奎屯地区337例哈萨克族和1 000例汉族妇女宫颈人乳头状瘤病毒感染状况研究*

吕新玲，鲁 谨，陈慧芸，周志梅，郑 敏

1.新疆伊犁哈萨克自治州奎屯医院病理科，新疆 奎屯 833200；2.新疆石河子大学一附院妇科，新疆 石河子 832003；3.新疆伊犁哈萨克自治州奎屯医院妇科，新疆 奎屯 833200

目前研究已经证实人乳头状瘤病毒（HPV）是宫颈病变的主要病因，HPV 感染在不同国家、不同地区、不同民族存在差异，而且不同类型在宫颈病变中的致病性也有差异，目前已有大量有关汉族和维吾尔族妇女宫颈HPV感染的报道，而哈萨克族在此方面的报道很少，哈萨克族与汉族在此方面的对比研究较少，为了解本地区哈萨克族与汉族妇女宫颈HPV感染状况及优势，为宫颈病变的防治、高危人群的筛查、流行病学调查提供数据资料和参考，本研究对在样本医院妇科进行健康体检、有性生活、自愿接受宫颈HPV 筛査的哈萨克族和汉族妇女进行了宫颈HPV 检测，用PCR-反向点杂交法进行基因分型，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2012 年3 月—2018 年6 月在样本医院妇科门诊进行健康体检的人群中自愿参加HPV感染筛查、有性生活的337 例哈萨克族妇女，年龄18～69 岁，汉族妇女1 000 例，年龄18～76 岁，采集宫颈细胞学标本，进行HPV 分型检测，由经验丰富的技术人员进行操作。

1.2 标本采集

所有研究对象在检查前3 d 禁止进行阴道冲洗及阴道内用药，避开月经期，且妇检前24 h未发生性行为，用窥阴器暴露宫颈，用棉拭子擦除表面分泌物，将样本采样刷插入宫颈口鳞柱交界处，单方向旋转3～5圈，将采样刷头部放入洗脱管中，旋紧瓶盖，做好标识，放入-20 ℃冰箱保存，一周内完成检测。

1.3 仪器与试剂

亚能人乳头瘤病毒基因分型检测试剂盒（深圳亚能生物技术有限公司）可检测23 种HPV 基因型，包括17 种高危型：16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82 型，6 种低危型：6、11、42、43、81、83型；凯普基因扩增仪购自广东凯普生物科技股份有限公司，杂交仪为广州安必平DA8000 型。

1.4 实验步骤

（1）样本预处理、DNA 提取。（2）聚合酶链反应：用PCR扩增仪对提取的DNA进行扩增；引物采用的目的基因片段为HPVL1 基因，大小为452 bp。（3）杂交：扩增DNA 产物与膜条上的探针杂交，孵育，避光显色，具体操作步骤按试剂盒及仪器使用说明进行。（4）结果判读：实验结束后每张膜条上PC 位点均出现蓝色信号，除PC 位点阳性信号外，23 种HPV 基因型别位点上出现蓝色信号为阳性，可以是出现一个阳性信号的单一感染，也可以是出现两个及以上阳性信号的混合感染。

1.5 统计学方法

采用SPSS 13.0 软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差（）表示，组间比较采用t检验。计数资料用例数和百分比（%）表示，组间比较采用χ2检验。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两族妇女宫颈HPV、高危型HPV感染情况

有94 例哈萨克族妇女宫颈HPV 感染为阳性，总感染率为27.89%，高危型感染率为24.33%，除82、83型别外，其余21种均有检出；有251例汉族妇女宫颈HPV感染为阳性，总感染率为25.10%，高危型感染率为21.80%，23 种型别均有检出；两个民族妇女宫颈HPV总感染率、高危型感染率比较，差异无统计学意义（χ2=1.03、0.93，P＞0.05），见表1、表2。

表1 两族妇女宫颈HPV感染情况

表2 两族妇女高危型HPV感染情况

2.2 两族妇女宫颈HPV各亚型单一基因型感染分布情况

94 例HPV 阳性的哈萨克族妇女中，HPV 单一基因型感染62 例，占感染人数的65.96%，其中12 例为低危型单一感染，单一基因型感染最常见的亚型依次为52、16、56、81、18、53 型；251 例HPV 阳性的汉族妇女中，HPV单一基因型感染172例，占感染人数的68.53%，其中31例为低危型单一感染，单一基因型感染最常见的亚型依次为52、16、42、51、53、56型。

2.3 两族妇女宫颈HPV 多重（多种基因型）感染的分布情况

94 例HPV 阳性的哈萨克族妇女中HPV 的多重感染率为34.04%，大多数是HPV52、16 型与其他亚型混合感染，多为二重感染，其余为三重、四重感染，1例为六重感染，无单纯低危型混合感染；251 例HPV 阳性的汉族妇女中HPV 的多重感染率为31.47%，同样是HPV52、16 型与其他亚型混合感染，大多为二重感染，其余为三重、四重和五重感染，2例为单纯低危型混合感染。

2.4 两族妇女宫颈高危亚型HPV出现的频率

如表3所示，94例宫颈HPV 阳性的哈萨克族妇女中各高危亚型出现的频率总计为120 次，HPV52 在阳性观察对象中出现的频率最高，达到15.83%，其次为HPV16（15.00%）、HPV53（10.00%）、HPV51（9.17%）、HPV39（7.50%）/HPV56（7.50%）和HPV18（6.67%），251 例宫颈HPV 阳性的汉族妇女中各高危亚型出现的频率总计为302 次，HPV52 在阳性观察对象中出现的频率最高，达到25.5%， 其 次 为HPV16 （12.91%）、 HPV51 （8.94%）、HPV53 （6.62%）、HPV58 （6.29%）和HPV56（5.63%）/HPV68（5.63%）型。

表3 两族不同型别HR-HPV的检出情况 例（%）

2.5 两族妇女不同年龄组HR-HPV感染的分布情况

两族妇女按年龄分成5 组，分别比较HR-HPV 感染率在各年龄组分布情况，哈萨克族妇女不同年龄组HR-HPV感染率比较，差异有统计学意义（P＜0.05），哈萨克族妇女HR-HPV感染与年龄相关，在＜35岁年龄组明显高于其他年龄组；汉族妇女不同年龄组HR-HPV 感染率比较，差异无统计学意义（P＞0.05），汉族妇女HR-HPV 感染与年龄无关；HR-HPV感染在＜35岁组、35～40岁组，差异有统计学意义（P＜0.05），其余各年龄组HR-HPV 感染率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；哈萨克族妇女在＜35岁年龄组存在感染高峰，而汉族妇女在45～50 岁、＞50岁年龄组感染率较高，见表4。两族妇女低危型HPV 感染例数较少，共35例，且年龄分布较广。

表4 两族妇女不同年龄组HR-HPV感染分布情况

3 讨论

近年来大量研究显示，HPV 感染与宫颈癌的发生、发展密切相关，目前已有120 多种HPV 基因型被确定，与宫颈癌前病变及宫颈癌密切相关的高危型包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82，与女性生殖道良性湿疣性病变有关的低危型包括HPV6、11、42、43、81、83，本研究首次对新疆奎屯地区337 例哈萨克族、1 000 例汉族妇女宫颈23 种HPV感染状况进行了检测，对比分析如下。

337 例哈萨克族妇女HPV 总感染率为27.89%，其中高危型感染率为24.33%，高于新疆塔城地区哈萨克族（5.80%）［1］、新疆奎屯地区哈萨克族（16.25%）［2］、新疆哈萨克族（14.00%）［3］、新疆伽师县维吾尔族（10.30%）［4］、低于新疆维吾尔族（27.97%）［3］。1 000 例汉族妇女HPV总感染率为25.10%，其中高危型感染率为21.80%，高于新疆第四师汉族（19.21%）［5］、新疆塔城地区汉族（11.70%）［1］、新疆汉族（13.42%）［3］，也高于世界自然妇女人群水平（10.40%）［6］，高于在阳城、深圳和沈阳开展的以人群为基础的多中心研究（14.80%～16.80%）［7］，但是低于在乌鲁木齐开展的机会性宫颈癌筛查（30.30%）［8］，低于内蒙古地区（39.80%）［9］。本研究结果显示，两族宫颈HPV总感染率、高危型感染率比较差异无统计学意义，与陈志芳等［3］的报道一致，而刘迎春等［1］研究发现，汉族（11.70%）明显高于哈萨克族（5.80%），且差异有统计学意义，与本研究结论不一致，本组两族妇女宫颈HPV感染率、两族间的差异均与文献报道有差别，可能与HPV感染的地域、种族差异以及样本量的大小，纳入标准和排除标准不一致有关，本研究样本量较小，还待扩大样本量进行研究。

本研究两族妇女宫颈HPV 感染以单基因型感染为主，单基因型感染率分别为65.96%、68.53%；多重感染占34.04%、31.47%，两族病例多重感染率均低于陶萍萍等[10]的研究报道（44.60%），高于新疆奎屯地区哈萨克族（23.08%）［2］、新疆乌鲁木齐维吾尔族和汉族（21.30%）［8］，不同基因型HPV编码外壳蛋白的基因变异很大，几乎无交叉保护抗体，易造成高危型HPV 多重感染。有研究表明HPV 多重感染增加HPV 持续感染的时间，使其不易清除［11］，多型别混合感染对宫颈病变发展程度有潜在影响，促进宫颈病变进展［12］，然而有研究并不支持多重感染可促进宫颈病变的发展［8］，本研究有待后续继续研究多重感染与宫颈病变的关系。

国际癌症研究协会公布的15 种最常见的HPV 亚型依次为（递减）16、 18、45、 31、 33、 52、 58、 35、59、 56、 39、 51、 73、 68、 66，16亚型与宫颈癌相关度最高，在宫颈癌中感染率为57.4%， 18亚型感染居第二位，占12.6%～25.7%［13］，多数亚洲国家的研究认为HPV 58、 52 亚型居第三、四位［14］，李霓等[15]也认为HPV58、52 是继HPV16 型和18 型之后的重要型别，而也有学者认为我国宫颈癌感染以HPV16、58型为主，HPV18型感染率明显低于国外报道[16]，本研究显示，本研究两组观察对象无论单一感染、还是混合感染最主要的基因型别是52、16型，混合感染中，高危型哈萨克族出现频率依次为HPV52、16、53、51和39、56、18，汉族出现频率依次为HPV52、16、51、53、58 和56、68，虽然前两位均是52、16 型，但是汉族52 型占比明显高于哈萨克族，16 型则相差不大，两族前4位的基因型别基本一致，第5、6位则不同，18型感染率较低，以上结果不同于国际癌症研究协会的结果及文献报道，提示HPV 各亚型在两族感染谱不同，排序不同，可能52、16是本地区易感染的型别，对本地区的型别研究除16、18 型外，应重点关注对52 型别感染的研究，再次证实HPV感染型别存在地域、种族差异，将来广泛应用的二价和四价疫苗，只能预防覆盖范围内的感染，在本地区开展，能否起到广泛性预防作用还有待继续扩大样本量继续研究论证。

有文献报道性生活活跃的年龄组HPV 感染率高［17］，也有些文献报道HPV 感染与年龄无关［18］，谈佩华等［2］的研究结果显示新疆哈萨克族妇女在45～50 岁年龄段HPV感染率较高，但在不同年龄分组之间差异无统计学意义；狄丽努尔·热孜木等［4］研究认为新疆喀什伽师县维吾尔族妇女，年龄在30～34 岁的HPV 阳性较其他年龄段高，但各年龄段HPV 阳性率差异无统计学意义，王英红等［19］研究发现维吾尔族妇女HR-HPV 感染与年龄无关，而汉族妇女HR-HPV 感染在＜35 岁组显著高于维吾尔族，差异有统计学意义，汉族存在＜35 岁和45～50 岁组两个感染高峰；黄霞等［4］对新疆第四师20 107 名汉族妇女行HPV 检测，研究结果为HPV 阳性率高峰值在年龄在40～49 岁年龄组，虽各年龄组间HPV 阳性率差异均无统计学意义。本研究哈萨克族妇女HR-HPV 感染在＜35 岁、35～40岁年龄组明显高于其他年龄组，存在感染高峰，随着年龄的增高逐渐下降；而汉族妇女HR-HPV 感染虽然在各年龄组的差异无统计学意义，但在45～50 岁、＞50 岁年龄组感染率较高；哈萨克族妇女HR-HPV 感染在＜35岁组、35～40岁组显著高于汉族妇女。本研究与文献报道部分相符，哈萨克族在年轻妇女出现两个高峰，可能是由于年轻妇女性生活频繁，病毒持续感染，病毒负荷量高，免疫系统未被致敏，宿主免疫清除能力弱等多因素相互作用导致；汉族在45～50 岁、＞50 岁年龄组感染率较高，可能是因为围绝经期激素水平下降，对宿主的免疫系统调节产生较大影响，对HPV病毒的清除、抑制能力较弱，导致病毒持续感染。本研究结果再次显示HR-HPV 感染状况的地域、民族、年龄特点，在本地区针对HPV筛查和干预时，应加强对＜35 岁及35～40 岁年龄组哈萨克族人群和45～50岁及＞50岁年龄组汉族人群健康宣教。

本研究提示HPV52、16 亚型在两族中均居前2 位，其余均存在差异，且两个民族感染率、感染型别前几位与国内外其他研究也有不一致之处，HPV52在本地区两个民族中均居高位，可能系环境、遗传、内分泌、免疫等因素相互作用的结果，应加强监测，扩大样本量继续研究论证，未来尽可能找到对本地区起到广泛性预防的疫苗。