钙结合蛋白S100A6、结缔组织生长因子表达水平与肺腺癌患者临床病理特征的相关性研究

马晓艳

河南省平顶山市第一人民医院 467000

肺癌为常见恶性肿瘤，发病率、死亡率均位于我国恶性肿瘤首位，近年来仍呈逐年递增趋势。肺癌包括小细胞肺癌、大细胞癌、鳞癌、腺癌等，其中以肺腺癌最为常见，约占肺癌的40%，由于肺腺癌早期无明显症状，多数患者确诊时病情已经恶化[1-2]。当前肺腺癌的治疗临床效果一般，这可能是由于癌细胞中基因数目表达较多，因此临床亟需找寻新型分子作用靶点作为肺癌诊断及治疗的依据。研究指出，不同肿瘤调控蛋白表达可影响肺部腺体上皮细胞增殖、侵袭，参与肺腺癌发生、发展[3]。S100A6属于钙结合蛋白家族成员，可结合钙离子分解上皮细胞间质，提升癌细胞扩散、变形能力；结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor，CTGF)属生长因子CCN基因家族成员，其可对肿瘤生长、迁移具有抑制作用[4-5]。本文选取我院98例肺腺癌患者作为观察对象，旨在探究CTGF、S100A6的表达与其临床病理特征关联性。报道如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料 本研究经我院医学伦理委员会审核通过。选取2018年1月—2021年1月我院98例肺腺癌患者作为观察对象，其中女39例，男59例，年龄42～70岁，平均年龄(54.69±5.76)岁；肿瘤直径：<2cm 52例、≥2cm 46例；淋巴结转移：有47例、无51例；临床分期：Ⅰ期21例、Ⅱ期30例、Ⅲ期28例、Ⅳ期19例；分化程度：高分化25例、中分化45例、低分化28例；远处转移：有35例、无63例。

1.2 选取标准 (1)纳入标准：均经病理组织检查确诊；未实施放化疗治疗；均签署知情同意书。(2)排除标准：伴其他恶性肿瘤；合并重要器官功能障碍；精神异常、认知功能障碍；免疫系统疾病；凝血功能障碍。

1.3 方法

1.3.1 免疫组织化学染色。取病理组织及癌旁边缘>5cm正常组织；试剂：兔抗人多克隆抗体CTGF(武汉博士德生物技术有限公司)、兔抗人S100A6多克隆抗体(美国NeoMarkers公司)，SP试剂盒、多聚-L-赖氨酸、PBS粉剂、浓缩型柠檬酸组织抗原修复液(pH 6.0)、液体DAB酶底物显色试剂盒，由福州迈新生物科技有限公司提供。采用10%甲醛对采集标本实施固定，并石蜡包埋，常规石蜡切片，采用二甲苯脱蜡，脱水(不同梯度酒精)，脱水后在柠檬酸盐溶液中静置20min，采用PBS清洗，加入3% H2O2，并在室温环境反应10min，采用PBS清洗3次，5min/次，将切片置于EDTA抗原修复液内(pH=9.0)，微波修复(10min)，室温冷却，PBS清洗3次，5min/次，加入CTGF或S100A6多克隆抗体，在温度为4℃条件下静置过夜，次日取出后采用PBS清洗3次，加入辣根过氧化物酶标记的二抗，温度设置为37℃，静置30min；再采用PBS清洗3次后加入二氨基联苯氨显色，清洗(蒸馏水)后，苏木素复染，乙醇脱水、二甲苯透明，中性树胶封片。镜下摄像、阅片。

1.3.2 阳性结果判定。高倍镜(×400)下随机选取5个视野，统计阳性染色细胞数量，依照染色程度、阳性细胞百分比计分，其中按染色程度将棕色、黄色、淡黄色、无色分别计3分、2分、1分、0分；将阳性细胞百分比>75%、51%～75%、10%～50%、<10%分别计4分、3分、2分、1分；将染色程度与阳性细胞百分比之积评估CTGF、S100A6阳性情况，乘积<3分为阴性，反之为阳性。

1.4 观察指标 (1)比较癌组织、癌旁正常组织CTGF、S100A6阳性表达率。(2)比较不同临床病理特征患者CTGF、S100A6阳性表达率。(3)分析CTGF、S100A6与临床病理特征的关联性。

1.5 统计学方法 采用SPSS22.0统计学软件处理数据，计数资料用[n(%)]表示,行χ2检验，相关性采用Spearman相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 癌组织、癌旁正常组织CTGF、S100A6阳性表达率 肺腺癌组织中S100A6阳性表达率高于癌旁正常组织，CTGF阳性表达率低于癌旁正常组织(P<0.05)，见表1。

表1 癌组织、癌旁正常组织CTGF、S100A6阳性表达率比较[n(%)，n=98]

2.2 不同临床病理特征患者CTGF、S100A6阳性表达率 分期为Ⅰ～Ⅱ期、肿瘤分化程度为高分化、无淋巴结转移、无远处转移患者CTGF阳性率较高，分期为Ⅲ～Ⅳ期、肿瘤分化程度为低分化、淋巴结有转移、远处有转移患者S100A6阳性率较高(P<0.05)，见表2。

表2 不同临床病理特征患者CTGF、S100A6阳性表达率[n(%)]

2.3 CTGF、S100A6与临床病理特征的关联性 经Spearman相关分析，S100A6与分期、淋巴结转移、远处转移呈正相关(r=0.635、0.621、0.648，P均<0.05)，与肿瘤分化程度呈负相关(r=-0.632，P<0.05)；CTGF与分期、淋巴结转移、远处转移呈负相关(r=-0.651、-0.632、-0.627，P均<0.05)，与肿瘤分化程度呈正相关(r=0.659，P<0.05)。

3 讨论

数据调查指出，肺腺癌恶性程度较高，治疗难度大，手术及综合治疗后5年内死亡率仍然较高，有研究指出，免疫靶向治疗对于辅助肺腺癌治疗具有一定帮助[6]。因此，对癌组织中肿瘤相关蛋白进行分析，可为肺腺癌免疫靶向治疗提供依据，并为临床病情评估提供一定帮助。

S100A6属钙结合蛋白家族成员，可结合钙离子，促使胶原蛋白酶激活，进而加快细胞间质分解，S100A6水平过多可使癌细胞突破基底膜能力提升，增加癌细胞对血管内皮细胞、间质细胞黏附能力，有助于癌细胞的增殖、分化[7]。既往研究指出，S100A6水平提升可显著促使肺癌发展，降低肺癌患者对化疗的敏感性[8]。本文中通过分析肺腺癌患者S100A6表达情况发现，肺腺癌组织中S100A6阳性表达率高于癌旁正常组织，由此表明S100A6高表达可能参与肺腺癌的病情进展。分析原因在于S100A6可通过促使上皮—间质转化过程，提升肺泡上皮细胞浸润能力，为肿瘤细胞生长提供有利环境，促使肿瘤发展[9]。同时，本文分析不同病理特征患者S100A6表达情况发现，分期为Ⅲ～Ⅳ期、肿瘤分化程度为低分化、淋巴结有转移、远处有转移患者S100A6阳性率较高；经Spearman相关分析发现，S100A6与分期、淋巴结转移、远处转移呈正相关(P<0.05)，与肿瘤分化程度呈负相关(P<0.05)，可见S100A6不仅参与肺腺癌的发生，还参与肺腺癌的侵袭、转移等多种生物学过程，因此通过监测S100A6表达有助于了解肺腺癌患者生物学特征。

CTGF属于CCN家族成员，为分泌性糖蛋白的一种，可参与调节细胞游走、增殖、黏附、有丝分裂等，同时还可影响新生血管形成、肿瘤、纤维化等作用[10]。相关研究指出，CTGF在不同类型肿瘤中表达并不一致，其中CTGF在急性淋巴细胞性白血病中呈高表达状态，而在肝癌患者中呈低表达状态[11]。本文通过分析肺腺癌患者CTGF表达情况发现，肺腺癌组织中CTGF阳性表达率低于癌旁正常组织，分期为Ⅰ～Ⅱ期、肿瘤分化程度为高分化、无淋巴结转移、无远处转移患者CTGF阳性率较高，与分期、淋巴结转移、远处转移呈负相关(P<0.05)，与肿瘤分化程度呈正相关(P<0.05)。既往有研究指出，CTGF可通过依赖CRMP-1蛋白对肺腺癌转移、迁移发挥抑制作用，另有研究指出，CTGF高表达可阻断ERK信号通路进而抑制肿瘤细胞生长[12]。结合既往研究及本文结果推测CTGF可作为肿瘤抑制因子抑制肺腺癌的发生发展，但具体相关机制尚未明确，可做后续研究重点。

综上所述，S100A6、CTGF在肺腺癌患者癌组织中存在异常表达，且与临床病理特征具有一定关系，通过检测其水平可对肺腺癌情况进行评估，有助于指导临床治疗。