长链非编码RNA MYCNOS预测脓毒症合并急性心力衰竭患者发生主要不良心血管事件的价值研究

刘效锋 邵碧波

1 鄂东医疗集团黄石市中心医院（湖北理工学院附属医院）急诊医学科，黄石 435000；2 肾脏疾病发生与干预湖北省重点实验室，黄石 435000

脓毒症是一种全身性炎性反应综合征，通常发生在严重烧伤、创伤和手术的患者身上。患者表现为呼吸急促、心动过速、溶血性贫血、发烧或体温过低、血小板或白血球计数的变化、细胞数的变化、组织损伤、脓毒性休克等一系列症状，最终发展为多器官功能障碍综合征或多系统器官衰竭。尽管脓毒症治疗方法不断改进，但由于人口老龄化等因素，其发病率和病死率仍在上升。一项流行病学数据显示，全球脓毒症的发病率为约为0.45%［1］，远超心肌梗塞的发病率［2］，甚至超过前列腺癌、乳腺癌和肺癌发病率的总和［3］。据估计，全世界每年有超过1 800万例脓毒血症，其总死亡率在30%～50%之间［4］。脓毒症不仅带来了巨大的社会负担，由于其造成了全身多处器官损伤，其治疗也是临床较为棘手的问题。临床上脓毒症合并急性心力衰竭的病例并不少见［5］，研究显示急性心力衰竭有不低比例的患者发生主要不良心血管事件（major adverse cardiovascular events，MACE），而脓毒症无疑升高了MACE的发生率而进一步导致患者较差的预后［6］。长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）在脓毒症以及心力衰竭的发生、发展和预后中具有重要作用［7-8］，而目前关于lncRNA对脓毒症合并急性心力衰竭患者发生MACE的预测价值研究罕见。本研究拟探讨外周血中lncRNA MYCNOS对于脓毒症合并急性心力衰竭患者发生MACE的预测价值。

资料与方法

1、一般资料

选取2019年3月至2022年1月在鄂东医疗集团黄石市中心医院急诊科、ICU和心内科诊断为脓毒症伴急性心力衰竭的患者177例，其中男125例，女52例；年龄50～88（61.77±6.14）岁。纳入标准：（1）脓毒症诊治均符合《中国脓毒症/脓毒性休克急诊治疗指南（2018）》［9］的标准；（2）急性心力衰竭诊治均符合《中国心力衰竭诊断和治疗指南2018》［10］的标准。排除标准：（1）病态窦房结综合征、心房颤动和急性ST段抬高型心肌梗死等严重心脏病；（2）重度肝功能损害；（3）合并癌症、严重自体免疫性疾病和血液疾病。所有入组研究患者或监护人均签署知情同意书。鄂东医疗集团黄石市中心医院伦理委员会批准本研究。

2、方法

2.1、资料收集医院电子病历系统收集所有入组患者的一般资料，包括年龄、性别、体质量指数（BMI）、糖尿病、冠心病、高血压、高脂血症、冠心病和卒中病史，以及慢性心功能不全和肾功能不全等资料。

2.2、实时定量聚合酶链反应所有患者于入院第1天采集2 ml外周静脉血。使用实时定量聚合酶链反应方法检测lncRNA MYCNOS相对表达量：采用TRIzol试剂盒（美国赛默飞）提取总RNA，以GAPDH（中国三工生物科技有限公司）为内参；反应程序：95℃10 min，95℃15 s，60℃60 s，共40个循环。采用2-△△ct方法检测其相对表达水平。

2.3、随访通过手机电话、通讯软件和门诊复诊等方式对患者进行随访。随访截止时间为2022年2月1日，随访截止的终点事件为患者发生MACE。

3、统计学处理

采用SPSS 19.0和R语言软件进行统计学分析。服从高斯分布的计量资料数据用均数±标准差（±s）表示，不服从高斯分布的计量资料则用M（P25，P75）表示，组间比较分别采用独立样本t检验和秩和检验；计数资料用百分比表示，组间比较行χ2检验；相关性分析采用Pearson相关分析；运用Cox回归分析发现脓毒症合并急性心力衰竭患者发生MACE的独立危险因素，受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve，ROC）评估各独立危险因素对脓毒症合并急性心力衰竭患者发生MACE的预测效能；差异有统计学意义标准为P＜0.05。

结 果

1、两组一般临床资料

在随访期间，177例患者再发卒中1例、恶性心律失常1例、复发心绞痛6例、急性心力衰竭11例、心肌梗死3例和心源性或全因死亡10例。32例MACE患者和145例未发生MACE患者的在性别、BMI、糖尿病、冠心病、高血压、高脂血症、慢性肾功能不全、慢性阻塞性肺疾病（3～4级）、急性生理学与慢性健康状况评分系统（APACHEⅡ）评分、序贯器官衰竭评分系统（SOFA）评分、舒张压（DBP）、心率、血糖、降钙素原、左心室收缩末期容积（LVESV）、左心室舒张末期内径（LVEDD）、动脉血气分析各指标和机械通气占比之间比较差异均无统计学意义（均P＞0.05），MACE患者左心室射血分数（LVEF）、慢性心功能不全占比低于非MACE患者（均P＜0.05），外周血C反应蛋白（CRP）值、N末端B型脑钠肽前体（NTproBNP）、中性粒细胞/淋巴细胞比值（NLR）、机械通气时间、住ICU时间、住院时间和外周血中lncRNA MYCNOS相对水平高于非MACE患者（均P＜0.05），见表1。

2、脓毒症伴急性心力衰竭患者发生MACE的独立危险因素

因变量（赋值：发生=0，未发生=1）：患者在随访期间是否发生MACE；自变量为表1中的所有变量，连续变量原值代入，分类变量赋值如下。性别：男=0，女=1；糖尿病、冠心病、高血压、高脂血症、慢性心功能不全、卒中、慢性肾功能不全和慢性阻塞性肺疾病（3～4级）：是=0，否=1。单因素Cox回归分析结果显示，年龄、慢性肾功能不全、CRP、NLR、LVEF、机械通气时间、住院时间和lncRNA MYCNOS是脓毒症伴急性心力衰竭患发生MACE的影响因素（均P＜0.05）（表2，图1）。进一步将单因素Cox回归分析中P＜0.05的因素进行多因素Cox回归分析，结果显示，高比值的NLR和相对含量较高的lncRNA MYCNOS是脓毒症伴急性心力衰竭患者发生MACE的影响因素（均P＜0.05）（表3，图2）。

表3 177例脓毒症合并急性心力衰竭患者发生MACE的多因素Cox回归分析

图1 177例脓毒症合并急性心力衰竭患者发生MACE的单因素Cox回归分析森林图

图2 177例脓毒症合并急性心力衰竭患者发生MACE的多因素Cox回归分析森林图

表1 有无发生MACE的脓毒症合并急性心力衰竭患者的一般临床资料

表2 177例脓毒症合并急性心力衰竭患者发生MACE的单因素Cox回归分析

3、lncRNA MYCNOS与脓毒症伴急性心力衰竭患者发生MACE的独立危险因素的相关性分析

相关性分析结果显示，177例脓毒症伴急性心力衰竭患者lncRNA MYCNOS与NLR呈 正 相 关 性（r=0.412，P＜0.001）。

4、ROC

ROC结果显示，NLR诊断脓毒症伴急性心力衰竭患者发 生MACE的 截 断 值 为2.935，AUC为0.880，95%CI为0.806～0.955；lncRNA MYCNOS诊断患者发生MACE的截断值为1.829，AUC为0.976，95%CI为0.951～1.000；两者联合为提示截断值为4.285，AUC为0.868，95%CI为0.794～0.942；lncRNA MYCNOS具有较好的诊断价值（图3）。

图3 NLR及lncRNA MYCNOS诊断177例脓毒症伴急性心力衰竭患者发生MACE的ROC

讨 论

本研究结果显示，随访期间，177例脓毒症伴急性心力衰竭的患者有32例发生患者MACE，近似于马良等［5］的研究中的发生比例（20.6%），这无疑严重威胁着患者的生命安全。对于此类患者，应该建立风险评估模型，以期筛选出发生MACE的高危人群，进而采取个体化的治疗方案，以期改善此类患者的预后。但针对脓毒症合并急性心力衰竭的患者，目前对其预后及发生MACE的临床预测模型研究不多，且特异性的生物标志物欠缺。因此，临床上亟需建立此类患者预后评估模型，并寻求更加灵敏且有效的生物标志物。

lncRNA是一类长度大于200 nt而不翻译成多肽的RNA，大量的研究表明，lncRNA在各种生物过程，如细胞免疫、线粒体免疫、线粒体功能障碍和细胞凋亡等中起着重要的作用，已逐渐成为包括脓毒症、急性心力衰竭在内的许多疾病预后的生物标志物［11-13］。许多研究也明确了lncRNA在脓毒症和急性心力衰竭中的作用机制。如在脓毒症中，lncRNA SNHG3表达上调，且通过体外实验其能够靶向抑制miR-410-3p的表达，继而促进了脓毒症血管内皮细胞的增殖［14］。林 润 等［15］通 过 体 外 和 体 内 实 验 发 现lncRNA A30P01029806通过阻断核因子（NF）-κB信号通路，减轻脓毒症的肺损伤。在急性心力衰竭中，一项体外研究发现，lncRNA LINC00152通过诱发梗塞心肌纤维化，最终加重心力衰竭的严重程度［16］。但目前lncRNA同脓毒症合并急性心力衰竭的研究不多。前期实验中，本研究通过数据分析，选取GEO数据库中的GSE89376芯片（12名正常人，12例脓毒症患者）作为分析对象，选取lncRNA MYCNOS作为目标lncRNA。lncRNA MYCNOS在胶质瘤、肝细胞癌等多种肿瘤中均表现为癌基因［17-18］。尽管有一篇生信分析的研究发现其在脓毒症患者外周血中含量上升［19］，但lncRNA MYCNOS在脓毒症中的功能以及作用机制缺乏临床和基础实验研究。本研究结果显示，高水平lncRNA MYCNOS为脓毒症合并急性心力衰竭患者发生MACE的独立危险因素，且诊断价值较好（AUC 0.976），诊断价值高于NLR以及lncRNA MYCNOS联合NLR。lncRNA MYCNOS在卵巢癌等肿瘤中通过靶控miRNA而影响肿瘤细胞的活力［20］，但其在脓毒症以及急性心力衰竭中的作用机制有待课题组进一步研究。许多研究已经发现NLR同脓毒症和急性心力衰竭的预后以及病情严重程度密切相关［21-22］。本研究也发现高NLR是脓毒症合并急性心力衰竭发生MACE的独立危险因素。且相关性分析显示lncRNA MYCNOS同NLR呈正相关关系（P＜0.05）。NLR是临床上常用的非特异性炎性反应标志物，NLR的升高表明中性粒细胞活化状态加强。一项研究显示NLR升高导致中性粒细胞在动脉粥样硬化患者的动脉斑块聚集，导致斑块破裂，从而导致血栓形成［23］，这也可能是本研究发现NLR是患者发生MACE独立危险因素。

lncRNA MYCNOS对于脓毒症伴急性心力衰竭患者发生MACE有良好的预测价值，但仍需课题组进一步完成细胞和体内实验，明确lncRNA MYCNOS在脓毒症伴急性心力衰竭中的具体作用机制。同时扩大样本量并进行多中心研究，以期进一步提高本研究的循证医学级别，继而为此类患者的临床预后提供一定的指导价值。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突