

1.3 主要仪器 石蜡切片机：莱卡仪器有限公司；自动脱水机：莱卡仪器有限公司；自动包埋机：莱卡仪器有限公司；生物显微镜：麦克奥迪有限公司；酶标仪：Biotek公司。

2 方法

2.1 动物分组、造模及给药 将小鼠40只随机均分为4组，正常组(10只)、模型组(10只)、西药组(10只)、升阳益胃汤组(10只)。除正常组外，每天予小鼠2%水杨酸钠溶液2 mL灌胃进行造模，小鼠前3周予正常饮食，后3周予单日禁食，双日足量进食，以结合饥饿饱餐因素，共6周[3]。第45天起，升阳益胃汤组及西药组分别给予中药汤剂(10 g/kg)、氢氧化铝混悬液(0.33 mg/kg)，(给药剂量由动物与人的等效剂量换算所得)[4]，每天灌胃1次，共30 d；正常组及模型组灌服等量生理盐水，每天1次，共30 d。

2.2 观察指标

2.2.1 胃组织病理形态学观察 末次给药后，禁食24 h，打开腹腔，取出全胃，沿胃大弯剪开后取胃组织，放入4%多聚甲醛，脱水、透明石蜡包埋，切片(5 μm)，常规HE染色，置于光镜下观察胃组织病理形态学变化。

2.2.2 血清IL-2、IL-6检测 采用酶联免疫吸附法(ELISA)。空白孔加标准品和标本稀释液，其余相应孔中加小鼠血清标本(100 uL/孔)。将其置于36 ℃孵箱孵育90 min，洗板5次。空白孔加生物素化抗体稀释液，其余孔加入生物素化抗体工作液(100 uL/孔)。用新封板胶纸封住反应孔，置于36 ℃孵箱孵育60 min，洗板5次。空白孔加酶结合物稀释液，其余孔加入酶结合物工作液(100 uL/孔)。用新封板胶纸封住反应孔，置于36 ℃孵箱，避光孵育30 min。打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序，洗板5次。加显色底物100 uL/孔，避光36 ℃孵箱，避光孵育15 min。加入终止液100 uL/孔, 混匀后即刻测量细胞因子IL-2、IL-6各自 OD450 值。

3 结果

3.1 各组小鼠胃组织病理形态学变化 胃组织HE染色病理结果显示:正常组胃黏膜完整，未见明显炎性病理改变。模型组胃黏膜有较多炎性细胞浸润，黏膜及腺体数量减少，黏膜形态改变。升阳益胃汤组及西药组炎症程度明显减轻。见图1。

图1 各组大鼠胃黏膜组织病理观察(HE，×400)

3.2 各组小鼠血清IL-2、IL-6检测结果 见表1。

表1 各组小鼠血清IL-2、IL-6水平比较

4 讨论

慢性胃炎是消化系统的常见疾病，其发病率逐年升高，在各种慢性疾病中占首位[5]。现代医学认为慢性胃炎是由多种病因引起的胃黏膜慢性炎症。由于其病因复杂，西医学在其治疗方案上仅以针对病因的治疗为原则，远期效果不理想。中医药在缓解慢性胃炎患者临床症状及改善胃黏膜病理形态方面具有显著优势[6-7]。中医认为慢性胃炎归属于“胃脘痛”“胃痞”等范畴，脾胃虚弱是基本病机[8]，所以补益脾胃是中医治疗慢性胃炎的基本治法。脾主运化，脾虚运化失职，痰湿内生，日久化热，痰湿或湿热内蕴，中焦气机升降失常，表现为纳差、脘腹胀满、嗳气、恶心、反酸等症状，本虚标实、虚实夹杂是慢性胃炎的病机特点[9]。升阳益胃汤来源于李东垣《脾胃论》，适用于脾胃虚弱、阳气不升、湿郁生热之证。其补中有散，发中有收，是使气足阳升，正旺邪退之良方。经临床使用，对于治疗慢性胃炎患者具有良好的临床疗效[10]。方中使用人参、白术、甘草补脾养胃；柴胡、防风、羌活、独活升脾胃清阳；半夏、陈皮、茯苓、泽泻、黄连泻湿热而降浊阴；从而达到补益脾胃、益气升阳的功效[11]。

本实验病理结果显示升阳益胃汤组胃黏膜炎性细胞浸润明显减少，黏膜及腺体数量较模型组增加，黏膜形态较完整。表明升阳益胃汤可以有效保护胃炎小鼠的胃黏膜，减少胃部充血、水肿。

IL-2主要由Th1细胞产生,是引起T细胞增殖的主要细胞因子，可提高T细胞的数量和功能，增强机体的免疫功能[12]。本实验中慢性胃炎小鼠IL-2 的表达与正常组相比明显降低(P<0.05)，表明模型小鼠免疫功能下降；升阳益胃汤组小鼠血清IL-2 的表达上升，表明升阳益胃汤可以提高慢性胃炎小鼠免疫功能。

IL-6在慢性胃炎的发生发展过程中发挥着重要作用，是一种多效促炎细胞因子，参与多种生物学过程[13]。本实验中慢性胃炎小鼠模型组血清IL-6水平与正常组相比提高(P<0.05)，升阳益胃汤组小鼠血清IL-6表达下降。

综上，升阳益胃汤能有效地改善慢性胃炎小鼠胃组织病理变化，减轻胃部炎症反应，并通过调节IL-2和IL-6等炎症因子而改善胃部病变达到治疗作用。