HER2在结直肠黏液腺癌的表达及其意义

丘佳明，俞琼珠，魏 炜，林小星，周国强

(常熟市第二人民医院 1.病理科；2.普外科，江苏 常熟215500)

结直肠癌是常见的消化系统恶性肿瘤，其中黏液腺癌约占结直肠癌总数的30%，相对于其他类型结直肠癌具有更高的侵袭性和转移性，5年生存率仅为60%[1]。人表皮生长因子受体2(HER2)基因是表皮生长因子受体家族中的一员，已成为判断乳腺癌、胃癌等恶性肿瘤预后和指导治疗的重要指标[2-3]。近几年，关于HER2在结直肠癌中表达和作用的研究认为其密切参与结直肠癌的发生和发展[4]。本研究通过检测HER2在结直肠黏液腺癌中的表达，分析其与黏液腺癌临床病理特征的关系，旨在为结直肠黏液腺癌的诊断、治疗和预后评估提供帮助。

1 材料和方法

1.1 一般资料

选取2017年1月至2020年12月到常熟市第二人民医院行结直肠癌根治手术而且病理诊断为黏液腺癌患者共132例，所选病例术前均未进行放化疗。其中男71例、女61例，中位年龄67.1岁；肿瘤位于左半结肠31例、右半结肠54例、直肠47例；浸润深度累及肌层23例、累及浆膜下层或浆膜层109例；淋巴结未转移79例、转移53例，TNM 分期Ⅰ期20例、Ⅱ期47例、Ⅲ期41例、Ⅳ期24例。

1.2 方法

1.2.1免疫组织化学方法检测 一抗试剂为上海基因科技股份有限公司生产的兔抗人C-erbB-2(Her-2/neu)(克隆号EP3)。二抗试剂使用仪器封闭配套试剂，为Leica Bond Polymer Refine Detection Kit试剂套装。操作流程按照抗体试剂盒说明书进行。每批检测设置阳性对照和阴性对照。结果判读参照《胃癌HER2检测指南》[5]和《胃癌HER2检测指南(2016版)》[6]，HER2免疫组化染色表达分为4级：(0)为无着色或<10%肿瘤细胞的细胞膜染色；(1+)为≥10%的肿瘤细胞出现微弱或隐约可见的膜染色；(2+)为≥10%肿瘤细胞有弱到中度的基底侧膜、侧膜或完全膜染色；(3+)为≥10%肿瘤细胞有基底侧膜、侧膜或完全膜的强染色。染色切片结果均由两名高年资病理科医师共同诊断。

1.2.2荧光原位杂交检测(FISH) 使用广州安必平医药科技股份有限公司生产的HER-2/neu(17q12)/TOP2A(17q21)/CSP17 多色染色试剂盒(荧光原位杂交法)，原位杂交仪为Leica Thermo Brite，荧光显微镜为Leica DM2000。操作流程按照试剂盒说明书进行。检测结果的判定标准为：选择扩增程度最高的区域，计数20个以上肿瘤细胞核的双色信号，并进行HER2信号总数与17号染色体着丝粒区(CEP17)信号总数的比值计算，比值≥2.2，判读为阳性，即HER-2信号扩增；若出现较多信号排列成簇或HER2与CEPl7信号比值明显>20时可不计算，直接判断为阳性；若比值<1.8，则判断阴性，即无HER2信号扩增。当比值在1.8-2.2之间时，再另计数20个肿瘤细胞核或由另一位医师计数，若比值≥2.0则判读为阳性，若比值<2.0则为阴性。

1.2.3HER2表达情况评估 所有病例均行免疫组化检测，免疫组化染色结果为0和1+的病例，判断为HER2阴性，无扩增，无需进一步做FISH检测；3+的病例判断为HER2阳性，有扩增，无需进一步做FISH检测；2+的病例为不确定，需进一步行FISH检测，FISH若阳性，则判断为HER2阳性，如FISH阴性，则判断为HER2阴性。

1.3 统计学方法

采用SPSS21.0统计学软件，各组间应用χ2检验进行比较，P<0.05具有统计学意义。

2 结果

132例均进行免疫组化HER2检测，染色结果为0(52例)(图1)和1+(22例)(图2)的病例判断为HER2阴性，共74例；3+的病例判断为HER2阳性(图3)，共28例；2+的不确定病例(图4)进行FISH检测，阳性6例(图5)、阴性24例。最终判定HER2在黏液腺癌阳性34例，阴性98例，阳性率为25.8%。各种临床病理因素下HER2的表达情况见表1。HER2的表达与浸润深度、淋巴结转移显著相关(P<0.05),与性别、年龄、肿瘤部位、远处转移、TNM分期无关。

图1 IHC方法检测HER2(阴性，×200)

图2 IHC方法检测HER2 (1+，×200)

图3 IHC方法检测HER2 (3+，×200)

图4 IHC方法检测HER2 (2+，×200)

图5 FISH方法检测HER2 (阳性)

3 讨论

HER2基因定位于17号染色体，具有酪氨酸激酶活性，通过激活RAS-RAFMEK通路和PI3K-AKT-mTOR通路参与多种肿瘤细胞的增殖、分化和血管生成等过程，并发挥重要作用，其可加速细胞有丝分裂，使细胞原本正常的增殖、分化过程失去平衡，最终转变为肿瘤细胞[7]。

表1 各种临床病理因素下HER2的表达情况

既往对结直肠癌发生HER2表达的研究中，结论差异较大[8-10]，扩增或过表达比例为1.6%-70.9%不等，最重要的原因是结直肠癌HER2判读标准目前尚未统一，其他还有样本量多少、人为主观判断差异、检测方法不同等因素。本研究中，HER2表达1+至3+的比例分别为16.7%、22.7%、21.2%，经过FISH检测，最终判定HER2在黏液腺癌阳性率为25.8%。目前，乳腺癌和胃癌的HER2检测和判读均有相应的指南[5-6，11]，阳性乳腺癌和胃癌患者从曲妥珠单抗、拉帕替尼等治疗中取得了良好疗效。而在结直肠癌中，尚未出台权威的统一标准。大部分学者研究认为免疫组化3+或免疫组化2+/FISH阳性为HER2扩增或过表达，证实KRAS野生型HER2扩增或过表达的结直肠癌从双靶抗HER-2治疗中获益明显[12]。

本研究中HER2的表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移呈显著相关，可以提示HER2的表达与结直肠黏液腺癌的预后不良相关。目前NCCN指南中，已经推荐KRAS野生型HER2扩增或过表达的结直肠癌患者接受曲妥珠单抗和拉帕替尼/帕妥珠单抗治疗。综上所述，下一步应进一步明确结直肠癌HER2阳性标准，以及在HER2阳性结直肠癌临床治疗上进行深入研究。