SCNN1B、YAP1、ABCG2在非小细胞肺癌组织中的表达及相关性

丁家宝,高 鲲,张 倩

(秦皇岛市第一医院 1.胸外科；2.风湿免疫科,河北 秦皇岛066000)

非小细胞肺癌具有较高的恶性生物学特性，严重威胁着患者的生命健康[1]。目前临床上对于非小细胞肺癌的具体发病机制尚不完全明确，研究发现，非小细胞肺癌的发生与多种细胞因子表达相关[2]。既往研究证实，SCNN1B、YAP1、ABCG2均参与恶性肿瘤的发生发展[3-5]。本研究分析SCNN1B、YAP1、ABCG2在非小细胞肺癌组织中的表达，报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

2019年7月—2020年7月秦皇岛市第一医院收治的120例非小细胞肺癌患者，男70例，女50例，年龄40-67岁，平均年龄(50.83±10.15)岁，≥60岁30例，<60岁90例；肿瘤直径：≥3 cm 59例，<3 cm 61例；TNM分期：Ⅰ+Ⅱ期60例，Ⅲ+Ⅳ期60例；有淋巴结转移42例；分化程度：中低分化46例，高分化74例；病理类型：鳞癌61例，腺癌59例。另外收集通过手术切除的肺组织良性病变标本120例，其中包括炎性假瘤78例，肺结核31例，其他11例。患者及家属均知情同意本次研究，且经医院伦理委员会审核批准。

纳入标准：符合《中华医学会肺癌临床诊疗指南(2018版)》[6]中关于非小细胞肺癌的诊断标准，且经细胞学、病理学及影像学确诊，自愿参与本次研究，未经放化疗治疗。

排除标准：合并肝癌、胃癌等其他恶性肿瘤者；合并先天性免疫缺陷病者；合并糖尿病、高血压等严重内科疾病者；心、肾、肝等脏器功能障碍者；合并精神障碍、沟通障碍者。

1.2 样本采集

取所有患者手术切除的癌组织、良性病变组织，采用40 g/L多聚甲醛固定后行石蜡包埋、切片，作后续指标检测。

1.3 实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测SCNN1B、YAP1、ABCG2表达量

取所制备的癌组织、良性病变组织标本，提取组织RNA(Trizol法)，之后使用紫外分光光度仪、聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定RNA纯度，利用PCR试剂盒合成cDNA。逆转录：模板RNA 14 μl，Enzyme mix 2 μl，5×RT缓冲液4 μl，使用蒸馏水补至20 μl，之后在PCR检测仪上做42℃ 1 h、95℃ 5 min的处理后，将所合成的cDNA在-20℃下保存。反应体系：0.4 μl上下游引物，cDNA模板 8 μl，SYBRP Green mix 10μl，PCR Primer mix 2 μl。反应条件：95℃ 10 min；95℃ 10 s；60℃ 1 min；40个循环。以β-actin为内参，采用2-△△Ct方法计算表达量。SCNN1B上游引物序列：5’-GAGCGGGACCAAAGCAC-3’，下游引物序列：5’-GCAGCCAGACGATGTTATT-3’；YAP1上游引物序列：5’-ACCCACAGCTCAGCATCTTC-3’，下游引物序列：5’-TCATGGCAAAACGAGGGTCA-3’；ABCG2上游引物序列：5’-GGTCAGAGTGTGGTTTCTGTAGCA-3’，下游引物序列：5’-GTGAGAGATCGATGCCCTGCTTA-3’；β-actin上游引物序列：5’-CACTGTGCCCATCTACGAGG-3’，下游引物序列：5’-TAATGTCACGCACGATTTCC-3’。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 SCNN1B、YAP1、ABCG2在非小细胞肺癌组织、良性病变组织中的表达

如表1所示，与良性病变组织相比，癌组织中SCNN1B、YAP1、ABCG2表达量均较高，差异具有统计学意义(P<0.05)。

表1 SCNN1B、YAP1、ABCG2在非小细胞肺癌组织、良性病变组织中的表达

2.2 SCNN1B、YAP1、ABCG2与非小细胞肺癌患者临床特征的关系

如表2所示，SCNN1B、YAP1、ABCG2表达与非小细胞肺癌患者性别、年龄、病理类型无关，差异无统计学意义(P>0.05)；SCNN1B、YAP1、ABCG2表达与非小细胞肺癌患者肿瘤直径、TNM分期、有无淋巴结转移、分化程度相关，肿瘤直径≥3 cm、Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结转移、中低分化患者SCNN1B、YAP1、ABCG2表达量较高，差异具有统计学意义(P<0.05)。

表2 SCNN1B、YAP1、ABCG2与非小细胞肺癌患者临床特征的关系

2.3 SCNN1B、YAP1、ABCG2之间相关性分析

如图1所示，Pearson相关性分析显示，SCNN1B与YAP1之间呈正相关(r=0.301，P<0.001)；SCNN1B与ABCG2之间呈正相关(r=0.277，P=0.002)；YAP1与ABCG2之间呈正相关(r=0.372，P<0.001)。

图1 SCNN1B、YAP1、ABCG2之间相关性

2.4 SCNN1B、YAP1、ABCG2对非小细胞肺癌的预测价值

如表3所示，与SCNN1B、YAP1、ABCG2单项相比，3项联合对非小细胞肺癌的预测价值较高(P<0.05)。

表3 SCNN1B、YAP1、ABCG2对非小细胞肺癌的预测价值

3 讨论

SCNN1B属于一种具有稳定钠通道的β亚单位的编码基因，控制不同器官中水和电解质的跨上皮转运，参与恶性肿瘤的发生发展[7]。Karacan Küçükali G[8]、Fan P等[9]分别在其研究中发现SCNN1B与假性醛固酮增多症、高血压相关，另外柯东平等[10]认为SCNN1B与胃癌细胞上皮间质转化相关。本研究中，SCNN1B在非小细胞肺癌组织中表达升高，与雷锐等[11]研究中认为SCNN1B基因与非小细胞肺癌相关的研究结果一致。

临床研究显示，HIPPO信号转导通路属于由不同的蛋白质所组成的通路，其与组织再生、器官大小相关，参与恶性肿瘤的发生发展，而YAP1属于HIPPO信号转导通路的核心因子，在多种恶性肿瘤中表达均较高，与恶性肿瘤患者的转移和预后生存密切相关[12]。报道显示，正常活化的YAP1可修复生物体创伤，但在其处于超激活状态下时为异常高表达的状态，可在一定程度上提高细胞增殖能力，促进恶性肿瘤的形成[13]。目前已有多数研究显示，YAP1在多种恶性肿瘤中表达异常。本研究显示，YAP1在非小细胞肺癌组织中表达升高，且与多种病理特征相关，此结果提示YAP1可能参与非小细胞肺癌的发生发展。

ABCG2为一种近年来新发现的药泵蛋白，临床研究显示，ABCG2主要在内质网中生成，在正常肝细胞、小肠黏膜细胞、肾上皮细胞、神经细胞的腔膜面等均微量或者低表达，但在癌变细胞中表达明显升高[14]。胡凯等[15]在其研究中认为ABCG2在非小细胞肺癌中表达明显升高，参与此病的发生发展。本文结果显示，ABCG2在非小细胞肺癌高表达，且与患者肿瘤直径、TNM分期、有无淋巴结转移、分化程度相关，提示其可能参与此病的发生发展。